电子科大细胞生物学第七章真核细胞内膜系统蛋白质分选与膜泡运输教学课件.ppt
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- 电子科 细胞生物学 第七 真核细胞 内膜 系统 蛋白质 分选 运输 教学 课件
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1、电子科大细胞生物学第七章真核细胞内膜系统蛋白质分选与膜泡运输 用差速离心法分离细胞匀浆物组分,用差速离心法分离细胞匀浆物组分,先后除去细胞核、先后除去细胞核、线粒体线粒体、溶酶体、溶酶体、高尔、高尔基体和细胞质膜等细胞器或细胞结构后,基体和细胞质膜等细胞器或细胞结构后,存留在上清液中的主要是细胞质基质的成存留在上清液中的主要是细胞质基质的成分。生物化学家多称之为胞质溶胶。分。生物化学家多称之为胞质溶胶。1、细胞质基质的概念细胞质基质的概念成分极为复杂,按分子量大小大致可分三类:成分极为复杂,按分子量大小大致可分三类:2、化学组成、化学组成如水、无机离子(如水、无机离子(K+K+、Na+Na+、
2、Ca2+Ca2+、Mg2+Mg2+、Cl-Cl-等)和等)和溶解的气体。溶解的气体。(1)小分子类:)小分子类:如脂类、糖(葡萄糖、果糖、蔗糖等)、氨基酸、核如脂类、糖(葡萄糖、果糖、蔗糖等)、氨基酸、核苷酸及其衍生物。苷酸及其衍生物。(2)中分子类:)中分子类:(3)大分子类:)大分子类:如蛋白质、多糖、脂蛋白及如蛋白质、多糖、脂蛋白及RNARNA等。同时,也含有很多等。同时,也含有很多酶,特别是一些与大分子物质合成和参与主要代谢过酶,特别是一些与大分子物质合成和参与主要代谢过程所必需的酶。程所必需的酶。细胞质基质细胞质基质含酶含酶蛋白质合成:几乎所有参与蛋白质合成的氨基酸激酶。蛋白质合成:
3、几乎所有参与蛋白质合成的氨基酸激酶。核酸合成:核酸合成:所有使胸腺嘧啶核苷酸掺入到所有使胸腺嘧啶核苷酸掺入到DNADNA中必须中必须的酶,也有不少合成核酸所需要的酶。的酶,也有不少合成核酸所需要的酶。脂肪代谢的合成:脂肪代谢的合成:大部分脂肪酸合成的酶。大部分脂肪酸合成的酶。糖酵解及戊糖磷酸过程:这两个反应过程所需的酶。糖酵解及戊糖磷酸过程:这两个反应过程所需的酶。糖原代谢作用:合成和分解糖原的两个最重要的酶,即糖原代谢作用:合成和分解糖原的两个最重要的酶,即尿苷二磷酸葡萄糖尿苷二磷酸葡萄糖-葡聚糖葡萄糖转葡聚糖葡萄糖转移酶和葡萄糖磷酸化酶。移酶和葡萄糖磷酸化酶。(1 1)细胞质基质在生长时期
4、,由于质同化作用大于)细胞质基质在生长时期,由于质同化作用大于异化作用,故其体积增加,到一定程度就进行异化作用,故其体积增加,到一定程度就进行分裂。分裂。(2 2)细胞质基质是物质反应的场所。细胞内的一些)细胞质基质是物质反应的场所。细胞内的一些生化反应主要在细胞内外环境或主要细胞器的生化反应主要在细胞内外环境或主要细胞器的接触面进行,同时,也在整个细胞质内进行。接触面进行,同时,也在整个细胞质内进行。(3 3)细胞质基质的激应性。细胞质对外界环境的影)细胞质基质的激应性。细胞质对外界环境的影响,将产生不同的反应,如细胞质的运动、收响,将产生不同的反应,如细胞质的运动、收缩等特性。缩等特性。(
5、4 4)细胞质基质本身还具有外部运动和内部运动的)细胞质基质本身还具有外部运动和内部运动的特性特性。如变形虫伸出伪足和不断改变形状;胞如变形虫伸出伪足和不断改变形状;胞质环流等。质环流等。3、细胞质基质的生物学特性、细胞质基质的生物学特性(1 1)完成各种中间代谢过程完成各种中间代谢过程:如:如糖酵解过糖酵解过程、磷酸戊糖途径、糖醛酸途径等程、磷酸戊糖途径、糖醛酸途径等。蛋白质合成与脂肪酸合成也在细胞质蛋白质合成与脂肪酸合成也在细胞质基质中完成。基质中完成。(2 2)维持细胞形态、细胞运动、胞内物质维持细胞形态、细胞运动、胞内物质运输及能量传递等运输及能量传递等。这些这些与细胞质骨与细胞质骨架
6、相关架相关。(3 3)在)在蛋白质的修饰、蛋白质选择性的降蛋白质的修饰、蛋白质选择性的降解解等等方面也起重要作用。方面也起重要作用。4、细胞质基质的功能细胞质基质的功能 细胞基质一侧合成的磷脂可能借助phospholipd translocator(磷脂转位因子)/flippase(转位酶)使其从细胞基质一侧转移到ER腔中。以环化构象存在的信号肽与易位子组分结合并使孔道打开,信号肽穿入ER膜并引导肽链以袢环形式进入ER腔中,这是一个需GTP的耗能过程。高尔基的膜囊上存在微管马达蛋白(cytoplasmic dynein和kinesin)和微丝马达蛋白(myosin)。溶酶体的标志酶:酸性磷酸酶
7、。相互连接形成一个连续的内腔相通的膜性管道系统。由于内质网的驻留蛋白具有回收信号,即使有的蛋白发生逃逸,也会保留或回收回来,所以有人将内质网比喻成“开放的监狱”(open prison)。Bip为分子伴侣,可与Ca2+结合,属于热休克蛋白70家族成员,遍布ER中,进化上非常保守。如唾液酸转移酶、N-乙酰基葡萄糖胺半乳糖基转移酶、糖蛋白-半乳糖基转移酶、UDP-N-乙酰葡萄糖-糖蛋白N-乙酰基葡萄糖胺基转移酶。细胞内糖类合成的工厂。这些与细胞质骨架相关。1、网格蛋白包被小泡特定三肽序列为:Asn-X-Ser包被蛋白的装配是受控的;(3)新生肽的折叠与组装高尔基体聚集在微管组织中心(MTOC)附近
8、并在高尔基体膜囊上结合有类似动力蛋白的蛋白质,从而使高尔基体维持其极性。疏水中心的结尾由甘氨酸和丙氨酸等侧链较短的氨基酸残基组成。中间高尔基网(medial Golgi)(又称高尔基堆)受精过程中精子顶体其他酶类 其它重要的生理功能 细胞内膜系统概念:细胞内膜系统概念:细胞内,在结构、功能及发生上有一定联细胞内,在结构、功能及发生上有一定联系的膜性结构的总称。系的膜性结构的总称。内膜系统的区域化衍生形成各种内膜系统的区域化衍生形成各种细胞细胞器(器(organelles)一层单位膜围成的管状、泡状和囊状一层单位膜围成的管状、泡状和囊状的结构的结构。相互连接形成一个。相互连接形成一个连续的内腔相
9、连续的内腔相通的膜性管道系统通的膜性管道系统。在靠近细胞核的部位,。在靠近细胞核的部位,可与外层核膜相连可与外层核膜相连;在靠近质膜的部位,;在靠近质膜的部位,可与质膜内褶相连可与质膜内褶相连。第二节第二节 内内 质质 网网一、一、形态结构形态结构endoplasmic reticulum,ER 已分化细胞中,内质网较发达。已分化细胞中,内质网较发达。未分化细胞中,内质网较不发达,未分化细胞中,内质网较不发达,而游离核糖体却非常丰富。故而游离核糖体却非常丰富。故内质内质网发达与否可作为判断细胞分化程网发达与否可作为判断细胞分化程度和功能状态的一种形态学指标度和功能状态的一种形态学指标。粗面内质
10、网:粗面内质网:rough endoplasmic reticulum,rER二、基本类型二、基本类型光面内质网:光面内质网:smooth endoplasmic reticulum,sER 原核生物细胞内无原核生物细胞内无内质网,而由细内质网,而由细胞膜代行其某些类似职能。胞膜代行其某些类似职能。ER是细胞内是细胞内蛋白质与脂类合成蛋白质与脂类合成的基地的基地,几乎全部脂类和多种重要蛋,几乎全部脂类和多种重要蛋白都是在内质网白都是在内质网上上合成的。合成的。三三、ER的功能的功能rER主要合成外输性蛋白质。主要合成外输性蛋白质。1)分泌性蛋白质(外输性蛋白质)分泌性蛋白质(外输性蛋白质)2)
11、膜整合蛋白质)膜整合蛋白质(1)合成蛋白质合成蛋白质 3)内膜系统内膜系统构成的各种细胞器中的可溶性构成的各种细胞器中的可溶性蛋白蛋白包括质膜蛋白、驻留在包括质膜蛋白、驻留在rER、sER、高尔、高尔基体、溶酶体膜上的蛋白质。基体、溶酶体膜上的蛋白质。包括包括定位于高尔基复合体、滑面内质网、定位于高尔基复合体、滑面内质网、溶酶体的蛋白质溶酶体的蛋白质(这些这些蛋白蛋白需要隔离或修需要隔离或修饰)。饰)。rER 合成合成的的蛋白质蛋白质主要主要有:有:u 上述几类蛋白质在上述几类蛋白质在rER上合成,是上合成,是边合成边合成边转移边转移至至rER腔中。腔中。u 其它多肽是在细胞质基质中其它多肽是
12、在细胞质基质中的的“游离游离”核糖核糖体上合成的体上合成的。包括:细胞质基质中的驻留包括:细胞质基质中的驻留蛋白、质膜外周蛋白、核输入蛋白、转运蛋白、质膜外周蛋白、核输入蛋白、转运到线粒体、到线粒体、叶绿体和过氧物酶体的蛋白叶绿体和过氧物酶体的蛋白。u 细胞中细胞中所有蛋白质的合成都在核糖体上进所有蛋白质的合成都在核糖体上进行,并都是起始于细胞质基质中行,并都是起始于细胞质基质中“游离游离”核核糖体糖体。主要化学修主要化学修饰饰有有:糖基化、羟基化、酰基化、:糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等二硫键形成等。(2)蛋白质修饰与加工蛋白质修饰与加工 糖基化是糖基化是ER最常见的蛋白质修饰。糖基最
13、常见的蛋白质修饰。糖基化发生在化发生在ER腔面腔面,伴随着多肽合成同时进行。,伴随着多肽合成同时进行。酰基化发生在酰基化发生在ER的细胞质基质侧的细胞质基质侧,通常,通常是是软脂酸共价结合在跨膜蛋白的软脂酸共价结合在跨膜蛋白的CysCys残基上残基上。寡糖基转移到蛋白质有两种方式:寡糖基转移到蛋白质有两种方式:u N-连接(连接(N-linked glycosylation)AA:Asn 糖基:糖基:-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺uO-连接(连接(O-linked glycosylation)AA:Ser/Thr or Hylys/Hypro 糖基:糖基:-乙酰半乳糖(主要乙酰半乳糖(主要 发生在
14、高尔基体中)。发生在高尔基体中)。N-连接与连接与O-连接的寡糖比较连接的寡糖比较 特特 征征N-N-连接连接O-O-连接连接1.1.合成部位合成部位粗面内质网粗面内质网粗面内质网或高尔粗面内质网或高尔基体基体2.2.合成方式合成方式来自同一个寡糖前体来自同一个寡糖前体一个个单糖加上去一个个单糖加上去3.3.与之结合的与之结合的氨基酸残基氨基酸残基天冬酰胺天冬酰胺丝氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苏氨酸、羟赖氨酸、羟脯氨羟赖氨酸、羟脯氨酸酸4.4.最终长度最终长度至少至少5 5个糖残基个糖残基一般一般1 14 4个糖残基,个糖残基,但但ABOABO血型抗原较长血型抗原较长5.5.第一个糖残第一个糖残基基
15、 NN乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺NN乙酰半乳糖胺等乙酰半乳糖胺等特定三肽序列特定三肽序列为:为:Asn-X-Ser 或或 Asn-X-Thr (其中(其中X为除以外的任何氨基酸)为除以外的任何氨基酸)N-连接机制连接机制供体:磷酸多萜醇供体:磷酸多萜醇糖基:糖基:14个糖残基的寡糖链从供体磷酸多个糖残基的寡糖链从供体磷酸多萜醇上转移到新生肽链的特定三肽萜醇上转移到新生肽链的特定三肽序列的序列的Asn残基上。残基上。高尔基体与细胞骨架关系密切,在非极性细胞中,高尔基体分布在微管组织中心(MTOC)负端。其转移也需要某些信号序列指导才能进入细胞器。3)内膜系统构成的各种细胞器中的可溶性蛋白特定三肽序
16、列为:Asn-X-SerCOPI包被小泡负责将蛋白从高尔基体 内质网。已分化细胞中,内质网较发达。)受精过程中精子顶体 细胞基质一侧合成的磷脂可能借助phospholipd translocator(磷脂转位因子)/flippase(转位酶)使其从细胞基质一侧转移到ER腔中。含60多种水解酶。细胞内吞过程中,胞内体被认为是膜泡运输的主要分选站之一。中间高尔基网(medial Golgi)(又称高尔基堆)分选后将其大部分转入中间高尔基堆,小部分返回内质网。负责蛋白质从高尔基体TGN质膜、胞内体或溶酶体和植物液泡运输疏水中心的结尾由甘氨酸和丙氨酸等侧链较短的氨基酸残基组成。N-连接(N-linke
17、d glycosylation)可见,溶酶体酶是一种糖蛋白(富含甘露糖),溶酶体的酶来自rER,溶酶体酶的分选发生在高尔基复合体,溶酶体的膜主要来自晚期内吞体。为多亚基结构,沉降系数为26S,由一个中空的20S催化核心(为圆柱体,由14种多肽,28个亚基组成,分4个环层,每层7个亚基,中间2层蛋白分别称为1-7,具酶活性;)蝌蚪尾巴退化,哺乳动物断奶后乳腺的退行性变化,某些特定细胞凋亡等。过氧化物酶体分解脂肪酸等高能分子向细胞直接提供热能。成分极为复杂,按分子量大小大致可分三类:选择性门控运转(gated transport)u 信号肽(信号肽(signal peptide)概念概念信号肽假说
18、信号肽假说(G.Blobel et al,1975)u 信号肽结构信号肽结构u信号肽假说信号肽假说分泌蛋白合成模型分泌蛋白合成模型 蛋白质首先在细胞质游离核糖体上起始合成。蛋白质首先在细胞质游离核糖体上起始合成。当多肽链延伸至当多肽链延伸至80个个aa左右后,左右后,N端信号序列与端信号序列与SRP结合使肽链延伸暂时停止,并防止新生肽结合使肽链延伸暂时停止,并防止新生肽N端端损伤和成熟前折叠,直至损伤和成熟前折叠,直至SRP颗粒与颗粒与ER膜上的停膜上的停泊蛋白(泊蛋白(SRP受体)结合,核糖体与受体)结合,核糖体与ER膜的易位膜的易位子(子(translocon)结合。此后,结合。此后,SR
19、P颗粒脱离信号颗粒脱离信号序列和核糖体,返回细胞质基质中重复使用,肽链序列和核糖体,返回细胞质基质中重复使用,肽链又开始延伸。以环化构象存在的信号肽与易位子组又开始延伸。以环化构象存在的信号肽与易位子组分结合并使孔道打开,信号肽穿入分结合并使孔道打开,信号肽穿入ER膜并引导肽膜并引导肽链以袢环形式进入链以袢环形式进入ER腔中,这是一个需腔中,这是一个需GTP的耗的耗能过程。与此同时,位于腔面的信号肽酶切除信号能过程。与此同时,位于腔面的信号肽酶切除信号肽并快速使之降解。肽链继续延伸,直至完成整个肽并快速使之降解。肽链继续延伸,直至完成整个多肽链的合成。蛋白质进入腔内并折叠,核糖体释多肽链的合成
20、。蛋白质进入腔内并折叠,核糖体释放,易位子关闭。放,易位子关闭。引导肽链穿过内质网的信号肽可以看做为开始引导肽链穿过内质网的信号肽可以看做为开始转移序列(转移序列(start transfer sequence)。)。肽链中还可肽链中还可能存在某些序列与内质网膜有很强亲和力从而使之能存在某些序列与内质网膜有很强亲和力从而使之结合在脂双层之中,这段序列不再转入内质网腔中,结合在脂双层之中,这段序列不再转入内质网腔中,称之为停止转移序列(称之为停止转移序列(stop transfer sequence)。如果一种多肽只有如果一种多肽只有N端信号序列而没有停止转移序端信号序列而没有停止转移序列,该多
21、肽合成后则进入列,该多肽合成后则进入ER腔中;如果一种多肽腔中;如果一种多肽的停止转移序列位于分子的中部,该多肽最终则成的停止转移序列位于分子的中部,该多肽最终则成为跨膜蛋白。含有多个起始转移序列和多个停止转为跨膜蛋白。含有多个起始转移序列和多个停止转移序列的多肽则成为多次跨膜蛋白。移序列的多肽则成为多次跨膜蛋白。(2)细胞质基质是物质反应的场所。特定三肽序列为:Asn-X-Ser该两个-螺旋区如被破坏,则会抑制蛋白质分泌。异噬溶酶体(phagolysosome)中间高尔基网(medial Golgi)(又称高尔基堆)rough endoplasmic reticulum,rERrough e
22、ndoplasmic reticulum,rER合成磷脂的3种酶(包括酰基转移酶、磷酸酶和胆碱磷酸转移酶)是ER膜整合蛋白,活性位点朝向细胞基质一侧。一、蛋白质分选与分选信号药物苯巴比妥机理:苯巴比妥肝细胞sER成倍增加,解毒大量合成,解毒过氧化物酶体降解储存的脂肪酸乙酰辅酶A琥珀酸葡萄糖。相反,在非分泌性细胞和未分化细胞中高尔基复合体不发达。COPI包被小泡负责将蛋白从高尔基体 内质网。细胞内吞过程中,胞内体被认为是膜泡运输的主要分选站之一。高尔基体聚集在微管组织中心(MTOC)附近并在高尔基体膜囊上结合有类似动力蛋白的蛋白质,从而使高尔基体维持其极性。分选后将其大部分转入中间高尔基堆,小部
23、分返回内质网。N-连接与O-连接的寡糖比较、COPII包被小泡用电镜细胞化学技术显示其中含有的酸性磷酸酶,高尔基体聚集在微管组织中心(MTOC)附近并在高尔基体膜囊上结合有类似动力蛋白的蛋白质,从而使高尔基体维持其极性。SRP:信号识别颗粒信号识别颗粒信号识别颗粒受体:信号识别颗粒受体:又称停泊蛋白(又称停泊蛋白(docking protein,DP)(signal recognition particle)起始转移序列和终止转移序列的数目决起始转移序列和终止转移序列的数目决定多肽跨膜次数定多肽跨膜次数共转移:共转移:肽链边合成边转移至肽链边合成边转移至ER腔中。腔中。u 信号肽与共转移信号肽
24、与共转移起始转移序列起始转移序列:引导肽链穿过引导肽链穿过ER的信号肽的信号肽称为起始转移序列。称为起始转移序列。终止转移序列:终止转移序列:肽链中与肽链中与ER膜有很强亲合膜有很强亲合力的那段肽链序列。力的那段肽链序列。导肽与后转移导肽与后转移线粒体、叶绿体中绝大多数蛋白质以及过氧线粒体、叶绿体中绝大多数蛋白质以及过氧物酶体中的蛋白质是在细胞质基质中合成以后再物酶体中的蛋白质是在细胞质基质中合成以后再转移到细胞器中的,称为后转移(转移到细胞器中的,称为后转移(post translocation)。其转移也需要某些信号序列指导)。其转移也需要某些信号序列指导才能进入细胞器。这些对蛋白质多肽链
25、的转移起才能进入细胞器。这些对蛋白质多肽链的转移起指导作用的信号序列称为导肽或前导肽(指导作用的信号序列称为导肽或前导肽(leader peptide)。)。蛋白质跨膜转移过程需要蛋白质跨膜转移过程需要ATP使多肽使多肽去折叠去折叠,还需要一些还需要一些蛋白质帮助(如热休克蛋白蛋白质帮助(如热休克蛋白Hsp70)使)使其能够正确地折叠成有功能的蛋白其能够正确地折叠成有功能的蛋白。比较比较 新生肽需要进一步新生肽需要进一步折叠组装折叠组装。有些。有些多肽还要进一步多肽还要进一步装配成寡聚体装配成寡聚体。不能正确不能正确折叠的畸形肽链或未装配成寡聚体的蛋白折叠的畸形肽链或未装配成寡聚体的蛋白质亚单
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