低压层析系统课件.ppt

1、1/3/20231中低压层析系统中低压层析系统主讲人：彭元鸿1/3/20232中低压层析系统流量流量 输出流量：输出流量：1-6800 ml/h1-6800 ml/h波长波长 220 220、254254、280280、340nm340nm定时范围定时范围1s-24h 1s-24h 收集容量收集容量12ml12ml100100温度范围温度范围0-300-30配置配置 蠕动泵、三支层析柱、（仪器车）层蠕动泵、三支层析柱、（仪器车）层析柜、紫外检测仪、自动部分收集器、析柜、紫外检测仪、自动部分收集器、电脑采集器。（电脑自配）电脑采集器。（电脑自配）1/3/20233中低压层析系统v 恒流泵恒流泵v

2、 层析柱层析柱v 紫外监测仪紫外监测仪v 分布收集器分布收集器v 核酸蛋白检测系统核酸蛋白检测系统1/3/20234层析法层析法层析法 是目前广泛应用的一种分离技术，是生物化学、分子生物学其 它学科领域有效的分离分析工具之一。层析法层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶

3、媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快快。反之，与固定相相互作用越强强的组份，向前移动速度越慢慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。1/3/20235层析法1/3/20236层析法吸附层析吸附层析 是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术。分配层析分配层析 是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。凝胶过滤层析凝胶过滤层析 是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小

4、进行分离的一种层析技术。离子交换层析离子交换层析 是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。亲和层析亲和层析 是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力(如酶和抑制剂、抗体和抗原、激素和受体等)，将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离生物大分子最为有效的层析技术，具有很高分辨率。1/3/20237层析柱分类层析柱产品品种层析柱产品品种:l 1、普通层析柱（柱内压增加1-2巴）l 2、中压特制玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压增加5-7巴）l 3、高压水冷夹套层析柱(带转换接头)（柱内压增加5巴左右）l

5、 4、大型有机玻璃柱（带分布系统）（柱内压小于0.5巴）l 5、有机玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压小于0.5巴）l 6、有机玻璃层析柱(带转换接头)（柱内压增加2-3巴）层析柱层析柱 是柱色谱中的主体之一，一般用玻璃管或有机玻璃管。1/3/20238层析柱1/3/20239层析柱规格（上海沪西）1/3/202310产产 品品 名名 称称型型 号号外形尺寸外形尺寸主主 要要 技技 术术 参参 数数重重 量量长长宽宽高高（Kg）窗体顶端窗体顶端恒流泵（易装恒流泵（易装型）型）窗体底端窗体底端BT-100160270180 输出通道：单通道输出通道：单通道5 输出流量：输出流量：1-6800 ml

6、/h 输出压力：输出压力：2.5 kg/cm2BT-100恒流泵1/3/202311HD-5电脑紫外监测仪-1产产 品品 名名 称称型型 号号外形尺寸外形尺寸长长宽宽高高主主 要要 技技 术术 参参 数数重重 量量（KgKg）电脑紫外检测电脑紫外检测仪仪（电脑数据采（电脑数据采集）集）HD-5HD-529829821021013130 0波波 长：长：220220、254254、280280、340nm340nm（数显）（数显）光光 程：程：4mm4mm；样品池：样品池：80ul80ul 量量 程：程：0-100%T0-100%T、0-2A0-2A 自配电脑：可实现绘图、保存、自配电脑：可实现

7、绘图、保存、数据分析和计算数据分析和计算 系统要求：系统要求：WIN2000/XP/VISTA/WIN7WIN2000/XP/VISTA/WIN7操作系统操作系统7 71/3/202312HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-21/3/202313HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-3 HDHD-5 5电脑紫外检测仪电脑紫外检测仪是应用于液相色谱中具有紫外是应用于液相色谱中具有紫外吸收物质（蛋白、核酸、多肽、酶）的检出仪器。该仪吸收物质（蛋白、核酸、多肽、酶）的检出仪器。该仪器与器与层析柱层析柱、恒流泵恒流泵、部分收集器部分收集器及及电脑或记录仪电脑或记录仪配套，配套，可组成

8、一个完整的液相色谱分离分析装置。在柱层析分可组成一个完整的液相色谱分离分析装置。在柱层析分离分析过程中，洗脱液流过该仪器样品池，电脑或记录离分析过程中，洗脱液流过该仪器样品池，电脑或记录仪即可自动绘制出样品分离的图谱（吸受峰或透过峰），仪即可自动绘制出样品分离的图谱（吸受峰或透过峰），同时可检测出所需样品在部分收集器试管中的分布情况，同时可检测出所需样品在部分收集器试管中的分布情况，并随时监测柱层析过程，特别是在并随时监测柱层析过程，特别是在摸索实验过程中摸索实验过程中，及，及时改变洗脱条件，以便迅速取得最佳实验方案。时改变洗脱条件，以便迅速取得最佳实验方案。1/3/202314HD-5电脑紫

9、外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-4主要技术指标主要技术指标：1.1.检测波长：检测波长：2 220 20 nm nm 254254 nmnm 2 280 80 nm nm 34340 0 nm nm 2.2.流动式样品池：容积流动式样品池：容积100100 ul ul 3 3.最大流量：最大流量：1010 mlml /minmin（特殊需要可另配）（特殊需要可另配）4.4.配接记录仪信号：配接记录仪信号：0-10mV0-10mV5.5.可直接连接电脑检测绘制样品分离图谱可直接连接电脑检测绘制样品分离图谱6 6 使用环境温度：使用环境温度：0-30C0-30C7.7.工作时间：连续工作时间：连续

10、8.8.电源：电源：220220 AC 20AC 20 W W9.9.保险丝：保险丝：BGXP-1 1BGXP-1 1 A A1/3/202315HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-5使用方法：使用方法：一、一、校对仪器工作状态校对仪器工作状态1.1.选定检测波长：选定检测波长：从有机玻璃盒中取出干涉滤光片（从有机玻璃盒中取出干涉滤光片（250nm250nm或或280nm280nm），插入仪器正面），插入仪器正面“滤光片滤光片”下方小长方孔内，并使其插入到下方小长方孔内，并使其插入到底部位置（插入时应注意使干涉滤光片侧面有一直径为底部位置（插入时应注意使干涉滤光片侧面有一直径为3mm

11、3mm的半球形的半球形凹槽朝上）。凹槽朝上）。2 2按下按下“电源开关电源开关”（在仪器后背板上），仪器预热（在仪器后背板上），仪器预热2020分钟，以便分钟，以便得到较好的稳定性。得到较好的稳定性。3.3.校对校对T TA A a a）.按下按键开关按下按键开关“”键，键，“透过率透过率T”T”指示灯亮。调节指示灯亮。调节“调调T”T”旋钮（顺时针调节透过率增大），使数字显示旋钮（顺时针调节透过率增大），使数字显示100100，此时，此时透过率透过率T T为为100%100%。b).b).按下按键开关按下按键开关“1A”1A”键，键，“吸光度吸光度A”A”指示灯亮，调节指示灯亮，调节“A A

12、调零调零”旋钮，使数字显示旋钮，使数字显示000000，此时吸光度，此时吸光度A A为零。为零。1/3/202316HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-61.1.连接检测仪和记录仪：连接检测仪和记录仪：连接线有金属插头的一端接在检测仪连接线有金属插头的一端接在检测仪后背板后背板“接记录仪接记录仪”插口上，（此插口输出信号可同时输出给部分插口上，（此插口输出信号可同时输出给部分收集器作为控制信号）另一端收集器作为控制信号）另一端“黑黑”“”“红红”两个接线叉分别接在记两个接线叉分别接在记录仪录仪“L”“H”L”“H”两个输入插座上。两个输入插座上。2.2.选择系统最佳工作状态。选择系统

13、最佳工作状态。a).a).校对记录仪零位校对记录仪零位b).b).记录仪记录仪“记录纸速度记录纸速度“选择选择2cm/h2cm/h档档c).c).记录仪输入记录仪输入“量程量程”选择选择10 mv10 mv档档d).d).恒流泵流速视层析柱大小选择恒流泵流速视层析柱大小选择1 110 ml/min10 ml/min3.3.确定基线：确定基线：调节调节“调调T”T”旋钮，确定基线位置。为防止系统旋钮，确定基线位置。为防止系统出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如记录出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如记录仪满量程的十分之一。读取仪满量程的十分之一。读取A A值时注意扣除此数值。值时

14、注意扣除此数值。4.4.确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿再改变基确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿再改变基线位置）。当洗脱样品流过检测仪时，记录仪即可绘制出样品吸线位置）。当洗脱样品流过检测仪时，记录仪即可绘制出样品吸光度光度A A随时间随时间h h变化的图谱。变化的图谱。5.5.按键开关按键开关2A2A至至0.05A0.05A每一档均表示记录仪满量程读数。每一档均表示记录仪满量程读数。如按下如按下“2A”2A”档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为2A2A，记录笔指在满量程，记录笔指在满量程50%50%的位置，吸光度

15、即为的位置，吸光度即为1A1A；如按下；如按下“0.5A”0.5A”档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为档，记录仪记录笔指在满量程位置，此时吸光度为0.5A0.5A，记录笔指在满量程记录笔指在满量程50%50%的位置，吸光度即为的位置，吸光度即为0.25A0.25A。选取吸光度量程视样品浓度而定，通常选取选取吸光度量程视样品浓度而定，通常选取“1A”1A”档，此档既便档，此档既便于读数，也能满足一般实验需要。于读数，也能满足一般实验需要。二二、配接记录仪检测绘制样品分离图谱配接记录仪检测绘制样品分离图谱1/3/202317HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-71 1 将仪器后

16、背板将仪器后背板“接电脑接电脑”插口与电脑插口与电脑COM1COM1串行口用随机配置串行口用随机配置的连接线相接。的连接线相接。2.2.按使用方法按使用方法“一、一、”校对仪器工作状态。校对仪器工作状态。3.3.将吸光度量程将吸光度量程2A2A0.05A0.05A置任意档（勿置于置任意档（勿置于T T档）。档）。4.4.层析系统准备就绪后开启电脑层析系统准备就绪后开启电脑,插入光盘，待自动出现插入光盘，待自动出现“核酸核酸蛋白检测系统蛋白检测系统”界面后，按以下步骤操作：界面后，按以下步骤操作：选择选择“直接运行或本机安装直接运行或本机安装”/检测操作检测操作 /采集采集COM1/COM1/保

17、存保存（默认文件名为当前日期）（默认文件名为当前日期）/洗脱谱图选择洗脱谱图选择 /吸光度（默吸光度（默认状态为认状态为1A1A）/记录速度（默认状态为记录速度（默认状态为1010个小时）。个小时）。三、三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。1/3/202318HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-8三、三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。5.5.用键盘用键盘“Home“Home（放大）（放大）”和

18、和“End“End（缩小）（缩小）”键调节洗键调节洗脱谱图在电脑屏幕上的大小。脱谱图在电脑屏幕上的大小。6.6.确定基线：确定基线：调节调节“调调T”T”旋钮，确定基线位置。为防旋钮，确定基线位置。为防止系统出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如满止系统出现负漂移，基线通常调节在大于零的位置上，如满量程的十分之一。读取量程的十分之一。读取A A值时注意扣除此数值。值时注意扣除此数值。7.7.确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿确定好基线位置后，即可上样（特别注意上样后切勿再改变基线位置）。当洗脱样品流过检测仪时，电脑即可绘再改变基线位置）。当洗脱样品流过检测仪时，电脑即可绘制出

19、样品吸光度制出样品吸光度A A随时间随时间h h变化的图谱。变化的图谱。8.8.实验结束：实验结束：点击检测操作点击检测操作/停止停止COM1COM1采集采集/确定。确定。1/3/202319HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-9三、三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。1/3/202320HD-5电脑紫外监测仪HD-5电脑紫外检测仪-10三、三、直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。直接与电脑连接检测、绘制、打印、保存样品分离图谱及计算有关数据。e)e)单击工具栏

20、单击工具栏 按钮，可计算所选收集峰的相按钮，可计算所选收集峰的相关数据。方法如下：关数据。方法如下：用纵向两根棕色线确定收集范围：用纵向两根棕色线确定收集范围：点击左边一根棕色线，移至收集起始点，点击；点击左边一根棕色线，移至收集起始点，点击；点击右边一根棕色线，移至收集结束点，点击。点击右边一根棕色线，移至收集结束点，点击。用纵向两根绿色线确定收集峰峰宽：用纵向两根绿色线确定收集峰峰宽：点击左边一根绿色线，移至收集峰的起始点，点击；点击左边一根绿色线，移至收集峰的起始点，点击；点击右边一根绿色线，移至收集峰的结束点，点击。点击右边一根绿色线，移至收集峰的结束点，点击。用横坐标上一根紫色线确定

21、收集峰的基线：用横坐标上一根紫色线确定收集峰的基线：点击紫色线，移至收集峰基线，点击。点击紫色线，移至收集峰基线，点击。完成上述选择后，界面右上方将显示收集峰的相关数据。完成上述选择后，界面右上方将显示收集峰的相关数据。10.10.双击谱图上任意一点，可显示该点双击谱图上任意一点，可显示该点A A值或值或T%T%值。值。11.11.在菜单在菜单“设置设置”中，可选择实验日期是否打印。中，可选择实验日期是否打印。12.12.在菜单在菜单“窗口窗口”中，可选择二个层析谱图的排列方式。中，可选择二个层析谱图的排列方式。1/3/202321分布收集器1/3/202322分布收集器1/3/202323分布收集器产 品 名 称型 号外形尺寸主 要 技 术 参 数重 量长宽高（Kg）BSZ-100335255340 收集试管：100支，每支最大容量：12ml8.5 定时收集范围：1秒24小时，任意选择 断电数据保存功能，保存时间：十年1/3/202324中低压层析系统 The End!