岛津液相色谱常见问题及其对策课件.ppt
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- 关 键 词:
- 津液 色谱 常见问题 及其 对策 课件
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1、SHIMADZU欢迎参加岛津液相欢迎参加岛津液相维修培训班维修培训班SHIMADZU 采用采用“HPLC”级溶剂级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂化的溶剂 对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小溶剂粘度要小 与检测器相匹配与检测器相匹配其他问题SHIMADZU其他问题 水的等级水的等级 纯化水纯化水 蒸馏水蒸馏水 去离子去离子水水波长波长(nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在,去离子的吸光率较高因为不纯物的存在,去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物SHIMADZU其他问
2、题水水/MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min,0-100%MeOHover 10 mins and hold for15 mins.SHIMADZU其他问题 溶剂的等级溶剂的等级HPLC级级优级纯优级纯分析纯分析纯都都经过蒸馏和经过蒸馏和0.45u的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质SHIMADZU其他问题甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析
3、纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图SHIMADZU其他问题溶剂的过滤 滤膜类型:聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐。醋酸纤维滤膜:不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜:蛋白吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂SHIMADZU脱气:脱气:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响:气泡对测定的影响:1)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积峰面积 2)柱中气泡使流动相绕流,峰变形)柱中气泡使流动相绕流,峰
4、变形 3)检测器中的气泡产生基线波动)检测器中的气泡产生基线波动其他问题SHIMADZU脱气的目的脱气的目的 1.防止由气泡的产生引起的故障 2.防止由溶解(在液体中的)气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1)示差折射率检测器 *使折射率变化 2)UV检测器(200nm以下)*溶解氧气有吸收 3)荧光检测器 *溶解氧气有消光作用其他问题SHIMADZU其他问题脱气的方法脱气的方法1.超身波脱气法超身波脱气法2.He清除法清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法SHIMADZU其他问题He清除法清除法调压阀调压阀排气阀排气阀往送液泵往送液泵流动相流动相过滤器过滤器SHIMADZ
5、U其他问题氟树脂膜氟树脂膜真空室真空室往送液泵往送液泵真空泵真空泵控制器控制器流动相流动相使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法SHIMADZU梯度洗脱法梯度洗脱法高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。优点:可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度SHIMADZU梯度洗脱法的注意点梯度洗脱法的注意点l 溶剂的纯度要高,否则梯度洗脱的重现性差l 梯度混合的溶剂互溶性要好l 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化
6、敏感的通用型检测器(如示差折光检测器)l 查看空白实验的数据。l 遵守分析周期。(最初的分析数据不采用)SHIMADZU1.使用流动相溶解样品 -减少溶剂峰,尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 SHIMADZU其他问题缓冲液缓冲液 选择缓冲液的步骤 1.确定最佳分离状态时的流动相pH 2.选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 (即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液)3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 (在波长210nm附近进行检测时,不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液)SHIMADZU一些代表性弱酸的一些代表性弱酸的pKa pK
7、1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32其他问题SHIMADZU缓冲液的使用缓冲液的使用 使用前必须过滤使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗使用后一定要进行清洗,以免造成腐蚀、磨损,以免造成腐蚀、磨损、阻塞、阻塞:用纯水冲洗用纯水冲洗30-60min(1ml/min),),再用甲醇再用甲醇冲洗冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响易受到细菌和霉菌的影响 不能直接用有机溶剂冲洗不能直接用有机溶剂冲洗SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器SHIMADZU管线选择材料 不
8、锈钢 Teflon PEEK(聚醚酮)尺寸 0.1 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.3 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.5 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.8 mmI.D.x 1.6 mmO.D.SHIMADZU管线材料 不锈钢不锈钢(可用于所有连接可用于所有连接)能承受几千能承受几千 kg/cm2 压力压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在尤其在pH小于小于2时时)PEEK(可用于所有连接可用于所有连接)能承受高达能承受高达 250 kg/cm2压力压力 可在整个可在整个PH范围范围(pH 1-14)内使用内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿
9、等不适用于高溶解性溶剂如氯仿等 Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大化学惰性大 能承受能承受 5 kgf/cm2 压力压力SHIMADZU材料:不锈钢烧结,孔径10um故障:堵塞表现:管路中不断有气泡生成措施:用520的稀硝酸,超声波清洗,再用蒸馏水清洗注意点:吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头吸滤头液相色谱容易出问题的部件SHIMADZULC-10ATvp泵:串联 式往复泵LC-10ADvp泵:并联式 往复泵液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进
10、口单向阀泵头流动相单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件故障1:宝石球粘附于垫片表现:泵无法吸液或排液,流路不通措施:1)用针筒抽出口单向阀以产生负压,使宝石球与垫片分开 2)拆下单向阀,放入异丙醇或水中,用超声波清洗单向阀单向阀SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件故障2:宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现:系统压力波动大措施:拆下单向阀,放入异丙醇或水中,用超 声波清洗单向阀单向阀SHIMADZU故障:密封圈磨损而导致 密封不良现象:系统压力波动大或 漏夜措施:更换密封圈注意点:更换密封圈 拆卸泵头前,柱塞杆 复位 (PSE
11、T)柱塞密封圈柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU故障:堵塞现象:系统压力波动大或压 力偏高措施:5稀硝酸,超声波清 洗判断依据:关闭排液阀,断开出口管路,设定流速1mL/min,如压力3kgf/cm2,则可能堵塞。线路过滤器线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相液相色谱容易出问题的部件SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件进样器 自动进样器 手动进样器 原理:(六通阀)注入方式:1)全量注入 2)部分注入SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图进样进样体体积积 检检测测器器响响应应值
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