4章-免疫球蛋白基因分析课件.ppt

1、第四章第四章 免疫球蛋白基因免疫球蛋白基因免疫球蛋白免疫球蛋白是指具有与抗原决定簇特异性结合的许是指具有与抗原决定簇特异性结合的许许多多球蛋白分子的总称。许多多球蛋白分子的总称。因为因为抗原的种类极多抗原的种类极多，每种抗原上有不同的抗，每种抗原上有不同的抗原决定簇，免疫球蛋白分子的种类可以原决定簇，免疫球蛋白分子的种类可以多达百多达百万以上。万以上。人的基因组总数也人的基因组总数也不过不过l0万万-20万万。研究发现，不同免疫球蛋白的数量如此庞大是研究发现，不同免疫球蛋白的数量如此庞大是由于由于基因重排基因重排的结果。的结果。免疫球蛋白的基因库免疫球蛋白的基因库 1.1.H基因库（重链基因连

2、锁群）第基因库（重链基因连锁群）第1414号染色体号染色体 2.2.基因库（基因库（链基因连锁群）第链基因连锁群）第2 2号染色体号染色体 3.3.基因库（基因库（链基因连锁群）第链基因连锁群）第2222号染色体号染色体免疫球蛋白基因结构免疫球蛋白基因结构 轻链有两种，即轻链有两种，即K链和链和链。链。l 胚系胚系DNA的的K链基因由链基因由Vk，Jk，和，和Ck三类基因片段组成三类基因片段组成；l每个每个v区基因上游都有一个区基因上游都有一个L基因编码的信号肽基因编码的信号肽；lJ基因片段由基因片段由5个基因组成个基因组成，其中，其中JK3是无效基因；是无效基因；lJ基因之间相距基因之间相距

3、较近较近，J基因编码的氨基酸也基因编码的氨基酸也属于属于V区肽段区肽段的的 一部分，称为连接片段；一部分，称为连接片段；l只有只有一个一个C基因基因，编码，编码K链链C区肽段区肽段。K K链基因结构链基因结构l胚系胚系DNA的的链由链由V、J和和C三类基因组成；三类基因组成；小鼠小鼠的的链基因只有链基因只有Vl和和V2两个两个V基因，两个基因，两个L基因即基因即Ll，L2在在V基因的上游；基因的上游；J基因基因片段有片段有4个个基因，基因，C基因基因片段也有片段也有4个个基因，但其中基因，但其中J4和和C4为无效基因，为无效基因，其余基因成簇排列；其余基因成簇排列；V基因基因编码编码链的链的V

4、区，区，J区基因区基因编码编码链的链的V区。区。C基因基因编码编码链全部链全部C区。区。l重链基因结构更为重链基因结构更为复杂复杂，编码可变区的基因片段除，编码可变区的基因片段除V，J 和和C基因片段外，还有基因片段外，还有D基因片段基因片段。D片段位于片段位于VH和和JH之间之间，编码的氨基酸位于，编码的氨基酸位于CDR3，与，与抗体的多样性有关，抗体的多样性有关，故称故称D基因基因。VDJ-C IgM VDJ-C 3IgG3 IgMIgG3?IgM其他类别或亚类其他类别或亚类Ig的现象的现象,称为类别转换称为类别转换C基因的基因的5端一段重复性端一段重复性DNA序列序列,称为转换区称为转换

5、区(switch region)5C,C 免疫球蛋白基因的重排免疫球蛋白基因的重排 轻链（轻链（K K）基因重排）基因重排免疫球蛋白基因，是免疫球蛋白基因，是在在B细胞发育到小前细胞发育到小前B细胞时才开始发生细胞时才开始发生重排，重排，使分布在胚系使分布在胚系DKA上上不同区域的不同区域的V、J和和C基因片段中的基因片段中的基因重排组合在一起，成为一个成熟的基因重排组合在一起，成为一个成熟的Ig基因，基因，进而转录翻译进而转录翻译为成熟的轻链。为成熟的轻链。l K基因可以通过基因可以通过Vk区基因片段区基因片段缺失、倒位的方式随机与一缺失、倒位的方式随机与一 个相隔一定距离的个相隔一定距离的

6、任何一个任何一个Jk基因片段相连接基因片段相连接；l 重排后的重排后的Vk Jk片段再与片段再与Ck连接形成完整连接形成完整K链链DNA，其中还其中还 有少数内含子，转录后通过拼接除去；有少数内含子，转录后通过拼接除去；l 经加工修饰，在经加工修饰，在RNA前体的前体的5和和3 端分别加上帽结构和端分别加上帽结构和 PolyA 尾，成为成熟的尾，成为成熟的K链链mRNA；l mRNA从细胞核转移到细胞质中，翻译为从细胞核转移到细胞质中，翻译为K肽链。肽链。重链基因重排与表达重链基因重排与表达 重链基因是通过重链基因是通过两次重排两次重排形成的。形成的。第一次基因重排是第一次基因重排是D基因片段

7、与基因片段与JH基因片段的重排连基因片段的重排连接，接，得到得到DJH基因片段基因片段；第二次基因重排是第二次基因重排是VH基因片段与基因片段与DJH片段重排和连接，片段重排和连接，得到得到VH DJH的连接片段的连接片段；经过两次重排的经过两次重排的DNA仍有一仍有一内含子内含子，经过转录以后得，经过转录以后得到初转录的到初转录的RNA，再修饰成为成熟的，再修饰成为成熟的H链链mRNA，翻，翻译出译出H链蛋白。链蛋白。体细胞基因突变体细胞基因突变 V区基因在重排后仍可发生改变区基因在重排后仍可发生改变、这种改变是、这种改变是由体细胞突变产生的。由体细胞突变产生的。体细胞突变只改变体细胞突变只

8、改变VJ或或VDJ单个片段的单个片段的个别核个别核苷酸苷酸，也会导致免疫球蛋白的特异性变化。，也会导致免疫球蛋白的特异性变化。体细胞突变体细胞突变只发生在只发生在IgG和和IgA，而不发生在，而不发生在 IgM，因此这种突变可能与免疫球蛋白的种类，因此这种突变可能与免疫球蛋白的种类转换有关。转换有关。B细胞发生体细胞突变的频率很高，平均每次细胞发生体细胞突变的频率很高，平均每次细胞分裂，每对碱基发生细胞分裂，每对碱基发生突变的概率为突变的概率为10-3，比其他基因的自发突变频率高比其他基因的自发突变频率高106倍。倍。免疫球蛋白的合成与分泌免疫球蛋白的合成与分泌 初次应答初次应答 初次应答的特

9、点是抗原第一次免疫后血清中初次应答的特点是抗原第一次免疫后血清中抗体浓度缓慢地增抗体浓度缓慢地增加，加，从诱发免疫到抗体产生有一个较长的从诱发免疫到抗体产生有一个较长的迟滞期迟滞期。抗体产生的。抗体产生的量较少，效价低量较少，效价低。抗体以抗体以IgM为主并最早出现为主并最早出现。IgG也有，但出现较也有，但出现较IgM为迟为迟。初次应答的高峰期大约在免疫后初次应答的高峰期大约在免疫后10 d左右。左右。初次应答答除了产生特异的初次应答答除了产生特异的浆细胞分泌抗体之外浆细胞分泌抗体之外，还有一些受，还有一些受到刺激的幼到刺激的幼B细胞发育到一定程度不再分化而保持体止状态，细胞发育到一定程度不

10、再分化而保持体止状态，这就是这就是记忆记忆B细胞细胞。记忆记忆B细胞不分泌抗体细胞不分泌抗体，只有在受到特异性抗原刺激后才能激，只有在受到特异性抗原刺激后才能激活而成为分泌抗体的活而成为分泌抗体的浆细胞浆细胞。记忆记忆B细胞是长命细胞是长命B细胞细胞，可以存活数月甚至机体终身存活。，可以存活数月甚至机体终身存活。免疫应答过程中抗体产生规律免疫应答过程中抗体产生规律 再应答再应答 当用与初应答相同抗原再次或多次免疫同当用与初应答相同抗原再次或多次免疫同一动物产生的免疫应答即为一动物产生的免疫应答即为再应答再应答。再应答与初次应答再应答与初次应答不同的是不同的是：应答反应应答反应的速度快，的速度快

11、，记忆记忆B细胞受到特异性抗原刺细胞受到特异性抗原刺激后立即开始反应；激后立即开始反应；产生的抗体以产生的抗体以IgG为主为主，IgM很少，此外还出现很少，此外还出现IgA、IgE；产生抗体的量远远超过初次应答，抗体产生抗体的量远远超过初次应答，抗体具高亲和力。具高亲和力。Td和和Ti抗原的免疫应答抗原的免疫应答 蛋白质抗原蛋白质抗原在在T细胞缺乏时不诱导抗体产生，细胞缺乏时不诱导抗体产生，故称为故称为胸腺依赖抗原（胸腺依赖抗原（Td抗原）抗原）。Td抗原激活抗原激活B细胞，除必须有抗原作为细胞，除必须有抗原作为第一第一信号外信号外，还需，还需Th细胞及其分泌的细胞因子细胞及其分泌的细胞因子作

12、作为第二信号。为第二信号。一些非蛋白抗原一些非蛋白抗原如多糖、脂类、核酸等诱导如多糖、脂类、核酸等诱导的抗体反应无需的抗体反应无需Th细胞，因此也称细胞，因此也称非依赖性非依赖性抗原抗原(Ti)。Ti抗原能诱导初次免疫应答，而无记忆细胞抗原能诱导初次免疫应答，而无记忆细胞产生，产生，因而也无重链转换和亲和力成熟的再因而也无重链转换和亲和力成熟的再次免疫应答。次免疫应答。抗体形成中抗体种类的转换机制抗体形成中抗体种类的转换机制 抗体免疫应答中首先抗体免疫应答中首先出现出现IgM同种型，然后出现同种型，然后出现1gG；特别在再应答中有许多类型的特别在再应答中有许多类型的同种型出现同种型出现。控制抗

13、体类别转换的核酸序列称为控制抗体类别转换的核酸序列称为转换区转换区。活化后。活化后的的B细胞细胞DNA上每上每一类一类C区基因的上游都有一个个区基因的上游都有一个个转换区。转换区。C的的转换区转换区S的结构是由的结构是由(GAGCT)nGGCGTm重复序列组成的，重复序列组成的，n=17，以，以n3最常见，最常见，m可多可多达达150。转换区的长短转换区的长短次序为次序为SlS2bSS3S2a.具有免疫球蛋白种类特异性的重组酶具有免疫球蛋白种类特异性的重组酶分别与这些分别与这些转换区的序列结合转换区的序列结合成为基因重排中产生那种免疫成为基因重排中产生那种免疫球蛋白同种型及其亚型转换的球蛋白同

14、种型及其亚型转换的重要环节重要环节。有报道表明转换信号来自有报道表明转换信号来自Th细胞合成的细胞合成的细胞介素细胞介素，如细胞介素如细胞介素IL-4。在转换中会发生转换区的重组，在转换中会发生转换区的重组，如转换区如转换区S与与Sl通过通过缺失连接重组缺失连接重组，重组的转换区，重组的转换区DNA经过转录经过转录和剪接，和剪接，除去除去S的的3端与端与Sl的的5端之间的一段端之间的一段DNA序列序列使使VDJ则能与则能与Cl最紧密地连接为最紧密地连接为VDJ Cl的的mRNA，最后表达，最后表达IgGl免疫球蛋白。免疫球蛋白。影响体液免疫应答的因素 不同种类的抗原不同种类的抗原和和不同的免疫

15、途径不同的免疫途径导致免疫应答导致免疫应答的方式与特点的变化。的方式与特点的变化。不同种类细胞因子或其相对比例不同对不同种类细胞因子或其相对比例不同对B细胞的细胞的作用也不一样。作用也不一样。Th1细胞主要诱导细胞免疫和迟细胞主要诱导细胞免疫和迟发型变态反应；发型变态反应；Th2细胞刺激细胞刺激IgE和和IgG1(小鼠小鼠)或或IgG4(人人)抗体形成。抗体形成。刺激刺激B细胞的增殖的细胞因子有多种细胞的增殖的细胞因子有多种，如来源于，如来源于T细胞的细胞因子细胞的细胞因子IL-2、IL-4和和IL-5。免疫球蛋白mRNA 与其他蛋白基因的表达方式类似，免疫球蛋白与其他蛋白基因的表达方式类似，

16、免疫球蛋白基因基因转录产生的转录产生的RNARNA前体需经过修饰才形成有功前体需经过修饰才形成有功能的能的mRNA mRNA。在免疫球蛋白在免疫球蛋白RNARNA前体近前体近33端有一保守的端有一保守的多聚多聚腺苷酸化信号（腺苷酸化信号（AAUAAAAAUAAA），poly(Apoly(A)多聚酶识多聚酶识别此信号序列，在其下游别此信号序列，在其下游15153030核苷酸处切开，核苷酸处切开，并并加上约加上约250250个腺苷酸形成个腺苷酸形成poly(Apoly(A)尾尾，同时在，同时在5 5端形成端形成帽结构帽结构。加帽和接尾完成后，加帽和接尾完成后，RNARNA前体经过前体经过RNARN

17、A剪接除去剪接除去内含子并内含子并将外显子连接起来将外显子连接起来。mRNAmRNA一旦形成，即从核中转出，与胞质中的核一旦形成，即从核中转出，与胞质中的核糖体结合。糖体结合。膜结合型和分泌型免疫球蛋白的表达膜结合型和分泌型免疫球蛋白的表达抗体的存在形式：抗体的存在形式：膜型膜型(membrane immunoglobulin,mIg)膜表面免疫球蛋白，膜表面免疫球蛋白，B细胞膜上的抗原受体细胞膜上的抗原受体；分泌型分泌型(secreted immunoglobulin,sIg)分泌进入体液分泌进入体液,介导体液免疫应答。介导体液免疫应答。如如CH基因片段由基因片段由Cl，C2，C3和和C4四

18、个外四个外显子分别编码显子分别编码；在在C4外显子的下游约外显子的下游约1.8kb处还有两个外显子处还有两个外显子M1和和M2分别编码跨膜部分和胞内部分分别编码跨膜部分和胞内部分；在在RNA前体中前体中有两个有两个poly(A)信号位点信号位点，位点，位点1位于位于C4的的3端端，而位点，而位点2在在M2外显子的外显子的3端端；如果剪切相加尾发生在位点如果剪切相加尾发生在位点1，则，则形成分泌型形成分泌型的的mRNA；如果剪切和加尾发生在位点如果剪切和加尾发生在位点2，则，则C4的的3 端的端的亲水序列除去并与亲水序列除去并与M1外显子拼接，形成外显子拼接，形成膜结合膜结合型型mRNA。B细胞

19、发育与抗体形成 B细胞来源于细胞来源于骨髓的干细胞骨髓的干细胞，早期的，早期的B细细胞并不分泌免疫球蛋白；胞并不分泌免疫球蛋白；形成抗体分泌形成抗体分泌B细胞（细胞（浆细胞浆细胞）需经过两）需经过两个发育阶段：即非抗原依赖阶段和抗原个发育阶段：即非抗原依赖阶段和抗原依赖阶段前一阶段主要发生在依赖阶段前一阶段主要发生在骨髓骨髓，后，后一阶段发生一阶段发生在外周循环在外周循环中。中。从原始造血细胞分化发育为成熟的从原始造血细胞分化发育为成熟的B细胞，细胞，需经过需经过原原B细胞，前细胞，前B细胞，幼细胞，幼B细胞细胞(包括包括小幼小幼B细胞和幼细胞和幼B细胞细胞)等中间发育阶段。等中间发育阶段。在

20、在成熟成熟B细胞阶段表达细胞阶段表达膜抗体即抗原受体膜抗体即抗原受体mIgM和和mIgD，并从骨髓迁至，并从骨髓迁至外周淋巴器外周淋巴器官官脾和淋巴结，在这里接受脾和淋巴结，在这里接受抗原抗原的刺激，的刺激，发育为抗体分泌发育为抗体分泌的浆细胞和记忆的浆细胞和记忆B细胞细胞。抗体在细胞内的装配，运转与分泌抗体在细胞内的装配，运转与分泌 抗体是在细胞的抗体是在细胞的粗面内质网上粗面内质网上由不同的由不同的多聚核糖多聚核糖体参与体参与分别翻译成分别翻译成L链和链和H链链的。的。L链和链和H链链在多聚核糖体上在多聚核糖体上开始聚合装配。开始聚合装配。装配的装配的Ig分子转入分子转入糙面内质网糙面内质

21、网；脱下先导序列，；脱下先导序列，进入进入平面内质网平面内质网，直到，直到高尔基体高尔基体；在高尔基体内运转过程中继续完成在高尔基体内运转过程中继续完成链的装配及糖链的装配及糖的修饰的修饰，通过，通过“出芽出芽”的方式形成许多允满抗体的方式形成许多允满抗体的的小泡小泡；小泡移动到胞膜小泡移动到胞膜，并与胞膜，并与胞膜融合融合使抗体释放到细使抗体释放到细胞外。胞外。在个体发育过程中，在个体发育过程中，34个月的胎儿淋巴细个月的胎儿淋巴细胞胞已经达到了成人的水平；已经达到了成人的水平；但胎儿主要形成但胎儿主要形成B细胞表面上细胞表面上膜结合抗体；膜结合抗体；出生以后随出生以后随年龄的增加依次形成年

22、龄的增加依次形成IgM，IgG，IgA。大约到大约到7岁岁IgG才能达到成年水平。才能达到成年水平。出生时婴儿的抗体出生时婴儿的抗体IgG都来自母体，都来自母体，出生出生后迅速下降，后迅速下降，到第到第7个月完全消失个月完全消失。同时婴儿自身形成的抗体是随浆细胞同时婴儿自身形成的抗体是随浆细胞成成熟的水平逐步增加。熟的水平逐步增加。免疫血清免疫血清的的制备制备1.1.免疫动物选择免疫动物选择2.2.免疫方法免疫方法3.3.动物采血法动物采血法4.4.免疫血清的分离及保存免疫血清的分离及保存 一、免疫动物选择一、免疫动物选择 能作免疫接种用的动物主要是哺乳类和禽类。能作免疫接种用的动物主要是哺乳

23、类和禽类。兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。1.1.抗原与免疫动物种属差异越远越好；抗原与免疫动物种属差异越远越好；2.2.动物必须适龄、健壮、无感染的正常动物、动物必须适龄、健壮、无感染的正常动物、体重合乎要求；体重合乎要求；3.3.不同动物种类对同一免疫原有不同的免疫不同动物种类对同一免疫原有不同的免疫 应答；应答；4.4.按需要量选择大小不同的动物。按需要量选择大小不同的动物。二、免疫方法 3.3.免疫方案免疫方案 全量免疫法：弗氏佐剂抗原多次注射全量免疫法：弗氏佐剂抗原多次注射 微量免疫法：卡介苗微量免疫法：卡介苗7 7天天弗氏佐剂弗氏佐剂1 1月月 抗原抗原

24、 混合免疫法：综合皮下、淋巴结和静脉混合免疫法：综合皮下、淋巴结和静脉 1.1.免疫原的注射剂量免疫原的注射剂量 2.2.免疫途径：免疫反应产生速度依次为静脉免疫途径：免疫反应产生速度依次为静脉 腹腔肌肉皮下皮内淋巴结足掌腹腔肌肉皮下皮内淋巴结足掌 三、动物采血法三、动物采血法1.1.颈动脉放血法：最常用的方法颈动脉放血法：最常用的方法2.2.心脏采血法：要求操作熟练心脏采血法：要求操作熟练3.3.静脉采血法：静脉采血法：1.41.4保存：可保存保存：可保存3 36 6个月个月2.2.低温保存：低温保存：-20-20-40-40，可保存，可保存2 23 3年年3.3.冰冻干燥保存：可保存冰冻干

25、燥保存：可保存3 35 5年年 抗体抗体的的纯化和鉴定纯化和鉴定1.1.抗体特异性的纯化抗体特异性的纯化2.2.特异性特异性IgGIgG类抗体的纯化类抗体的纯化3.3.特异性抗体的鉴定特异性抗体的鉴定 一、抗体特异性的纯化一、抗体特异性的纯化 1.1.亲合层析法：亲合层析法：将交叉抗原交联到将交叉抗原交联到SepharoseSepharose 4B 4B上，装柱后，将预吸收的抗体通过亲合层上，装柱后，将预吸收的抗体通过亲合层 析柱，杂抗体吸附在柱上，流出液则是特异析柱，杂抗体吸附在柱上，流出液则是特异 性抗体。性抗体。2.2.吸附法：吸附法：利用不含特异性抗原的抗原液，直利用不含特异性抗原的抗

26、原液，直 接加到免疫血清中，抗原则与抗体结合，上接加到免疫血清中，抗原则与抗体结合，上 清液则为无杂抗体的单价特异性抗体。清液则为无杂抗体的单价特异性抗体。二、特异性二、特异性IgGIgG类抗体的纯化类抗体的纯化1.1.盐吸沉淀法：盐吸沉淀法：经硫酸铵盐析提取经硫酸铵盐析提取球蛋白球蛋白 3 3次，基本为次，基本为IgGIgG类类抗体，但不纯。抗体，但不纯。2.A2.A蛋白亲和层析：蛋白亲和层析：SPASPA与与IgGIgG的的FcFc段有很强的段有很强的 特异性的亲和力，细菌表面不同位点独立地特异性的亲和力，细菌表面不同位点独立地 与抗体结合，一个与抗体结合，一个A A蛋白至少可以结合二个蛋

27、白至少可以结合二个 IgGIgG分子。适合纯化细胞培养上清中的分子。适合纯化细胞培养上清中的McAbMcAb。3.3.其它：其它：凝胶过滤、离子交换层析等凝胶过滤、离子交换层析等 三、特异性抗体的鉴定三、特异性抗体的鉴定 1.1.抗体效价的鉴定：抗体效价的鉴定：即为抗体活性滴定即为抗体活性滴定 2.2.抗体特异性鉴定：抗体特异性鉴定：细菌类抗原的抗体用凝集试验细菌类抗原的抗体用凝集试验 可溶性抗原的抗体用双向琼脂扩散试验可溶性抗原的抗体用双向琼脂扩散试验 3.3.抗体的纯度鉴定：抗体的纯度鉴定：免疫电泳分析法免疫电泳分析法 1.1.周围周围6 6个孔放不同稀释度的相应个孔放不同稀释度的相应Ab

28、Ab。2.2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为 该抗体的效价。该抗体的效价。3.3.可进行任意稀释。可进行任意稀释。原理原理凝集试验凝集试验 抗原溶液与相应抗体抗原溶液与相应抗体溶液混合，在电解质存溶液混合，在电解质存在下，抗原与抗体结合在下，抗原与抗体结合出现可见的絮状沉淀。出现可见的絮状沉淀。操作步骤操作步骤方法评价：方法评价：敏感度较低、简便、敏感度较低、简便、易受抗原抗体比例易受抗原抗体比例 影响影响临床意义：临床意义：测定抗原抗体反应测定抗原抗体反应 的最适比。的最适比。1:21:41:81:16 1:32 1:64 1:128各管抗原倍比稀释各管抗原

29、倍比稀释加入抗血清加入抗血清各管抗体量不变各管抗体量不变振摇振摇 混匀、混匀、37孵育孵育沉淀量不同沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管。出现沉淀量最多的管为最适比例管。轻摇轻摇 絮状沉淀试验絮状沉淀试验絮絮 状状 沉沉示示 意意 图图淀淀AgAbAg 原理原理 二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验 将可溶性抗原和抗体将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比抗原与抗体相遇，在比例合适时形成沉淀线。例合适时形成沉淀线。操作步骤操作步骤 应用：应用：1.1.检测未知检测未知

30、AgAg或或AbAb2.2.AgAg性质分析性质分析3.3.AbAb效价滴定效价滴定4.4.AgAg或或AbAb纯度鉴定纯度鉴定双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验原理示意图原理示意图AbAg模拟图模拟图染色标本图染色标本图1.1.抗原抗体双向自由扩散抗原抗体双向自由扩散2.242.24小时出结果小时出结果3.3.呈现沉淀线或弧呈现沉淀线或弧 抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点*1.1.特异性特异性 *2.2.比例性比例性 *3.3.可逆可逆性性 一、一、特异性特异性（specificityspecificity）*概念：概念：抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗

31、 体结合而起反应的专一性能。体结合而起反应的专一性能。*决定因素：决定因素：由抗原决定簇和抗体分子超变区之由抗原决定簇和抗体分子超变区之 间空间结构的互补性决定的。间空间结构的互补性决定的。抗体分子抗体分子N N端可变区形成端可变区形成3nm3nm1.5nm1.5nm0.7nm0.7nm的槽沟，的槽沟，只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入。只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入。*交叉反应交叉反应(cross reaction)(cross reaction)两种不同的抗原两种不同的抗原 物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇，则可与彼

32、此相应的抗体反应。则可与彼此相应的抗体反应。特异性示意图特异性示意图 *最适比最适比(optimal ratio)(optimal ratio)或等价点或等价点(equivzlenceequivzlence point)point)最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度 比或量比。比或量比。二、比例二、比例性性（proportionalityproportionality）等价带等价带(equivalencezoneequivalencezone)抗原与抗体分子比抗原与抗体分子比 例合适的范围。例合适的范围。带现象带现象：AgAg与与AbAb比例不适而不出现可见反应。

33、比例不适而不出现可见反应。*前带前带(prozoneprozone)抗体过量时。抗体过量时。*后带后带(postzonepostzone)抗原过量时。抗原过量时。比例性示意图比例性示意图抗体过量抗体过量比例合适比例合适抗原的量抗原的量抗原过量抗原过量抗体沉淀的量抗体沉淀的量前带前带等价带等价带后带后带 三、可逆性（三、可逆性（reversibility)reversibility)概念：概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在是指抗原与抗体结合成复合物后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。解离后抗原抗体仍保持原有特性。解离后抗原抗体仍保持原有特性。一定条件：低一定条件：低pHpH、高浓度盐等。高浓度盐等。常用于解离抗原抗体复合物的物质有：常用于解离抗原抗体复合物的物质有：3mol/L3mol/L硫氰化钾、硫氰化钾、pH2.4 0.1mol/LpH2.4 0.1mol/L甘氨酸、甘氨酸、7mol/L7mol/L尿素等。尿素等。抗体抗体混有混有SPAgSPAg抗体抗体-SPAgSPAg抗体抗体-SPAgSPAg分离剂分离剂一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合二、分离抗体二、分离抗体 可逆性示意图可逆性示意图抗体抗体