枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶优选课件.ppt

1、枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。根据底物或产物的物理化学性质固液分离（离心、过滤）1)样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。-淀粉酶alpha-amylase产酶工艺条件及其调节控制外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水2)富集培养:投其所好，取其所抗。广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。1961年国际生物化学

2、与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。盐酸溶液：c(HCI)=0.固液分离（离心、过滤）产品特性:(物理特性)产酶微生物的分离筛选方法碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。2、测定反应液中底物或产物的变化量。原理：-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度

3、与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。固液分离（离心、过滤）用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。0条件下，1h液化1g可溶性淀粉所需的酶量，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。中温-淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.液体为2000 u/ml

4、酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。2、测定反应液中底物或产物的变化量。v=-dS/dt=dP/dt连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。原碘液：称取11.酶的反应速度的影响因素液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。2、从自然界分离筛选发酵液发酵液预处理（细菌絮凝）预处理（细菌絮凝）固液分离（离心、过滤）固液分离（离心、过滤）菌体（胞内酶）菌体（胞内酶）动植物源酶动植物源酶液体（胞外酶）液体（胞外酶）细胞破碎细胞破碎提取提取

5、固液分离固液分离液体液体工业、食品、饲料工业、食品、饲料浓缩浓缩（蒸发、超滤、沉淀）（蒸发、超滤、沉淀）浓缩液浓缩液配方配方干燥干燥医药、分析、科研医药、分析、科研液体酶液体酶固体酶固体酶浓缩浓缩分离纯化分离纯化（离心、沉淀、膜分离、（离心、沉淀、膜分离、层析、电泳、萃取、结晶）层析、电泳、萃取、结晶）配方、制剂配方、制剂干燥干燥液体酶液体酶固体酶固体酶v=-dS/dt=dP/dt碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/25

6、0ml瓶），做好标记。0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。温度范围：90-95产品特性:(物理特性)2、测定反应液中底物或产物的变化量。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等化学测定法、光学测定法、气体测定法等。07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微生物发酵法生产。能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅

7、速下降的酶制剂。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。23 g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)和8.能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。1，求得测试酶液的浓度。酶活力：20000u/ml。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。碘

8、、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。固液分离（离心、过滤）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶00 mL稀碘液为空白，于660 nm波长下，用10 mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。中温-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算:5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/250ml瓶），做好标记。对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈纯。1、菌种：枯草芽孢杆菌能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断

9、成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。固液分离（离心、过滤）2、从自然界分离筛选可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。2，酶活力定义：1ml酶液在70，pH6.-淀粉酶制剂的理化要求07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。2、测定反应液

10、中底物或产物的变化量。0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。根据底物或产物的物理化学性质固液分离（离心、过滤）外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。耐高温a-淀粉酶活力：温度范围：90-951、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。

11、热稳定性：需Ca 2+150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。2、测定反应液中底物或产物的变化量。用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等

12、工业上。固液分离（离心、过滤）00 mL稀碘液的试管中，摇匀，并以0.-淀粉酶alpha-amylase枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。产品特性:(物理特性)中温a一淀粉酶活力：(4)反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。这个单位称为国际单位（IU）（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶酶活力测定的要求：快速、简便、准确。001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，

13、洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。产酶工艺条件及其调节控制0条件下，1分钟液化可溶性淀粉的毫克数。温度范围：90-95由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。发酵结束后：检查是否染菌加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；层析、电泳、萃取、结晶）凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；耐高温-淀粉酶采用地衣芽孢

14、杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的-1，4葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。可溶性淀粉溶液(20 g/L)：称取2.中温-淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。2)恒温水浴中预热8 min；固液分离（离心、过滤）碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。发酵结束时，显微镜检查每个发

15、酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。称取1 g 2 g酶粉(精确至0.发酵结束后：检查是否染菌根据底物或产物的物理化学性质0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。酶活力测定的要求：快速、简便、准确。产酶工艺条件及其调节控制要准确地

16、测定酶的活力，必须满足这些前提条件。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。用四层纱布过滤，滤液待用。（蒸发、超滤、沉淀）n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。热稳定性：需Ca 2+150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬

17、酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。1g固体酶粉(或1 mL液体酶)，于60、pH=6.中温-液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。最适反应条件：最适底物浓度、最适pH、最适温度、最适离子强度、必要的辅助因子；温度范围：90-955 mL，摇匀后，置于

18、600.-淀粉酶alpha-amylase产酶工艺条件及其调节控制0条件下，1 min液化 1 mg可溶性淀粉所需的酶量，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。固液分离（离心、过滤）耐高温a-淀粉酶活力：对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈纯。酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。中温a一淀粉酶活力：碘、碘化钾、-

19、淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。2(耐高温-淀粉酶制剂置于700.2、测定反应液中底物或产物的变化量。(2)根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pH值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。温度范围：90-951、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组1支）酶的反应速度的影响因素稀碘液：吸取原碘液2.酶比活力酶活力（单位）/mg（蛋白或RNA）国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。终止反应法：在恒温反应系统中进行酶促反应，间隔一定时间取样，终止反应，进行测定。酶比活力酶活力（单位）/mg（蛋白或RNA）用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。能水解淀粉分子链中的-1,4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。07 g柠檬酸(C6H8O7H2O)，用水溶解并定容至1 000 mL。4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。