磁珠法-核酸提取新篇章课件.ppt

1、酚-氯仿抽提法碱抽提法CTAB抽提法纤维素膜层析法市场上大多数商业核酸抽提试剂盒采用固相抽提法。相对于传统方法，固相抽提更快速和高效。它解决了许多液-液抽提存在的诸多问题，如分离不完全等。固相抽提方法的支持物主要有硅胶、玻璃颗粒、阴离子交换树脂、磁性颗粒。固相抽提包括细胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脱四个关键性的步骤。首先，基于碱裂解法使细胞膜破裂，以及组蛋白变性，释放核酸。然后，将经裂解液处理的样本转移到固相支持物上，在结合液的帮助下靶核酸被吸附到支持物上。蛋白质等其他化合物也可与支持物表面发生结合，但通过目的性洗涤过程可以被除掉。最后，以TE缓冲液或蒸馏水将纯净的靶核酸从支持物上释放下来。集液

2、管集液管纯化柱纯化柱硅胶滤膜硅胶滤膜裂解裂解使核酸使核酸游离出游离出来来结合结合加入磁珠，加入磁珠，使核酸与使核酸与其结合其结合洗涤洗涤洗去残洗去残留杂质留杂质洗脱洗脱将核酸从将核酸从磁珠中分磁珠中分离出到溶离出到溶液液纯化纯化分离磁分离磁珠，得珠，得到高纯到高纯度核酸度核酸溶液溶液样本量洗脱液量OD260/280浓度离心柱法200-400 l100 l1.7-1.93-10 l磁珠法150-200 l100 l1.7-1.930-70 l离心柱法产品效果图磁珠法产品效果图离心柱法磁珠法适用范围新鲜血液或经抗凝剂（EDTA、柠檬酸）处理后的冷冻血液同前操作环境室温环境进行室温环境进行裂解原理碱

3、裂解法改良的碱裂解法吸附核酸硅胶滤膜包被活性基团的磁珠离心需多次离心不需离心，依靠磁分离纯度较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验产量较低较高自动化抽提不能进行自动化提取能够和核酸自动提取仪配合实现自动化提取用时50-60 min30-40 min价格较低略高主要厂家罗氏，百泰克，天根，生工Thermo，罗氏，ABI，gene-mag，惠尔磁棒磁棒深孔板深孔板1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12ABCDEFGH裂裂解解洗洗涤涤液液洗洗涤涤液液洗洗涤涤液液磁磁珠珠洗洗脱脱裂裂解解洗洗涤涤液液洗洗涤涤液液洗洗

4、涤涤液液磁磁珠珠洗洗脱脱1硅基磁珠硅基磁珠1、一种是针对含有常规量核酸的样本进行提取。如动植物、种子、细菌、质粒等；2、一种是针对含有痕量核酸的样本进行提取。如血清病毒游离、法医样本等。此产品主要应用于核酸提取2氨基磁珠氨基磁珠经活化以后，可以偶联上抗体，作为免疫磁珠使用。免疫检测、免疫诊断3羧基磁珠羧基磁珠经活化后，可以偶联上抗体，作为免疫磁珠使用。免疫检测、免疫诊断Fe3O4磁性微球硅基磁珠SiO2包被包被氨基氨基/羧基羧基包被包被氨基/羧基磁珠Fe3O4磁性微球磁性微球硅基（硅羟基）硅基（硅羟基）氨基氨基/羧基羧基和中科院植物研究所合作，提取百年以上植物的和中科院植物研究所合作，提取百年

5、以上植物的DNA，用于后续的分型及特定位点的分析用于后续的分型及特定位点的分析可用于海关、畜牧检验，检测进出口肉制品或者家禽可用于海关、畜牧检验，检测进出口肉制品或者家禽是否携带病毒是否携带病毒提取质粒，用作基因工程的常用载体提取质粒，用作基因工程的常用载体人类的很多疾病和基因密切相关，白血病、地中海贫血、肾衰竭等都能用基因技术进行分型检测，再寻找合适的供体进行移植治疗；叶酸代谢能力基因检测；DNA亲子鉴定；胎儿性别检测布鲁菌病（brucellosis，布病），也称波状热，是布鲁菌引起的急性或慢性传染病，人畜共患病。全血试剂盒全血试剂盒病毒试剂盒病毒试剂盒能够从血清、血浆等多种病毒样品中（如能

6、够从血清、血浆等多种病毒样品中（如HBV、HPV、HCV），），高效提取和分离病毒总高效提取和分离病毒总DNA或或RNA，也可适用于组织细胞或分泌，也可适用于组织细胞或分泌物样本中的病毒总核酸，提取产物可以直接用于下游应用，如荧物样本中的病毒总核酸，提取产物可以直接用于下游应用，如荧光定量光定量PCR或定量逆转录或定量逆转录PCR等。等。n1.1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，可高效核酸提生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，可高效核酸提取，满足微量生物样本核酸提取的要求。取，满足微量生物样本核酸提取的要求。n2.2.不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂，安全无毒，绿色不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂，安全无毒，绿色环保。环保。n3.3.生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建设对大批量样本提取的需要，减少人为因素设对大批量样本提取的需要，减少人为因素n4.4.用时少，操作简单，适用于大多数生物检材。用时少，操作简单，适用于大多数生物检材。n5.5.全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接触，可有效保护实验操作人员。触，可有效保护实验操作人员。