甲型HN流感病毒样品采集运送及检验技术推荐课件.pptx

1、一、标本的采集种类和要求1、推荐采集的呼吸道标本种类 疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。（附表1）w1）鼻腔抽吸液的采集方法）鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上，另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。2 2）鼻腔擦拭液的采集方法）鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中，摩擦

2、鼻甲数次，采集粘膜表皮。3 3）咽喉擦拭液的采集方法）咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。采集时，要采集时，要注意不要触碰到唾液。（采样视频网址注意不要触碰到唾液。（采样视频网址w2、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。标本采集管应包含3毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）3、临床标本储存要求、临床标本储存要求 保存在保存在4（不能超过（不能超过4天）或者天）或者-70或或-70以下。有条件的实验室均应保存在以下。有条件的

3、实验室均应保存在-70或或-70以下。不应保存在以下。不应保存在-20。4、标本的分装处理、标本的分装处理标本送至实验室后，立即进行处理，避免反标本送至实验室后，立即进行处理，避免反复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复核。（实际操作：采集鼻拭子核。（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）阳性检出率）5、标本的运输、标本的运输 疑似人感染甲型疑似人感染甲型H1N1感染病例列为感染病例列为

4、A类，类，用用UN2814包装运输。填写疑似人感染甲型包装运输。填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单（附表感染病例标本送检单（附表2）。）。w二、核酸检测二、核酸检测w基于基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。病应急工作中发挥了巨大作用。w1、基于、基于real-time RT-PCR的方法检测新的甲型的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和流感病毒（引物和探针序列为美国探针序列为美国CDC设计）：设计）：4月月29日日WHO网站上公布了美国网站上公布了美国CDC设计的针对此次

5、甲型设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼流感病例的呼吸道样本吸道样本,因此，用此因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒的方法，建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。禽流感病毒。real-time RT-PCR方法参考。方法参考。w2、基于、基于RT-PCR的方法检测新的甲型的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物序列为国家流感病毒（引物序列为国家流感中心设计）：流感中心设计）：w目

6、前国家流感中心设计了目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型方法检测新的甲型H1N1流感病毒流感病毒 w三、病毒分离鉴定三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和可采用鸡胚和/或或MDCK细胞进行流感病毒细胞进行流感病毒分离。具备相应条件的网络实验室在收到标分离。具备相应条件的网络实验室在收到标本后本后24h内进行病毒接种。内进行病毒接种。w四、适用于实验室工作人员的甲型四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感流感病毒生物安全病毒生物安全（一）实验室级别及个人防护（一）实验室级别及个人防护 1、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断

7、性实疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作，在验工作，在BSL-2实验室内进行。所有样本实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。遵）内进行。遵循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。2、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。w（二）健康监测 1、所有人员均应自测发热及其他症状。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳

8、嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。3、如有人员在无防护情况下暴露于甲型H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦或扎那米韦进行抗病毒药物预防。w五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单 附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单姓名性别年龄职业 现住址发病日期标本(#)种类标本量（g或ml)采集日期备注遵循生物安全三级个人防护。填表人员：送样时间：单位（盖章)附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单2、对采集自属于感染甲型H1

9、N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N1流感病毒2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。如有不适，应立即向上级报告。气管插管的病人也应收集气管吸取物。real-time RT-PCR方法参考。5、标本的运输 疑似人感染甲型H1N1感染病例列为 A类，用U

10、N2814包装运输。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本,因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。一、标本的采集种

11、类和要求有条件的实验室均应保存在-70或-70以下。w 选项：参照传染病报告卡。#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）采集人员：采集单位（盖章）：附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单姓名性别年龄职业 现住址发病日期标本(#)种类标本量*（g或ml)采集日期备注w选项：参照传染病报告卡。#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）w*标本量：如果同一份标本有多个包装请注明。填表人员：送样时间：单位（盖章)谢谢！一、标本的采集种类和要求1、推荐采

12、集的呼吸道标本种类 疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。（附表1）w四、适用于实验室工作人员的甲型四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感流感病毒生物安全病毒生物安全（一）实验室级别及个人防护（一）实验室级别及个人防护 1、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性

13、实疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作，在验工作，在BSL-2实验室内进行。所有样本实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。遵）内进行。遵循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。2、对采集自属于感染甲型、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。循生物安全三级个人防护。附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单姓名性别年龄职业 现住址发病日期标本(#)种

14、类标本量（g或ml)采集日期备注w 选项：参照传染病报告卡。#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）采集人员：采集单位（盖章）：一、标本的采集种类和要求基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。3、临床标本储存要求 保存在4（不能超过4天）或者-70或-70以下。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染

15、病例标本采样单。三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病毒分离。2、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。遵循生物安全三级个人防护。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。气管插管的病人也应收集气管吸取物。real-time RT-PCR方法参考。4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对

16、此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本,因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，

17、并遵循生物安全三级个人防护。（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单有条件的实验室均应保存在-70或-70以下。（二）健康监测 1、所有人员均应自测发热及其他症状。1、推荐采集的呼吸道标本种类3、临床标本储存要求 保存在4（不能超过4天）或者-70或-70以下。标本量*（g或ml)）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送

18、检单（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。采集时，要注意不要触碰到唾液。五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单2、基于RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物序列为国家流感中心设计）：填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单（附表2）。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个

19、人防护。选项：参照传染病报告卡。（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。*标本量：如果同一份标本有多个包装请注明。目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N1流感病毒（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）real-time RT-PCR方法参考。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物

20、安全三级个人防护。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。3、临床标本储存要求 保存在4（不能超过4天）或者-70或-70以下。附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单1、推荐采集的呼吸道标本种类五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单1）鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上，另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N

21、1流感病毒附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）采集人员：采集单位（盖章）：#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）遵循生物安全三级个人防护。3）咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。）

22、采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。1）鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上，另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。1、基于real-time RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和探针序列为美国CDC设计）：具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。疾病发病后应尽快采集如下标

23、本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单3）咽喉擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，摩擦数次，采集粘膜表皮。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）采集时，要注意不要触碰到唾液。2、感染甲

24、型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。3、如有人员在无防护情况下暴露于甲型H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦或扎那米韦进行抗病毒药物预防。气管插管的病人也应收集气管吸取物。#选项：A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）标本量*（g或ml)2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。1、推荐采集的呼吸道标本种类（实际操作：

25、采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。一、标本的采集种类和要求*标本量：如果同一份标本有多个包装请注明。1、推荐采集的呼吸道标本种类）采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。（实际操作：采集鼻拭子2份，咽拭子2份放在同一病毒采样液中，其目的为了增加阳性检出率）基于PCR原理的核酸检测方法是一种快

26、速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。2、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 （冰箱），并马上送至实验室。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。1）鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上，另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔，启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。3、临床标本储存要求 保存在4（不能超过4天）或者-70或-70以下。五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单3、临床标本储存要求 保存在4（不能超过4天）或者-70或-70以下。附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单姓名性别年龄职业 现住址发病日期标本(#)种类标本量*（g或ml)采集日期备注