第五章化学发光分析课件.ppt

1、第五章 化学发光分析&什么是化学发光（什么是化学发光（chemiluminescence）？）？化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。根据化学发光的强度测定物质含量的分析方法叫化学发光分析。1、不需光源，避免了杂散光的干扰；2、检测灵敏度高；3、仪器设备简单、操作简便。&特点：特点：BPCL&常见化学发光的类型常见化学发光的类型：nA.自身化学发光反应：被测物质为反应物直接参与化学反应，利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。A+BCCexcited stateground statea:h hB.敏化化学发光反应：是指某些化学反应中的由于激发态产物本身不发光或发光十分微弱，

2、但通过加入某种能量接受体（荧光剂）可导致发光。A+BC+Fexcited stateCground stateF+Fb:fluorophoreh hO2-+NHNHONH2OOH-NH2COO-COO-NH2COO-COO-+he eg g：l lu um mi in no ol l反反应应常见的化学发光体系1、鲁米诺化学发光体系NHNHNH2OONNNH2OOH-OOO2/OH-O-ONH2O-O-O2/OH-*O-ONH2O-O-*+hN2+n根据所用的氧化剂不同，Luminol体系又可以分为不同的反应体系，如：Luminol-H2O2体系、Luminol-KMnO4体系、Luminol-

3、I2体系、Luminol-KIO4体系和Luminol-K3Fe(CN)6体系等。其中，应用最为广泛的是Luminol-H2O2体系。CL systemLuminol-H2O2-HRPLuminol-H2O2-HRPLuminol-H2O2-HRPLuminol-H2O2-HRPLuminol-H2O2-HRP（CE/FIA）Luminol-H2O2-quinineLuminol-H2O2-EDTALuminol-H2O2Luminol-H2O2-SnCl2Luminol-H2O2-Cu（LC）Luminol-H2O2(FIA)Luminol-H2O2(FIA)Luminol-H2O2(FIA

4、)Luminol-H2O2(SIA)AnalyteH2O2H2O2Fe(II)Cu(II)Co(II)Cr(VI)Cr(III)Ag(I)Hg(II)阿米卡星雌激素卡托普利甲状腺激素烷基苯磺酸酯类Detection limit4 M8 M0.5 pM1.5 g/L0.5 pM1.2 mM0.16 fM270 nM0.8 g/L50 g/L51 nM2 g/L27 g/mL70 pM2、过氧化草酸酯化学发光（PO-CL）体系 ROC-COR+H2O2ROC-CORO OO OHOOH1.2.ROC-CORO OHOOH分解ROC-COOHO O+ROH3.ROC-COOHO OH2O2HOOC-

5、COOHO O+ROHCCOOOO4.CCOOOOFLFL*+H2O2分解FL*FL+h（FL为荧光物质）3、吖啶酯CL体系 NCH3NCH3.O2-+H2O2NaOH/NCH3NCH3OONCH3O+NCH3O*h4、碱性磷酸酯酶（ALP）化学发光体系nALP能够催化磷酸单酯、磷酸核苷以及磷酸糖类等的水解，在释放磷酸盐的同时，生成相应的醇、酚或胺。nALP应用最为广泛的底物为金刚环氧磷酸（AMPPD）。AMPPD在碱性条件下，被AP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有230min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度 达到高峰，1560min内光强度保持相对稳定。示例示例:化学发光化学发光免疫分析免疫分析化学发光免疫分析化学发光免疫分析HCl-NaCl-Br2Au3+Au3+Luminolanalyteantibody-goldimmobilized primary antibodyon magnetic beadslight