（与名师对话）2014届高考生物一轮复习课件：选修一 第3讲 DNA和蛋白质技术.ppt

1、物理物理 化学化学 化学化学 物理物理 RNA 蛋白质蛋白质 脂质脂质 物理物理 化学化学 NaCl溶液溶液 DNA 杂质杂质 杂质杂质 DNA 蛋白质蛋白质 DNA 蛋白质蛋白质 DNA 蛋白酶蛋白酶 6080 80 6080 细胞核细胞核 DNA DNA DNA 蒸馏水蒸馏水 过滤过滤 洗涤剂洗涤剂 食盐食盐 充分搅拌和研磨充分搅拌和研磨 NaCl 嫩肉粉嫩肉粉 6075 1015 冷却冷却 酒精酒精 白色丝状物白色丝状物 项目项目两支两支20 mL的试管的试管1号号2号号实实验验步步骤骤加入加入2 mol/L的的NaCl溶液溶液 5 mL 5 mL加入丝状物加入丝状物(DNA)用玻璃棒搅

2、拌用玻璃棒搅拌 丝状物溶解丝状物溶解加入二苯胺试剂加入二苯胺试剂 4 mL 4 mL沸水浴加热沸水浴加热 5 min 5 min观察现象观察现象 不变蓝不变蓝 变蓝变蓝 问题探究1：在DNA的提取过程中，DNA的哪种理化性质是提取、提纯的重要依据？提示：DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度。热变热变 80100 冷却冷却 90 单链单链 50左右左右 引物引物 72左右左右 DNA聚合酶聚合酶 三、血红蛋白的提取与分离相对分子质量的大小相对分子质量的大小 相对分子相对分子 质量较小质量较小 凝胶内部的通道凝胶内部的通道 较长较长 较慢较慢 相对分子质量较大相对分子质量较大 在凝胶外部在凝胶外

3、部 较短较短 较快较快 多孔多孔 多糖多糖 酸酸 碱碱 pH pH 缓冲溶液缓冲溶液 pH 电场电场 蛋白质蛋白质 电场电场 带电性质带电性质 大小、形状大小、形状 迁移速度迁移速度 琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 问题探究2：人和哺乳动物的红细胞为什么是提取血红蛋白的理想材料？提示：人的哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。1使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程可表示为图中()【解析】该方法中大分子蛋白质不进入凝胶内部最先流出，小分子进入凝胶内部路径长后流出。【答案】B2下列关

4、于DNA的粗提取实验和血红蛋白的提取实验，叙述正确的是()A前者选择鸡血细胞作为材料较好，后者选择哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料较好B样品预处理时，前者静置1天处理除去上清液；后者需要加入清水，反复低速短时间离心洗涤，至上清液无黄色C在DNA粗提取实验中，往2 mol/L氯化钠溶液中加入蒸馏水析出DNA时，应该缓慢加入，直到出现黏稠物为止D洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐等【解析】鸡血细胞有细胞核，适于提取DNA；哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多细胞器，适用于提取血红蛋白。提取血红蛋白的实验中，洗涤红细胞时，不能加清水，应该加入生理盐水，否则细胞提早释放出血红蛋白与杂质混合，加大

5、提取难度。DNA初次析出时，加蒸馏水至黏稠物不再增加为止。洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，以利于血红蛋白的分离和纯化。【答案】A3标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是()A95、55、72B72、50、92C50、92、72 D80、50、72【解析】当温度上升到90以上(9095)时，双链DNA解旋为单链，称为变性；当温度下降到50左右(4060)时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，称为复性；当温度上升到72(7075)时，溶液中的四种脱氧核苷酸在TaqDNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。【答案】A4现代生物

6、已向两个方面发展，宏观研究的水平为生态系统水平，微观研究的水平为分子水平，对于分子的研究，其物质的提取和分离显得尤为重要。下面是物质提取和分离的相关问题，请回答：(一)DNA分子的提取和分离(1)在提取菜花细胞中的DNA时，采用的是研磨法，为什么不能像用鸡血那样，用蒸馏水使其破裂？_。(2)在提取实验过程中用到两种浓度的NaCl溶液，说明其作用：2 m o l/L N a C l 溶 液：_；0.1 4 m o l/L N a C l 溶 液：_。(3)在整个操作过程中，每100 mL血液中加入 3 g 柠 檬 酸 钠 的 作 用 是：_。(4)鉴定DNA所用的试剂：_。(二)血红蛋白的提取和

7、分离(1)在血红蛋白的提取和分离过程中：粗分离、纯化和纯度鉴定时，都会用到缓冲溶液，其作用是_。(2)在洗脱过程中，对洗脱液的流速要求稳定的目的是：_(三)不同的化学物质，其理化特性不同，提取方法也有所差异，如胡萝卜素不溶于水，易溶于_，因此可以用_方法进行提取。【解析】(一)(1)DNA分子提取中理想的材料为富含DNA的细胞，动物中鸡血细胞核，放入蒸馏水中会使细胞涨破释放出DNA，而植物细胞含有细胞壁不能因吸水而涨破。(2)实验过程中两次用到NaCl溶液，初次为2 mol/L的NaCl溶液，用于溶解DNA，而0.14 mol/L的NaCl溶液会使DNA析出。(3)为了防止凝血现象的发生应加入

8、柠檬酸钠。(4)鉴定DNA所用的试剂为二苯胺试剂。(二)(1)为保持蛋白质的生理活性，防止变性从而用缓冲液保持pH的恒定。(2)洗脱液的液速变化过快，导致分离纯化不充分。(三)胡萝卜素的化学性质比较稳定，不溶于水，易溶于有机溶剂。因此可以用有机溶剂作萃取剂，以萃取的方法来提取。【答案】(一)(1)植物细胞具有细胞壁，不会吸水涨破，只有通过研磨，才能释放出DNA。(2)溶解DNA分子，过滤并除去不溶于NaCl溶液的杂质使DNA分子析出，过滤并除去溶于NaCl溶液中的杂质(3)防止出现凝血(4)二苯胺试剂(二)(1)维持血红蛋白环境中pH的稳定(2)维持洗脱液加在色谱柱上的压力稳定(三)有机溶剂有

9、机溶剂萃取1.原理、方法和目的基本原理基本原理方法方法目的目的DNA在不同在不同浓度的浓度的NaCl溶液中的溶解溶液中的溶解度不同，在度不同，在0.14 mol/L的的NaCl溶液中溶液中的溶解度最低的溶解度最低溶于溶于NaCl溶液中并溶液中并稀释稀释NaCl溶液为溶液为2 mol/L时，时，DNA溶溶解，而部分蛋白质发生盐析而生解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于白质及不溶于NaCl溶液的杂质溶液的杂质当当NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14 mol/L时时，DNA析出，过滤可除去溶于析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他

10、杂质中的部分蛋白质和其他杂质基本原理基本原理方法方法目的目的DNA不被蛋白不被蛋白酶所水解酶所水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质蛋白质DNA不溶于不溶于酒精溶液酒精溶液加入冷却酒精加入冷却酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋析出，除去溶于酒精的蛋白质白质DNA可被二可被二苯胺染成蓝色苯胺染成蓝色加入二苯胺，加入二苯胺，并沸水浴并沸水浴鉴定鉴定DNA3实验步骤(1)步骤：提取血细胞核物质(蒸馏水涨破)溶解(2 mol/L的NaCl)过滤(除杂质)析出(滴蒸馏水，降NaCl浓度至0.14 mol/L)过滤再溶解(2 mol/L的NaCl)过滤进

11、一步提纯(体积分数为95%的冷却酒精)鉴定。(2)鉴定【解析】本题考查DNA粗提取与鉴定实验的基本知识。洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA在NaCl溶液中的溶解度无影响，故A错误；DNA丝状物需先溶解在适宜浓度的NaCl溶液中，然后加入二苯胺试剂，混合均匀后沸水浴，待冷却后溶液变蓝，故B错误；常温下菜花匀浆中有些水解酶可能会使DNA水解而影响DNA的提取，故C正确；用玻璃棒朝一个方向缓慢搅拌可减轻对DNA分子的破坏，有利于DNA分子的提取，故D错误。【答案】C1.实验步骤中3次加入NaCl溶液的浓度和作用：浓度均为2 mol/L，作用均为溶解DNA。2实验步骤中2次加入蒸馏水的目的：第一次加入是使

12、鸡血细胞吸水涨破，第二次是稀释NaCl溶液至0.14 mol/L，从而析出DNA。3实验中4次过滤的比较第一次过第一次过滤滤第二次过滤第二次过滤第三次过滤第三次过滤第四次过滤第四次过滤滤液中滤液中含含DNA的的核物质核物质DNA溶于溶于0.14 mol/L NaCl溶液的杂溶液的杂质质DNA纱布上纱布上细胞膜、细胞膜、核膜等残核膜等残片片溶于溶于2 mol/L NaCl溶液的溶液的杂质杂质DNA不溶于不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂溶液的杂质质过滤前过滤前加入的加入的物质物质蒸馏水蒸馏水NaCl溶液溶液蒸馏水蒸馏水NaCl溶液溶液过滤的过滤的目的目的去除细胞去除细胞膜、核膜膜、核膜等杂质

13、等杂质去除不溶于去除不溶于2 mol/LNaCl的的杂质杂质去除溶于去除溶于0.14 mol/LNaCl溶液溶液的杂质的杂质去除不溶于去除不溶于2 mol/LNaCl溶液溶液的杂质的杂质4.其他注意事项(1)甲基绿可将DNA染成绿色且不需水浴加热，二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要沸水浴加热5 min，可使DNA呈蓝色。(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。(3)DNA进一步提纯(第四次过滤的滤液)时要选用预冷的95%的酒精，作用如下：抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；降低分子运动，易于形成沉淀析出；低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。1(2012蚌埠期末)

14、在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中的分析正确的是()A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C洗涤过程选用0.1%的生理盐水D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质【解析】透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质和更换样品的缓冲液。【答案】D2(2012南京质检)下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是()A透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性B采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来C离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离D蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相

15、同的电极方向移动【解析】带电离子或分子在电场中向着与其所带电荷相反的电极移动。【答案】D3某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20、另一组置于20条件下保存24 h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6支试管，分别加入等量的2 moL/L NaCl溶液溶解

16、上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。(注：“”越多表示蓝色越深)材料保存温度材料保存温度花菜花菜辣椒辣椒蒜黄蒜黄2020分析上述实验过程，回答下列问题：(1)该 探 究 性 实 验 课 题 的 名 称 是_。(2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少_。(3)根据实验结果，得出结论并分析。结论1：与20相比，相同实验材料在20条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：_。针 对 结 论 1，请 提 出 合 理 的 解 释：_。(4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，

17、且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是：_。然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。【解析】本题考查DNA的粗提取和鉴定的相关知识，分析题意可知自变量是材料不同和材料保存温度不同，因变量是DNA提取量不同。实验目的则是探究不同保存温度和不同材料对DNA提取量的影响。【答案】(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响(2)DNA断裂(3)等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄中提取的DNA量最多低温抑制了相关酶的活性，DNA降解速率慢(4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清

18、液1.PCR的反应过程(1)变性：当温度上升到90以上时，双链DNA解旋为单链，如下图：(2)复性：温度下降到50左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：(3)延伸：温度上升到72左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：2PCR扩增技术和DNA复制的比较DNA复制复制 PCR扩增技术扩增技术场所场所 主要在细胞核内主要在细胞核内 生物体外生物体外原理原理 碱基互补配对碱基互补配对 碱基互补配对碱基互补配对酶酶 DNA聚合酶、解旋酶聚合酶、解旋酶耐热的耐热的DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)条件条件模板、模板、ATP、引

19、物链、引物链(RNA)、常温、常温模板、模板、ATP、引物链、引物链(DNA及及RNA片段片段)、温度变化、温度变化(909555607075)原料原料 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸特点特点形成的是整个形成的是整个DNA分子，分子，一个细胞周期只复制一次一个细胞周期只复制一次短时间内形成大量目的基短时间内形成大量目的基因因DNA片段，呈指数增长片段，呈指数增长2n(1)PCR的全称是_。PCR与体内DNA复制的不同之处主要表现在温度环境的不同，在PCR技术中先用95高温处理的目的是_，而这一过程在细胞内是通过_实现的。(2)在PCR技术中所需要的引物实质上是一种_

20、。请在图中绘出引物结合的位置。(3)若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入_个引物。(4)DNA子链复制的方向是_，这是由于_。【解析】本题考查考生对PCR技术的理解，属于知识识记和理解层次的考查。PCR技术又称多聚酶链式反应。在PCR技术中，用95高温处理的目的是使DNA分子中的氢键断裂，两条链解开，即使DNA分子变性。引物是一种单链DNA或RNA分子，它能与解开的DNA母链的3端结合，为DNA聚合酶提供吸附位点，使DNA聚合酶从引物的3端开始连接脱氧核苷酸，从而决定了DNA子链复制的方向是从5端到3端。在DNA分子扩增时，需要2种引物，由于新合成的子链都需要引物作为复制的起

21、点，故所需的引物数目等于新合成的DNA子链数目，即221022112(个)。【答案】(1)多聚酶链式反应使DNA变性(使DNA的两条链解开)解旋酶的催化(2)单链DNA或RNA分子如图所示(3)2112(4)从5端到3端DNA聚合酶只能从引物的3端开始连接单个脱氧核苷酸分子1(2012湖北联考)下列关于PCR的描述，不正确的是()APCR技术的原理是DNA的半保留复制B是一个酶促反应，需耐高温的解旋酶和聚合酶C一个DNA片段经PCR扩增，可形成2n个DNA片段(n表示循环次数)DPCR利用了DNA的热变性来控制解旋与重螺旋【解析】PCR以极少数的DNA为模板，以四种脱氧核苷酸为原料，在引物的作

22、用下使DNA聚合酶从引物的3端连接脱氧核苷酸，短时间内迅速复制百万份DNA拷贝。PCR利用DNA在不同温度下变性解聚或复性的特性来解旋并结合引物，不需要解旋酶来解旋。【答案】B2(2012湘潭一模)下列有关PCR实验操作的叙述，不正确的是()A在微量离心管中添加各种试剂时，只需一个枪头B离心的目的是使反应液集中在离心管底，提高反应效果C用手轻弹离心管管壁的目的是使反应液充分混合D离心管的盖子一定要盖严，防止液体外溢【解析】添加各种试剂时需要用到微量离心管，每吸取一种试剂后，都需更换离心管枪头。【答案】A3PCR技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，如图表示合成过程，请据图分析

23、回答：(1)A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述，正确的是()A该过程用耐高温的解旋酶破坏氢键B该过程用限制酶破坏磷酸二酯键C该过程不需要解旋酶的作用D该过程与人体细胞的过程完全相同(2)C过程要用到的酶是_，这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以加入_次，_(需要、不需要)再添加。PCR反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有_。(3)如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“955572”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占_。【解析】本题考查PCR的过程和条件。在熟知细胞内DNA复制过程和PCR过程异同点的前提下，会运

24、用DNA复制的有关原理是解答本题的关键。(1)高温所起的作用类似于解旋酶，使双链DNA变为单链，因此A过程不需要解旋酶的参与。(2)C过程为PCR技术的延伸阶段，当系统温度上升至72左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在Taq DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。Taq DNA聚合酶是耐热的，高温下不变性，所以一次性加入即可。(3)PCR技术遵循半保留复制的特点。经过3次循环，共产生23个DNA分子，其中有2个DNA分子含有15N标记。【答案】(1)C(2)Taq DNA聚合酶一不需要DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行(3)25

25、%1.蛋白质分离的依据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来提取和分离不同种类的蛋白质。2方法及原理(1)凝胶色谱法原理蛋白质蛋白质比较比较相对分子质量大相对分子质量大 相对分子质量小相对分子质量小凝胶内部凝胶内部 不能进入不能进入 能进入能进入运动方式运动方式 垂直向下垂直向下垂直向下和无规则扩散运动垂直向下和无规则扩散运动经过路程经过路程 较短较短 较长较长洗脱次序洗脱次序 先流出先流出 后流出后流出凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗脱液体积大，样凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗

26、脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。(2)凝胶电泳法原理凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。如下表：决定运决定运动方向动方向形成形成库仑力库仑力形成形成阻力阻力决定运决定运动速率动速率电荷性质电荷性质电荷量电荷量 分子形状分子形状 分子大小分子大小 3.实验操作流程(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有_功能。我们通常选用猪、牛、羊等动物的血液，进行实验前取新鲜的血液，

27、要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。其中加入柠檬酸钠的目的是_。(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_；乙装置中，C溶液的作用是_。(3)甲装置用于_，目的是_。用乙装置分离蛋白质的方法叫_，是根据_分离蛋白质的有效方法。在操作中加样(下图)的正确顺序是_。(4)最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行_。【解析】血红蛋白的提取与分离过程中，在使红细胞破裂释放出血红蛋白后，先进行透析去除小分子杂质，然后再利用凝胶色谱法利用分子大小的差异对血红蛋白分子进行分离。【答案】(1)运输防止血液凝固(2)磷酸缓冲液洗脱血红蛋白(3)透析(粗分离)去除样品中分子量较

28、小的杂质凝胶色谱法相对分子质量的大小(4)纯度鉴定1.红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。2.血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。3.为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需12 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。4滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。1分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000 r/min的速度离心1

29、0 min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层。下列描述中，正确的是()A第1层为无色透明的甲苯层B第2层为红色透明层，含血红蛋白C第4层为白色薄层固体，是脂溶性沉淀物D第3层为暗红色沉淀物，含破裂的细胞【解析】采集的血样先经处理分离出红细胞，然后在蒸馏水和甲苯的作用下，使红细胞破裂释放出血红蛋白。分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000 r/min速度离心10 min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层：第1层为无色透明的甲苯层；第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层；第3层是红色透明液体，是血红蛋白的水溶液；第4层是杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂

30、溶性杂质沉淀层，于分液漏斗静置片刻后，分出下层的红色透明液体即血红蛋白水溶液。【答案】A2(2011广东卷)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是()A洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测D在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢【解析】D项考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理，相对分子质量越大的通过凝胶色谱柱的速度越快，故D错误。A正确，洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的是生理盐水，缓慢搅拌10 min，低速短时间离心，重复洗涤三次，直至上清液不再呈现黄色

31、，表明红细胞已洗涤干净。B正确，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器，提纯时杂蛋白较少。C正确，血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱法分离过程中可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液(如果操作都正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出)，这使得血红蛋白的分离过程非常直观，简化了操作。【答案】D3蛋白质的肽链之间可通过二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因相对分子质量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析蛋白质的电泳结果图，“”代表没加还原剂，“”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表某些已知相对分子质量的蛋白质或多肽，M右侧的数字代表这些蛋

32、白质或多肽的相对分子质量。右图中的“”代表二硫键。根据左侧结果，下图中最能代表该蛋白质结构的是()【解析】本题考查蛋白质结构的有关知识，中等难度。根据电泳结果图和题意分析，左图是一个分析细菌蛋白的电泳结果图，由于“”代表没加还原剂，可见所分析的细菌蛋白为一条相对分子质量约为130的多肽，加还原剂打断二硫键后，由左图“”可知，所分析细菌蛋白的这条多肽已被分解为相对分子质量约为30与50的多肽，由于多肽链总相对分子质量约为130，可推知经二硫键打断后的多肽应是2条相对分子质量为50的多肽，l条相对分子质量为30的多肽，即选C。【答案】C“血红蛋白的提取和分离实验”中的注意事项1红细胞的洗涤：洗涤次

33、数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。2凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的气泡。3色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。4色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。(3)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，凝胶色谱柱必须重新装填。这是因为_。【解析】柠檬酸钠是一种抗凝剂，能够防止血液凝固。凝胶色谱柱中如果产生了气泡，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。【答案】(1)防止血液凝固(2)血红蛋白的释放透析分液漏斗(3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果课时作业课时作业(四十四十)