蓝芩口服液质量标准研究课件.pptx

1、蓝芩口服液蓝芩口服液Lanqin Koufuye板蓝根板蓝根黄芩黄芩栀子栀子黄柏黄柏胖大海胖大海水提醇沉法水提醇沉法11按处方称取合格药材，加适量水煎煮按处方称取合格药材，加适量水煎煮3 3次，合并煎煮液，浓缩次，合并煎煮液，浓缩至相对密度为至相对密度为1.101.10，加入乙醇，使含醇量在，加入乙醇，使含醇量在60%60%左右，于左右，于0505 下静置下静置24h24h以上，取上清液，减压回收乙醇至尽，浓缩以上，取上清液，减压回收乙醇至尽，浓缩至相对密度为至相对密度为1.151.201.151.20，加适量纯化水调成体积约为药材量，加适量纯化水调成体积约为药材量的的0.60.6倍，即得蓝芩

2、清膏。倍，即得蓝芩清膏。药材药材浓缩浓缩乙醇乙醇静置静置取上清液取上清液浓缩浓缩蓝芩清膏蓝芩清膏纯化水纯化水煎煮煎煮水水调节调节pH加水搅匀加水搅匀滤过滤过灌装灌装灭菌灭菌参考文献参考文献:1 李赛荣,曹玉明,卜令斌.蓝芩口服液絮凝澄清工艺研究J.中国药业,2005,14(2):51-52.本品为棕红色的澄清液本品为棕红色的澄清液体，味甜、微苦。体，味甜、微苦。鉴别、检查、含量测定 1、用、用薄层色谱法（薄层色谱法（TLC）对蓝芩口服液中对蓝芩口服液中黄芩苷黄芩苷、栀子苷栀子苷、盐酸小檗碱盐酸小檗碱等主要成分等主要成分进行鉴别。进行鉴别。2、主要通过检验蓝芩口服液的、主要通过检验蓝芩口服液的相

3、对密度相对密度、PH值值及及其他有关规定项其他有关规定项应符合中国药典规应符合中国药典规定。定。3、用、用高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）对蓝芩口服对蓝芩口服液中液中栀子苷栀子苷含量进行测定。含量进行测定。取本品取本品5ml，置，置10ml量瓶中，加甲量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品供试品溶液。另取溶液。另取黄芩苷黄芩苷对照品，加甲醇对照品，加甲醇制成每制成每1ml含含1mg的溶液，作为的溶液，作为对对照品照品溶液。照溶液。照薄层色谱法薄层色谱法(中国药中国药典典2010年版一部附录年版一部附录 B)试验，吸试验，吸取上述两种溶液各取上述两种溶液各5

4、l，分别点于，分别点于同一用同一用4醋酸钠溶液制备的醋酸钠溶液制备的硅胶硅胶G薄层板薄层板上，以醋酸乙酯上，以醋酸乙酯-丁酮丁酮-甲酸甲酸-水水(5:3:1:1)为为展开剂展开剂，展开，取出，展开，取出，晾干，喷以晾干，喷以2三氯化铁乙醇溶液。三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。应的位置上，显相同颜色的斑点。供试品供试品对照品对照品图图1 黄芩苷黄芩苷TLC图图 取取栀子苷栀子苷对照品，加甲醇制成每对照品，加甲醇制成每1ml含含1mg的溶液，作为的溶液，作为对照品对照品溶溶液。照液。照薄层色谱法薄层色谱法(中国药典中国药典

5、2010年版一部附录年版一部附录 B)试验，吸取试验，吸取【鉴别鉴别】(1)项的项的供试品供试品溶液与上溶液与上述对照品溶液各述对照品溶液各5l，分别点于同，分别点于同一一硅胶硅胶GF254薄层板薄层板上，以氯仿上，以氯仿-甲甲醇醇(3:1)为为展开剂展开剂，展开，取出，展开，取出，晾干，置紫外光灯晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑相应的位置上，显相同颜色的斑点。点。供试品供试品对照品对照品图图2 栀子苷栀子苷TLC图图取本品取本品10ml，用正丁醇提取，用正丁醇提取2次，每次次，每次10ml，合并

6、正丁醇提取液，置水浴上蒸干，残渣合并正丁醇提取液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇加乙醇2ml使溶解，加在已处理好的中性氧使溶解，加在已处理好的中性氧化铝柱化铝柱(中性氧化铝中性氧化铝3g，100120目，内径目，内径约约10mm，干法装柱，干法装柱)上，以氯仿上，以氯仿25ml洗脱，洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶使溶解，作为解，作为供试品供试品溶液。另取溶液。另取盐酸小檗碱盐酸小檗碱对对照品，加乙醇制成每照品，加乙醇制成每1ml含含1mg的溶液，作的溶液，作为为对照品对照品溶液。照溶液。照薄层色谱法薄层色谱法(中国药典中国药典2010年版一部附录年版一部

7、附录 B)试验，吸取上述两试验，吸取上述两种溶液各种溶液各4l，分别点于同一，分别点于同一硅胶硅胶G薄层板薄层板上，以苯上，以苯-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-异丙醇异丙醇-浓氨试液浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为为展开剂展开剂，展开，取出，晾，展开，取出，晾干，置紫外光灯干，置紫外光灯(365nm)下检视。下检视。供试品色供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。相同的黄色荧光斑点。供试品供试品对照品对照品图图3 盐酸小檗碱盐酸小檗碱TLC图图相对密度相对密度 应不低于应不低于1.05(中国药典中国药典2010年版一年版一部

8、附录部附录 A)。pH值值 应为应为4.05.5(中国药典中国药典2010年版一部附年版一部附录录 G)。其他其他 应符合合剂项下有关的各项规定应符合合剂项下有关的各项规定(中国药中国药典典2010年版一部附录年版一部附录 J)。照照高效液相色谱法高效液相色谱法(中国药典中国药典2010年版一部附录年版一部附录 D)测定。测定。色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用用十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶为填为填充剂；充剂；0.05mol/L磷酸氢二钠磷酸氢二钠-甲醇甲醇(70:30)为流动相；检测波长为流动相；检测波长为为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于。理论板数按

9、栀子苷峰计算应不低于1200。对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取精密称取栀子苷栀子苷对照品对照品4mg，加，加50甲醇甲醇制成每制成每1ml含含0.04mg的溶液，即得。的溶液，即得。供试品溶液的制备供试品溶液的制备 精密量精密量取本品取本品1ml，置，置10ml量瓶中，加甲量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液用醇稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液用0.45m的微孔滤膜的微孔滤膜滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置，置10ml量瓶中，加量瓶中，加50甲醇至刻度，摇匀，即得。甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法测定法 分别精密吸取分别精密吸取对照品

10、对照品溶液与溶液与供试品供试品溶液各溶液各10l，注入，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每支含栀子以栀子苷本品每支含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于计，不得少于25.0mg。HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量21 仪器与试药仪器与试药岛津岛津 LC-10AT 型型高效液相色谱仪高效液相色谱仪，岛津，岛津SPD-10AVP 型型紫外可见光检测紫外可见光检测器器。甲醇甲醇(色谱纯色谱纯)，磷酸氢二钠，磷酸氢二钠(分析纯分析纯)，栀子苷对照品栀子苷对照品(中国药品生物制品中国药品生物制品检定所检定所)，蓝芩口服液供试

11、品蓝芩口服液供试品(江苏扬子江药业集团生产江苏扬子江药业集团生产,批号批号:030426 和和表表 1)参考文献参考文献:2 黄淑萍,李雪兰,陈铁山,张玉斌,付永山.HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量J.中国药事,2005,19(11):667-669.批号批号030306030531030601030602030819030917030919031017031018031019原方法原方法(mgml-1)6.86.65.35.85.66.15.55.85.04.5HPLC(mgml-1)6.085.635.356.115.786.295.116.114.474.41表表1 10 1 10

12、 批样品的栀子苷含量测定表批样品的栀子苷含量测定表2 方法及结果方法及结果2.1 色谱条件色谱条件:色谱柱色谱柱:Kronasil C18柱柱(5m,4.6mm x x 250mm);流动相流动相:0.05mol L-1磷酸磷酸二氢钠二氢钠-甲醇甲醇(70:30);流速流速:1.0mol min-1,检测波长检测波长:238nm。柱温。柱温:室温室温;进样量进样量:20 l;理论板数理论板数:按栀子苷峰计算应不低于按栀子苷峰计算应不低于 1200。2.2 溶液配制溶液配制对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品精密称取栀子苷对照品4mg,置于置于100ml量瓶中量瓶中,加入加入甲

13、醇甲醇-水水(1:1)至刻度至刻度,摇匀后作为对照品溶液。摇匀后作为对照品溶液。供试品溶液的制备供试品溶液的制备 精密量取蓝芩口服液精密量取蓝芩口服液1ml置于置于10ml量瓶中量瓶中,加入甲醇加入甲醇稀释至刻度稀释至刻度,摇匀摇匀,静置。取上清液用滤膜静置。取上清液用滤膜(0.45m)过滤过滤,再精密吸取续滤再精密吸取续滤液液1ml置置10ml量瓶中量瓶中,加甲醇加甲醇-水水(1:1)稀释至刻度稀释至刻度,摇匀摇匀,作为供试品溶液。作为供试品溶液。阴性对照溶液的制备阴性对照溶液的制备 取除栀子药材之外的其它药材取除栀子药材之外的其它药材,按按【制法制法】项下的项下的方法制备样品方法制备样品,

14、精密量取样品精密量取样品1ml,同法制备阴性对照溶液。同法制备阴性对照溶液。测定测定 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10l,注注入液相色谱仪、记录色谱图入液相色谱仪、记录色谱图,测定测定,即得。即得。本品中以本品中以 每支含每支含栀子苷栀子苷(C17H 24O10)计计,不得低于不得低于25mg。0 05 510101515 t/mint/min0 05 510101515 t/mint/min0 05 510101515 t/mint/min图图 栀子苷栀子苷 HPLC HPLC 色谱图色谱图abc1212a 对照品；b

15、供试品；c 阴性对照1 栀子苷峰；2 黄芩苷峰 2.3 线性关系考察线性关系考察精密称取精密称取4.8mg栀子苷对照品栀子苷对照品,置于置于100ml量瓶中量瓶中,摇匀作为贮备液摇匀作为贮备液,再精密再精密吸取贮备溶液吸取贮备溶液2、4、6、8、10ml分别置于分别置于10ml量瓶中量瓶中,加入甲醇加入甲醇-水水(1:1)稀稀释至刻度释至刻度,摇匀摇匀,作为对照品溶液。再精密吸取各对照品溶液作为对照品溶液。再精密吸取各对照品溶液20l,注入色谱注入色谱仪仪,记录栀子苷的峰面积。以进样量为横坐标记录栀子苷的峰面积。以进样量为横坐标,栀子苷峰面积为纵坐标栀子苷峰面积为纵坐标,得得回归方程回归方程:

16、y=280.1+80093.2x,r=0.9999。结果表明栀子苷在。结果表明栀子苷在 0.192 0.96gml-1范围内范围内线性关系良好线性关系良好。2.4 精密度试验精密度试验取样品溶液取样品溶液,照含量测定项下的方法进行测定照含量测定项下的方法进行测定,连续进样连续进样6次次,测得峰面积平测得峰面积平均值为均值为 46061,相对标准偏差为相对标准偏差为1.3%。2.5 重复性试验重复性试验取同一批号样品取同一批号样品,按含量测定项下方法制备按含量测定项下方法制备5份供试品溶液进行测份供试品溶液进行测 定定,栀子栀子苷平均含量为苷平均含量为4.37mg/支支,RSD为为1.2%。2.

17、6 稳定性试验稳定性试验将批号将批号(030426)样品依法制备样品依法制备,每隔每隔 2小时测定一次小时测定一次,平均峰面积为平均峰面积为 42459,RSD为为1.3%,结果表明结果表明10小时之内样品稳定小时之内样品稳定。2.7 加样回收试验加样回收试验精密吸取蓝芩口服液精密吸取蓝芩口服液(含量含量4.41mgml-1)1ml置于置于10m l量瓶中量瓶中,再加入精密称再加入精密称取的栀子苷对照品取的栀子苷对照品,按照供试品的处理和测定方法进行测定按照供试品的处理和测定方法进行测定,计算栀子苷的计算栀子苷的回收率回收率,见表见表2。样品中栀子样品中栀子苷的量苷的量(mg)4.41加入的栀

18、子加入的栀子苷量苷量(m g)3.83.84.04.04.84.8测出的栀子测出的栀子苷量苷量(mg)8.198.158.378.329.109.14回收率回收率(%)99.598.499.097.897.998.5平均回收率平均回收率(%)98.5RSD(%)0.66表表2 栀子苷加样回收率的测定结果表栀子苷加样回收率的测定结果表2.8 样品的测定样品的测定原方法原方法:精密量取样品溶液精密量取样品溶液10l,照薄层色谱法试验照薄层色谱法试验,点于硅胶点于硅胶 GF254薄层板薄层板上上,使成条状。另取栀子苷对照品溶液使成条状。另取栀子苷对照品溶液(1mgml-1)5l 点于供试品条斑一点于

19、供试品条斑一侧作为对照侧作为对照,以氯仿以氯仿-甲醇甲醇(3:1)为展开剂为展开剂,展开展开,晾干。置紫外光灯晾干。置紫外光灯(254和和365)下检视下检视,刮取样品色谱与栀子苷对照色谱相应位置上的斑点。同时刮刮取样品色谱与栀子苷对照色谱相应位置上的斑点。同时刮取相应位置上等面积的空硅胶取相应位置上等面积的空硅胶GF254,分别置于分别置于10m l具塞试管中具塞试管中,各精密加各精密加10ml甲醇甲醇,剧烈振摇剧烈振摇5分钟分钟,离心离心,倾取上清液。以第二管作空白倾取上清液。以第二管作空白,用分光光用分光光度法试验度法试验,测定在测定在239nm波长处的吸收度波长处的吸收度,根据标准曲线

20、计算出样品溶液中根据标准曲线计算出样品溶液中栀子苷的含量。栀子苷的含量。取取10批样品批样品,按原含量测定方法按原含量测定方法(薄层扫描分光光度法薄层扫描分光光度法)与修改的含量测定与修改的含量测定方法测定方法测定(HPLC法法),结果见表结果见表 1。批号批号030306030531030601030602030819030917030919031017031018031019原方法原方法(mgml-1)6.86.65.35.85.66.15.55.85.04.5HPLC(mgml-1)6.085.635.356.115.786.295.116.114.474.41表表1 10 1 10 批

21、样品的栀子苷含量测定表批样品的栀子苷含量测定表结果表明结果表明:两种方法测定的结果相差不大两种方法测定的结果相差不大,高效液相色谱法可行。高效液相色谱法可行。3 讨论讨论原方法为薄层扫描分光光度法原方法为薄层扫描分光光度法,操作繁琐操作繁琐,误差大误差大。而。而高效液相色谱法高效液相色谱法操作操作简单方便简单方便,系统系统误差小误差小,故改用高效液相色谱法进行其含量测定。故改用高效液相色谱法进行其含量测定。清热解毒，利咽消肿。用于急性咽炎、肺胃实清热解毒，利咽消肿。用于急性咽炎、肺胃实热证所致的咽痛、咽干、咽部灼热等症。热证所致的咽痛、咽干、咽部灼热等症。口服，一次口服，一次20ml，一日，一日3次。次。每支装每支装10ml。密封，置阴凉处。密封，置阴凉处。