细菌学检验-衣原体课件.ppt

1、第第16章章 衣原体衣原体 （Chlamydiae）下页退出总目录上页下页退出返回内容提要内容提要章目录导航栏章目录导航栏概述概述沙眼衣原体沙眼衣原体肺炎嗜衣原体肺炎嗜衣原体共同特性共同特性衣原体分类衣原体分类生物学性状生物学性状致病性与免疫致病性与免疫生物学性状生物学性状致病性与免疫致病性与免疫微生物检查微生物检查防治原则防治原则鹦鹉热衣原体鹦鹉热衣原体总目录上页下页退出返回概述概述u定义定义:一类严格真核细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细一类严格真核细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物，归属于细菌学范畴菌滤器的原核细胞型微生物，归属于细菌学范畴 u共同特性

2、共同特性 有细胞壁，革兰阴性，呈圆形或椭圆形有细胞壁，革兰阴性，呈圆形或椭圆形 具有独特的发育周期，类似细菌的二分裂方式繁殖具有独特的发育周期，类似细菌的二分裂方式繁殖 有有DNA和和RNA两种核酸两种核酸 含有核糖体；含有核糖体；具有严格的细胞内寄生性具有严格的细胞内寄生性 对多种抗生素敏感。对多种抗生素敏感。总目录上页下页退出返回衣原体科衣原体科衣原体属衣原体属 (3(3个种个种)沙沙眼眼衣衣原原体体鼠鼠衣衣原原体体猪猪衣衣原原体体嗜衣原体属嗜衣原体属 (6(6个种个种)肺肺炎炎嗜嗜衣衣原原体体鹦鹦鹉鹉热热嗜嗜衣衣原原体体兽兽类类嗜嗜衣衣原原体体流流产产嗜嗜衣衣原原体体猫猫嗜嗜性性衣衣原原

3、体体豚豚鼠鼠嗜嗜性性衣衣原原体体衣原体分类衣原体分类总目录上页下页退出返回四种衣原体的性状比较四种衣原体的性状比较 性状沙眼衣原体肺炎衣原体鹦鹉热衣原体 兽类衣原体自然宿主人、小鼠人鸟类、低等哺乳类牛、羊主要人类疾病沙眼性传播疾病幼儿肺炎肺炎呼吸道感染肺炎呼吸道感染呼吸道感染原体形态圆、椭圆梨形圆、椭圆圆包涵体糖原+血清型18I(TW AR株)不明3DNA 与相同衣原体种同源性 与不同衣原体种90%90%10%14%95%10%88%100%对磺胺的敏感性敏感不敏感不敏感不敏感总目录上页下页退出返回生物学性状生物学性状u发育周期与形态染色发育周期与形态染色 衣原体发育周期包括原体和网状体衣原体

4、发育周期包括原体和网状体 原体（原体（Elementary body，EB）v呈球形、椭圆形或梨形，直径0.20.4m。v是发育成熟的衣原体。v原体具有强感染性，在宿主细胞外较为稳定，无繁殖能力。当进入宿主易感细胞后，宿主细胞膜围于原体外形成空泡，原体在空泡中逐渐发育，增殖成为网状体。vGiemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。总目录上页下页退出返回 网状体（网状体（Reticuiate body），亦称始体（），亦称始体（Initial body）v体积较大，直径0.51.0m，圆形或椭圆形v电子致密度较低，无胞壁，代谢活跃，以二分裂方式繁殖，在空泡内增殖成许多子代原体v成

5、熟的子代原体从被破坏的感染细胞中释放，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期，每个发育周期约4872hv网状体是衣原体发育周期中的繁殖型，不具感染性vMacchivello染色呈蓝色 包涵体（包涵体（Inclusion body）：v系指在易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡。v由于发育时期不同，包涵体的形态和大小都有差别。成熟的包涵体含大量的原体。总目录上页下页退出返回衣原体的发育周期衣原体的发育周期原体吸附于细胞，并被吞入，原体吸附于细胞，并被吞入，8小时后发育成始体并增殖；小时后发育成始体并增殖；30小时后始体开始分化小时后始体开始分化为原体，并在细胞形成包涵体；为原体，并在细胞形成包涵

6、体；48小时后细胞破裂，释放的原体继续感染邻近细胞。小时后细胞破裂，释放的原体继续感染邻近细胞。总目录上页下页退出返回原体和始体的比较原体和始体的比较性状性状原体原体始体始体大小（大小（m）0.20.20.4 0.4 0.50.51.0 1.0 细胞壁细胞壁-代谢活性代谢活性-胞外稳定性胞外稳定性强强弱弱感染性感染性强强无无繁殖能力繁殖能力无无强强RNA：DNA比比 1:11:13:13:1总目录上页下页退出返回u培养特性培养特性 鸡胚接种鸡胚接种v在68日龄鸡胚卵黄囊中繁殖，于感染后36d致鸡胚死亡，并可在鸡胚卵黄囊膜中找到包涵体（inclusion）、原体和始体颗粒。组织细胞培养组织细胞培

7、养v可在HeLa、McCoy或HL等细胞中生长良好。v可将接种有标本的细胞培养管离心沉淀以促使衣原体穿入细胞，在细胞培养管中加入代谢抑制物其目的在于使细胞生长代谢缓慢，有利于衣原体的寄生性生长或提高衣原体吸附细胞的能力，使它易穿入细胞进行繁殖。总目录上页下页退出返回u抗原结构抗原结构 属特异性抗原：属特异性抗原：v位于胞壁的共同抗原为脂多糖，类似于革兰阴性菌的脂蛋白-脂多糖复合物，可用补体结合试验检测 种特异性抗原：种特异性抗原：v大多数衣原体的种特异性抗原位于主要外膜蛋白（major outer membrane protein,MOMP）上，可用补体结合试验和中和试验检测，可鉴别不同种衣原

8、体 型特异性抗原：型特异性抗原：v根据MOMP可变区氨基酸序列的不同，可将每种衣原体分为不同的血清型或生物型（biovar）总目录上页下页退出返回u抵抗力抵抗力 衣原体耐冷不耐热，衣原体耐冷不耐热，60仅能存活仅能存活510min；在在-60感染性可保持感染性可保持5年，液氮内可保存年，液氮内可保存10年以上，冷冻年以上，冷冻干燥保存干燥保存30年以上仍可复苏。年以上仍可复苏。对常用消毒剂敏感，紫外线照射可迅速灭活。对常用消毒剂敏感，紫外线照射可迅速灭活。四环素、氯霉素、强力霉素和红霉素等抗生素有抑制衣原体四环素、氯霉素、强力霉素和红霉素等抗生素有抑制衣原体繁殖的作用。繁殖的作用。总目录上页下

9、页退出返回致病性与免疫性致病性与免疫性u致病性致病性 衣原体能产生类似于革兰阴性菌内毒素的毒性物质，能够抑衣原体能产生类似于革兰阴性菌内毒素的毒性物质，能够抑制宿主细胞代谢，直接破坏宿主细胞。制宿主细胞代谢，直接破坏宿主细胞。衣原体的衣原体的MOMP能阻止吞噬体与溶酶体的融合，能阻止吞噬体与溶酶体的融合，MOMP的的表位容易发生变异，在体内可以逃避特异性抗体的中和作用表位容易发生变异，在体内可以逃避特异性抗体的中和作用而继续感染细胞而继续感染细胞 热休克蛋白（热休克蛋白（heat shock protein,HSP）能刺激机体巨噬）能刺激机体巨噬细胞产生细胞产生TNF-、IL-1、Il-6等炎

10、症性细胞因子等炎症性细胞因子 u免疫性免疫性 产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主产生特异性细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主总目录上页下页退出返回第二节、沙眼衣原体第二节、沙眼衣原体u衣原体发现衣原体发现 的的1956年汤飞凡等首次分离培养出沙眼衣原体，无可争辩年汤飞凡等首次分离培养出沙眼衣原体，无可争辩地结束了半个多世纪关于沙眼病原的争论。他是世界上发现地结束了半个多世纪关于沙眼病原的争论。他是世界上发现重要病原体的第一个中国人重要病原体的第一个中国人u生物分型生物分型 沙眼生物型（沙眼生物型（Biovar trachoma）性病淋巴肉芽肿生物型（性病淋巴肉芽肿生物型（biovar

11、 lymphogramuloma venereum,LGV）总目录上页下页退出返回一、生物学性状一、生物学性状u形态染色形态染色 原体为圆形或椭圆形，原体为圆形或椭圆形，Giemsa染色呈紫红色。染色呈紫红色。网状体核质分散，网状体核质分散，Giemsa染色为深蓝或暗紫色。染色为深蓝或暗紫色。原体能合成糖原，故被碘溶液染成棕褐色。原体能合成糖原，故被碘溶液染成棕褐色。碘染色碘染色总目录上页下页退出返回沙眼衣原体原体（沙眼衣原体原体（Giemsa染色）染色）总目录上页下页退出返回沙眼衣原体始体（沙眼衣原体始体（Giemsa染色）染色）总目录上页下页退出返回沙眼衣原体包涵体沙眼衣原体包涵体总目录上

12、页下页退出返回u血清学分型血清学分型 根据根据MOMP表位氨基酸序列的差异，将沙眼衣原体分为表位氨基酸序列的差异，将沙眼衣原体分为19个血清型，其中沙眼生物型包括个血清型，其中沙眼生物型包括15个血清型；个血清型；LGV生物型生物型包括包括L1、L2、L2a和和L3 共共4个血清型。个血清型。总目录上页下页退出返回二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性u所致疾病所致疾病 沙眼沙眼v通过眼-手-眼途径直接或间接密切接触传播。v由A、B、Ba和C血清型引起。v早期流泪、后期结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜损害，影响视力或致盲总目录上页下页退出返回 包涵体结膜炎包涵体结膜炎v婴儿结膜炎

13、，引起急性化脓性结膜炎（包涵体脓漏眼），不侵犯角膜，能自愈；v成人结膜炎两种，后者可经两性接触、经手至眼或污染的游泳池水感染，引起滤泡性结膜炎，又称游泳池结膜炎，一般经数周或数月痊愈，无后遗症。总目录上页下页退出返回新生儿眼结膜炎新生儿眼结膜炎总目录上页下页退出返回包涵体性结膜炎包涵体性结膜炎总目录上页下页退出返回 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染 v沙眼生物型DK血清型引起v男性多表现为非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎，并可合并附睾炎、前列腺炎、直肠炎等v女性表现为尿道炎、宫颈炎、输卵管炎与盆腔炎等。婴幼儿肺炎婴幼儿肺炎 性病淋巴肉芽肿性病淋巴肉芽肿 v侵犯男性腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性

14、淋巴肉芽肿，常形成瘘管；亦可侵犯女性会阴、肛门、直肠，引起会阴-肛门-直肠组织狭窄。总目录上页下页退出返回衣原体性宫颈炎衣原体性宫颈炎总目录上页下页退出返回性病淋巴肉芽肿性病淋巴肉芽肿总目录上页下页退出返回沙眼衣原体检验程序沙眼衣原体检验程序 总目录上页下页退出返回三、微生物学检查三、微生物学检查u直接涂片镜检直接涂片镜检 取结膜刮片，取结膜刮片，Giemsa或碘液及荧光抗体染色镜检，观察上或碘液及荧光抗体染色镜检，观察上皮细胞浆内有无包涵体。皮细胞浆内有无包涵体。总目录上页下页退出返回沙眼衣原体感染宫颈刮取物直接涂片沙眼衣原体感染宫颈刮取物直接涂片 总目录上页下页退出返回u分离培养分离培养

15、取感染组织的渗出液或刮取物，接种于鸡胚卵黄囊或传代细取感染组织的渗出液或刮取物，接种于鸡胚卵黄囊或传代细胞，再用胞，再用IFA或或ELISA检测培养物中的衣原体。检测培养物中的衣原体。u衣原体抗原与核酸组分检测衣原体抗原与核酸组分检测 ELISAv检测沙眼衣原体LPS和MOMP抗原 PCR和链接酶链反应（和链接酶链反应（LCR）等扩增技术检测沙眼衣原体）等扩增技术检测沙眼衣原体DNA总目录上页下页退出返回McCoy细胞培养的沙眼衣原体细胞培养的沙眼衣原体 总目录上页下页退出返回四、防治原则四、防治原则 预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接触传染。预防重点是注意个人卫生，避免直接或间接的接

16、触传染。治疗药物选用强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等治疗药物选用强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、加替沙星等 目前尚无有效的沙眼衣原体疫苗，目前尚无有效的沙眼衣原体疫苗，MOMP是其主要候选抗是其主要候选抗原。由于原。由于MOMP的多型性，其疫苗不易对所有型别的沙眼的多型性，其疫苗不易对所有型别的沙眼衣原体都产生保护性，故增加了衣原体都产生保护性，故增加了MOMP作为疫苗的难度。作为疫苗的难度。总目录上页下页退出返回第三节、肺炎嗜衣原体第三节、肺炎嗜衣原体 肺炎嗜衣原体是衣原体属的一个新种。肺炎嗜衣原体是衣原体属的一个新种。命名命名v最初分离的两株病原体：1965年自一名台湾小学生眼结膜中

17、分离得到的一株TW-183(Taiwan-183)v1983年自美国西雅图一位急性呼吸道感染病人的咽部分离出另一株AR-39(acute respiratory-39)，v后发现这两株衣原体为同一菌株，仍命名为TWAR总目录上页下页退出返回一、生物学性状一、生物学性状u形态染色形态染色 原体直径为原体直径为0.38m，电镜下呈典型的梨形，并有清晰的周，电镜下呈典型的梨形，并有清晰的周浆间隙，浆间隙，Giemsa染色呈紫红色，该法对细胞内包涵体的定染色呈紫红色，该法对细胞内包涵体的定位比碘染法敏感。位比碘染法敏感。u细胞培养细胞培养 McCoy和和HeLa细胞，但都很难用于连续传代。细胞，但都很

18、难用于连续传代。目前常用目前常用HEp-2和和HL细胞系，其在培养肺炎嗜衣原体的敏细胞系，其在培养肺炎嗜衣原体的敏感性方面要高于前两者。感性方面要高于前两者。总目录上页下页退出返回二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性u所致疾病所致疾病 易引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等。起病缓慢，临床易引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等。起病缓慢，临床症状与肺炎支原体相似，表现为咽痛、咳嗽、咳痰、发热等，症状与肺炎支原体相似，表现为咽痛、咳嗽、咳痰、发热等，一般症状较轻。一般症状较轻。肺炎嗜衣原体与冠心病、动脉粥样硬化等慢性病的发生密切肺炎嗜衣原体与冠心病、动脉粥样硬化等慢性病的发生密切相关，但其具体机制尚

19、待深入研究。相关，但其具体机制尚待深入研究。总目录上页下页退出返回三、微生物学检查三、微生物学检查u病原学检查病原学检查 先直接涂片，观察包涵体；先直接涂片，观察包涵体；以荧光或酶标记的种特异性单克隆抗体直接检测标本中肺炎以荧光或酶标记的种特异性单克隆抗体直接检测标本中肺炎嗜衣原体抗原。嗜衣原体抗原。u血清学方法血清学方法 微量免疫荧光试验（微量免疫荧光试验（microimmunofluorescence test，MIF），被称为），被称为“金标准金标准”。凡双份血清抗体滴度增高凡双份血清抗体滴度增高4倍或以上，或单份血清倍或以上，或单份血清IgM抗体抗体滴度滴度1:16，或，或IgG抗体滴

20、度抗体滴度1:512，可确定为急性感染，可确定为急性感染，IgG1:16表示为既往感染。表示为既往感染。总目录上页下页退出返回第四节、鹦鹉热嗜衣原体第四节、鹦鹉热嗜衣原体u生物学性状生物学性状 原体呈球形或卵圆形。网状体呈球形或不规则形态。原体呈球形或卵圆形。网状体呈球形或不规则形态。原体在细胞空泡中增殖，形成结构疏松、不含糖原、碘染色原体在细胞空泡中增殖，形成结构疏松、不含糖原、碘染色呈阴性的包涵体。呈阴性的包涵体。至少可以分为至少可以分为6个血清型个血清型 u致病性致病性 呼吸道、经破损皮肤、黏膜或眼结膜感染呼吸道、经破损皮肤、黏膜或眼结膜感染 临床表现多为非典型性肺炎临床表现多为非典型性

21、肺炎 总目录上页下页退出返回u微生物检查微生物检查 取患者血、痰标本或咽拭子直接涂片染色观察包涵体。取患者血、痰标本或咽拭子直接涂片染色观察包涵体。IFA或或ELISAv检测特异IgM抗体作为早期、特异诊断 PCRv也可根据16S rRNA或MOMP基因设计特异引物，采用做快速诊断。总目录上页下页退出返回思考题思考题1、衣原体与细菌和病毒有何异同点？、衣原体与细菌和病毒有何异同点？2、简述致病性衣原体的种类及致病性？、简述致病性衣原体的种类及致病性？3、试比较原体和始体的性状？、试比较原体和始体的性状？4、名词解释：衣原体（、名词解释：衣原体（chlamydia）、原体）、原体（elementary body，EB）、网状体（）、网状体（reticulate body，RB）