研究生分子医学技能实验五课件.ppt

1、http:/ 理理聚丙烯酰胺凝胶是由单体聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺丙烯酰胺(acrylamide(acrylamide，简称，简称AcrAcr)和交联剂和交联剂N,N-N,N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺(N(N，N Nmethylene-methylene-bisacylamidebisacylamide，简称，简称BisBis)在加速剂在加速剂N N，N N，N N，N N 四甲基乙二四甲基乙二胺胺(N(N，N N，N N，N N tetramethyl ethylenediatetramethyl ethylenedia mine mine，简称，简称TEMEDTEMED)和催化剂和

2、催化剂过硫酸铵过硫酸铵(ammonium persulfate(ammonium persulfate(NH(NH4 4)2 2S S2 2O O8 8，简称简称AP)AP)或或核黄素核黄素(ribofavin(ribofavin即即vita min Bvita min B2 2，C C1717H H2020O O6 6N N4 4)的作的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide(polyacrylamide gel gel electrophor

3、esiselectrophoresis，简称，简称PAGE)PAGE)。http:/ 分子量范围 适用的凝胶浓度/(%)蛋 白 质 104 20-30 1-4104 15-20 1-5104-1105 10-15 1105 5-10 5105 2-5 核酸(RNA)104 1520 104105 5-10 105-2106 2-2.6http:/ 聚丙烯酰胺凝胶电泳分为连续系统与不连续系统两大类。目前常用的多为圆盘电泳(如图1)和板状电泳(如图2)，两者电泳原理完全相同。http:/ 不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tr

4、is-HC1。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。http:/ 前导离子或快离子：HC1解离出的氯根(C1-)尾随离子(trailing ion)或慢离子：甘氨酸根 mclclmppmGG(Cl代表氯根，P代表蛋白质，G代表甘氨酸根)有效迁移率=m，m为迁移率，为解离度)v当进入pH8.9的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白质；(3)电位梯度的不连续性：分子筛效应电荷效应http:/ http:/