微生物标本采集与常见的问题-课件.ppt

1、标本采集及标本采集及检验科微生物室检验科微生物室标本采集原则标本采集原则 正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物科的工作质量至关重要，整个过程中涉及的工作人员必须清楚了解标本质量在检测中的重要性，必须保证检验前质量才能确保检验结果的准确性和可靠性，为临床提供准确，有用的信息。在许多有正常细菌出现的感染部位（主要来自皮肤、黏膜、呼吸道和消化道），由于正常菌过度生长掩盖了真正的病原菌，因此采样时应避免寄生菌的污染，确保每份标本的真实性。血培养采集指征血培养采集指征患者出现发热（38）或低温（36），寒战，白细胞增多（计数 10.0X109个/L，特别有核左移时），皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭

2、，血压降低，反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少等。具备上述一种或几种体征时，若临床怀疑菌血症应采集血液标本进行培养。影响阳性标本检出的因素影响阳性标本检出的因素 采血量-阳性检出关键 成人:8-10 ml/培养瓶 儿童:3 5 ml/培养瓶 婴儿:1 2 ml/培养瓶 因为儿童血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人且只需需氧瓶。每增加1ml灵敏度提高3%-5%，尽量避免采血量不足血培养标本的采集时机血培养标本的采集时机理 论:寒战高热前1小时一般原则:发热初期或高峰时或抗生素应用前。若已使用抗生素而不能中止者，可在下次用药前或血液药物浓度最低峰时采集标本。血培养

3、标本采集血培养标本采集 急性脓毒血症：10min内从不同部位采23套(每套包括一只需氧瓶和一只厌氧瓶)急性心内膜炎：12h内从不同部位采3套 亚急性心内膜炎：从不同部位采3套，间隔15min，如24h内为阴性，需再采集 原因不明发热，从不同部位采23套，间隔1h，如24h内为阴性，需再采集 血培养与临床不符血培养与临床不符?菌血症患者多数为间歇性发作，病原菌周期性出现于血液中（随之为无病原菌时期，不管临床症状的严重程度如何，患者血液中病原菌浓度还是处于相当低的水平），因此要求临床多次采集标本。增加采集次数的主要原因增加采集次数的主要原因 -提高菌血症的检出率提高菌血症的检出率 -弥补采血量的不

4、足弥补采血量的不足 -帮助判断是致病菌还是污染菌帮助判断是致病菌还是污染菌采血次数与阳性率的关系采血次数与阳性率的关系常见病原菌的平均阳性检出时间常见病原菌的平均阳性检出时间 血培养出现的葡萄球菌血培养出现的葡萄球菌h后报阳时应与后报阳时应与临床联系，因为的葡萄球菌多数为皮肤正临床联系，因为的葡萄球菌多数为皮肤正常菌群，当常菌群，当h后报阳疑似为污染后报阳疑似为污染 血培养原理 欧加侬全自动血培养仪所配套的培养瓶（紫色为厌氧、蓝色为需氧）。当瓶内有微生物生长时可代谢释放CO2进入感应器，与水结合，电离出H+改变PH值，改变瓶底颜色。当指数超过阳性阈值时，系统在电脑控制下报警。标本储存：2h常温

5、，禁止冷藏报告时间：阴性：5d 阳性：随时报告危急值（标本革兰染色初步 确定）病原菌鉴定，药敏最终报告发出。骨髓培养鉴定采血量：血培养瓶1ml/培养瓶报告时间：阴性：5d 阳性：随时报告危急值（标本革兰染色初步确定）病原体鉴定，药敏最终报告发出。脓肿伤口、褥疮标本采集 采集前用无菌盐水或70酒精彻底清创，以去除表面细菌 用无菌针筒穿刺法抽吸深部脓肿，或从伤口深处（与正常组织接近）采集渗出物的拭子标本标采集量：无菌容器或厌氧平板1ml标本储存：1h常温 标采集量：血培养瓶或无菌管1ml标本储存：1h常温，禁止冷藏无无菌菌？无无菌菌？脑脊液培养鉴定 脑脊液培养鉴定 报告时间：阴性：3d 阳性：病原

6、菌鉴定，药敏最终 报告发出。尿标本采集 患者出现泌尿系感染，尿常规白细胞、红细胞阳性时更有意义。在未使用抗生素之前采集。最好留取早晨清洁中段尿，采集前先用中性肥皂和水清洁外阴及尿道口周围。留取时将前段尿排去，截留中段尿510ml，采用10ul定量计数接种平板。痰标本的正确采集指导患者咳痰 痰液标本的采集以清晨为好，因此时痰量多，含菌量大。在医生或护士指导下取样。嘱病人漱口三遍以除去浅表固有定植菌。指导病人深咳以取得下呼吸道标本（而不是唾液及鼻咽部的分泌物）置于一无菌容器。注意：咳痰不能做厌氧培养！痰标本是否合格的检测标准 痰标本革兰染色后用低倍镜观察白细胞和上皮细胞数量的多少初步判断:白细胞1

7、0个LP，上皮细胞25个LP视标本不合格。白细胞10个LP，上皮细胞 25个LP视标本合格。直接涂片更直观的判断标本是否合格并初步确定是否有病原菌的存在是感染还是定植？痰涂片 对于痰培养分离到的细菌是否为可能的感染菌，最简单和直接的证据就是痰涂片，首先感染菌会导致白细胞大量增加，其次由于感染早期（细菌/真菌）启动非特异性免疫因子中中性粒细胞是最主要的免疫细胞，吞噬和包裹现象是反映细菌与机休免疫系统的相关性的最重要的信号，观察这一现象有助于区别是感染还是定植。大量革兰阴性杆菌生长大量革兰阴性杆菌生长是否有意义？鉴定药敏？是否有意义？鉴定药敏？痰：肺炎链球菌痰：肺炎链球菌 人类肠道内微生物平衡由肠

8、道中栖居不同种类的微生物组成，当生态失去平衡而引发临床症状常表现为腹泻，引起腹泻的病原菌种类较多，亦与患者自身免疫力及使用抗生素有关。粪便标本应在抗生素使用前采样，挑取新鲜黏液、脓血便或直肠拭子标本1h内送检。粪便标本采集观察菌群涂片时首要计数细菌总数，这是肠道菌群是否处于平衡，菌群失调最直观的重要指标 正常粪便中数量最多，占比例最大的是革兰阳性杆菌如双歧杆菌，乳杆菌，优杆菌；其次革兰阴性杆菌；革兰阳性球菌仅占5左右。成人正常粪便中革兰阳性杆菌与革兰阴性杆菌3：1。然而粪便中细菌比例也会随年龄有所变化。病例一 某患儿，7岁，咳嗽、咳黄脓痰近1周，使用氨苄西林针无效 痰涂片：WBC伴大量G小杆菌

9、 培养：生长流感嗜血杆菌，药敏提示头孢曲松敏感，治疗3天明显好转；后复检痰培养，涂片示标本来自上呼吸道，生长大量鲍曼不动杆菌，此为典型的治疗后上呼吸道菌群失调，停用抗生素，患儿康复良好。分析：鲍曼不动杆菌为定植菌，病原菌是流感嗜血杆菌。病例一 男，39岁，诊断：不明原因发热 标本：血 “若仅从一份血培养中分离出凝固酶阴性葡萄球菌，尤其48h报阳时不必常规做药敏试验，因为这种菌经常认为是血培养中的皮肤污染，假如临床需要做药敏，应在24小时内联系实验室。”不做抗生素药敏试验 病例三女，64岁，诊断：泌尿系感染 标本：尿培养结果：6万CFU/ml大肠杆菌 2万CFU/ml类白喉棒状杆菌 1.2万CFU/ml凝固酶阴性葡萄球菌不做抗生素药敏试验NoImage谢 谢！共学习 多沟通 同进步