14-感染性疾病的血清学诊断方法.ppt

1、,感染性疾病的 血清学诊断,北京医院检验科免疫室 刘倩 liuqianbjh 2015.9,什么是血清学诊断？,感染性疾病： 病原体，及其代谢产物-antigen 免疫系统产生的特异性和非特异性的抗体-antibody 血清学诊断： 也称免疫学诊断，在临床中指依据抗原抗体特异性结合的原理进行检测的一类诊断方法。,目的,掌握：TORCH检测的内容和临床意义 熟悉：细菌性感染的常用血清学检测 了解：寄生虫病的免疫学检测,感染性疾病的血清学诊断方法,病毒性感染的血清学检测TORCH试验,1,细菌性感染的血清学检测,2,寄生虫病的血清学检测,3,一、病毒性感染的血清学检测,TORCH（1971，Nah

2、mias) T：Toxoplasma（TOXO，弓形虫） O：others(syphilis, HIV, varicella, parvovirus B19) R：Rubella virus（RV，风疹病毒） C：Cytomegalovirus（CMV，巨细胞病毒） H：Herpes simplex virus、（HSV，单纯疱疹病毒型和型） 指数种导致孕妇患病、胎儿宫内感染致畸的病原体首字母的缩略词。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Susceptibility 正常人群：普遍易感，隐性感染，但危害极小 孕妇：T淋巴细胞系统的免疫反应减弱，对感染的抵抗力下降，更易致病原体感染。

3、既往感染易复发感染。 孕妇感染一般以隐性感染为主 主要危害：胎儿及新生儿 胎儿感染：导致流产、早产、死胎或胎儿生长迟缓和发育畸形 新生儿感染：累及神经系统，造成智力障碍以及各种瘫痪、失聪、失明等严重后遗症。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Clinical Application 欧美等发达国家：七十年代起，列为孕期筛查项目 我国：近年来，成为孕期常规筛查项目（孕16周，“优生四/五项”）,.TORCH试验,Toxoplasmosis,一、病毒性感染的血清学检测,Toxoplasma(弓形虫) 原虫：属于球虫寄生虫。 终宿主：猫，猫科动物,.TORCH试验,trophozoite

4、,Life cycle and modes of transmission of T.gondii.,一、病毒性感染的血清学检测,Toxoplasma(弓形虫) 传染源：各种哺乳类动物，其中以猫的重要性最大，其次为猪、羊、狗、鼠等。 传播途径：吞食未煮熟的肉类，使用受卵囊污染的水，过分接触猫、狗等“宠物”等，最近报道也可通过输血感染。 易感人群：普遍易感,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Toxoplasma(弓形虫) Pathogenicity ： 母亲感染：多数无症状，但会传给胎儿（3046%） 胎儿感染：先天性弓形虫病 母体感染越晚，胎儿感染率越高，损伤越小 胎儿的受感染率与

5、母体初次感染时的孕期有关。在妊娠早、中、晚期胎儿受感染率分别为17%、25%和65%。胎儿损伤程度与胎龄有很大关系，即感染发生越早，胎儿受损越严重。 神经系统损害: 脑畸形、颅缝裂开，脑积水，智力障碍 眼部不良表现 :脉络膜视网膜炎 流产、早产和异常产,.TORCH试验,先天性弓形虫病,成人弓形虫脑病,一、病毒性感染的血清学检测,Toxoplasma检测 由于90的孕妇感染后无特异性征状，所以诊断弓形虫病必须靠实验室诊断。 Type： antigen:血，骨髓，脑脊液，尿等，瑞-姬染色。 antibody:检测的主要方法。血清,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,IgM antibo

6、dy：出现早（病期78天），大多数能持续46个月，偶有一年以上。也有少数在感染后3周即出现IgM阴性。 IgG antibody：感染后25个月达到高峰。 Clinical significance： IgM +：急性原发感染，筛查用； IgG +： 既往感染；现症感染（滴度上升4倍以上）,.TORCH试验,IgG阳性者胎儿畸形发生率为1.9% IgM 阳性者胎儿畸形发生率为10.34%,免疫,弓形虫感染者虽有特异抗体产生，但主要靠细胞免疫 抗体对胎儿并无保护作用 因此，只要确诊孕期宫内弓形虫感染者（IgM+），均应考虑作治疗性流产。,Rubella,一、病毒性感染的血清学检测,Rubella

7、 virus（风疹病毒） 披膜病毒科风疹病毒属，为RNA病毒，经呼吸道传播。 人群中感染率约为95%，感染后可终生免疫 感染后症状比较轻，1-3d消退。 皮疹：面部开始，向四肢蔓延 发热及耳后淋巴结肿大 19631964年美国：风疹大流行， 10000例孕妇流产， 20000例先天畸形患儿。 从而引起全球重视。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Rubella virus（风疹病毒） 胎儿感染：流产；死产；先天风疹综合征（congenital rubella syndrome，CRS）：白内障、耳聋、动脉导管未闭、智力障碍 感染时胎龄越大，发生畸形机会越小。 孕早期感染，致畸率可达

8、80%。孕6个月后感染几乎无风险。 据统计，妊娠期间：1个月内感染，婴儿先天性畸形的发生率为1158%，2个月内为1136%，3个月内为715%，4个月内为7%以下，5个月内仍旧有先天性耳聋胎儿出生，妊娠6个月以外感染风疹病毒基本没有胎儿畸形的危险。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Rubella virus（风疹病毒）检测 Type： antigen: virus（繁，贵，慢），羊水穿刺，PCR antibody: 检测的主要方法。血清。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,IgM antibody：出现早（病期2w），3w达到高峰，持续67周。 IgG antibo

9、dy：感染后3周出现，12个月达到高峰，持续终生 Clinical significance： IgM +：现症感染。早期，考虑终止妊娠。晚期，密切监测。 IgG +：既往感染； IgM - and IgG - :孕前，保护性疫苗注射（可能再次感染）,.TORCH试验,孕妇在孕周内初次感染RV者，胎儿先天性风疹发病率达。 再次感染致畸性很低。,一、病毒性感染的血清学检测,Rubella virus（风疹病毒）检测 Question:孕16周，出现RV IgM-，IgG+。如何解读？ IgM出现8周即消失，则不能肯定孕早期是否有过急性感染，只能肯定无现症感染。 -IgM negative，IgG

10、 positive.不能排除此前8周时的RV感染。 最好孕前检测。孕前抗RV IgG的检测阳性说明已获得免疫力，但IgG至少要15IU/ml才具保护作用。,.TORCH试验,Cytomegalovirus,一、病毒性感染的血清学检测,Cytomegalovirus（CMV,巨细胞病毒） 疱疹类病毒，DNA病毒。 母亲感染： 非常普遍。6990%成人已有CMV抗体。 少数有临床症状：发热，淋巴结肿大，淋巴细胞增多。 多数人感染后，成为长期带毒的潜伏感染。 胎儿感染：母亲原发或复发感染引起,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Cytomegalovirus（CMV,巨细胞病毒） 神经系统

11、损害及智力障碍。 Pathogenicity ：全身感染综合症。 神经系统损害：小脑畸形、脉络膜视网膜炎、神经萎缩，耳聋和智力发育低下 黄疸、肝脾肿大、血小板减少性紫癜、溶血性贫血 已知病毒中，CMV最容易引起胎儿、新生儿和婴儿的急性感染和迟发性后遗症。,.TORCH试验,孕妇原发感染更危险（特点） 胎龄越小越危险。,一、病毒性感染的血清学检测,Cytomegalovirus（CMV,巨细胞病毒） like Toxo & Rubella, CMV Symptom severity increase with earlier infection in pregnancy BUT, unlike

12、Toxo & Rubella, CMV Congenital infection if primary maternal infection and possible with recurrent infection,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Cytomegalovirus（巨细胞病毒）检测 Type： pathogen: 细胞内嗜酸性包涵体，检测率较低。 Virus DNA, 血细胞中，PCR。 antigen:早期结构蛋白抗原（常用pp65），白细胞，免疫组化。 antibody: serum IgM /IgG/ IgA antibody，ELISA,.TORCH试验,

13、一、病毒性感染的血清学检测,Cytomegalovirus（巨细胞病毒）检测 Clinical significance： IgM +：现症感染。原发感染后IgM会持续存在4-8m，10%的复发性CMV患者IgM阳性可持续18m。 IgG +：既往感染；现症感染（滴度上升4倍以上） -无法根据IgM+ 准确判断是“原发/继发”感染，以及感染发生在哪个孕期。,.TORCH试验,Herpes Simplex Virus,一、病毒性感染的血清学检测,Herpes Simplex Virus （HSV,单纯疱疹病毒） 疱疹类病毒，DNA病毒。有两个血清型HSV-I和HSV-II，两者核苷酸序列有50%

14、同源性。 母亲感染： 非常普遍，感染率约为8090%， 初次感染者绝大多数不显症状，最常见的临床症状是黏膜或皮肤的局部疱疹，偶尔也可产生严重甚至可死亡的全身性感染。 经过粘膜和破损的皮肤感染。原发感染后，病毒隐藏于体内，可随时激活并排出病毒 HSV-I感染Face and skin above the waist HSV-II感染Genitalia and skin below the waist,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Herpes Simplex Virus （HSV,单纯疱疹病毒） 胎儿感染： 阴道分娩垂直传播为主要传播途径。 以HSV-II为主，约占75%。 经胎

15、盘传播机会较少，一旦发生后果严重。 母亲原发感染：33-50% infection risk 母亲复发感染：0-5% risk Pathogenicity: 先天性畸形 全身性疾病：肝、肺受累 中枢神经系统疾病 危害性低于RV和CMV,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,Herpes Simplex Virus 检测 Antibody检测 IgM: 12w出现，最高效价出现于第3w;6m消失。 IgG: 持续较长时间。 -IgM+: 可以诊断近期感染。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,临床上TORCH试验的做法： 内容：To / RV / CMV / HSV-/ IgM

16、 方法：ELISA-间接法测抗体,.TORCH试验方法,一、病毒性感染的血清学检测,TORCH的结果判读 （1）注意抗体在体内存在的时间； （2）判断胎儿感染需要确凿证据：羊膜腔行羊水穿刺，或取脐带血测定IgM等 （3）在孕前进行更合适 （4）免疫缺陷者：TORCH感染时抗体测不出来,.TORCH试验方法,一、病毒性感染的血清学检测,对妊娠期间出现TORCH特异性IgM抗体阳性时处理建议： 1、更换实验方法重新复查； 2、检查有无干扰因素存在：RF等； 3、寻找临床支持证据； 4、对抗体水平进行动态观察，监视病情发展趋势。,.TORCH试验,一、病毒性感染的血清学检测,即使母亲被确认为TORC

17、H感染，也并不意味发生宫内感染。 即使发生了宫内感染，也不意味着胎儿发生了畸形。 慎重作出临床处理的决定。,.TORCH试验,感染性疾病的血清学诊断方法,2.细菌性感染的血清学检测,1,2,二、细菌性疾病的血清学检测,Widal Test（肥达实验） 也称伤寒、副伤寒凝集试验，用于检测Tophoid and Paratyphoid（伤寒和副伤寒） Procedure： 伤寒沙门菌 O抗原/H抗原 甲/乙/丙副伤寒沙门菌 H抗原,.,+,患者血清,二、细菌性疾病的血清学检测,Widal Test 结果判读 O+H-：感染早期，交叉反应 O-H+：非特异性回忆反应 O+H+：现症感染,.,二、细菌

18、性疾病的血清学检测,Weil-Felix Test（外斐实验） 也称变形杆菌凝集试验，用于诊断立克次体感染，如斑疹伤寒，恙虫病等 原理：变性杆菌OX19,OX2,OXk与立克次体有交叉抗原 方法： 患者血清+变性杆菌OX19/OX2/OXk-凝集（1:160） OX19+:流行性斑疹伤寒 OXk+:恙虫病 OX19+及OX2+:洛杉矶斑点热,.,二、细菌性疾病的血清学检测,Mycobacteria tuberculosis Test(TB test) PPD试验：应用结合菌素纯蛋白衍生物，进行的批内变态反应试验（+：5mm），灵敏度低 血清antibody：金标法，检出率低 痰涂片抗酸染色及痰PCR仍是临床首选方法,.,感染性疾病的血清学诊断方法,3.寄生虫病的血清学检测,1,2,三、寄生虫病的血清学检测,.,