16-自身免疫病的免疫学检验-11-20.ppt

1、,自身免疫病的免疫性检查 Immunodiagnostic Tests of Autoimmune Disease 艾效曼 13621353968 almaai,自身免疫和自身免疫病 autoimmunity and autoimmune disease 自身免疫: 机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答, 产生自身 抗体和(或)自身致敏淋巴细胞的现象 自身免疫病:由于过度而持久的自身免疫反应 导致组织器官损 伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病. 自身抗体: 由各种原因造成B细胞产生针对自身组织成分的抗体, 可以是生理性的,也可以是病理性的. 病理性自身抗体:当人体血液或体液中的自身抗体的滴

2、度超出一定阈值并有相应的自身组织器官损伤或功能障碍时,即为病理性的自身抗体,具有临床意义., 按疾病累及的系统区分: 结缔组织疾病 神经肌肉疾病 消化系统疾病 泌尿系统疾病 生殖系统疾病 皮肤组织疾病 循环系统疾病 内分泌性疾病 血液系统疾病 按器官特异性分为两类: 系统性自身免疫病 (systemic autoimmune disease) 或器官非特异性或全身性自身免疫病 器官特异性自身免疫病 (organ-specific autoimmune disease) 或局限性自身免疫病,自身免疫病的分类,自身免疫病的“病谱” 器官特异性 非器官特异性 桥本甲状腺炎 扩张性心肌炎 自身免疫性溶

3、血性贫血 系统性红斑狼疮 原发性粘液水肿 恶性贫血 特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征 甲状腺机能亢进 自身免疫性胃炎 特发性粒细胞减少症 类风湿关节炎 Addisino病 自身免疫性肝炎 绝经过早（少数病例） 硬皮病 1型糖尿病 原发性胆汁性肝硬化 男性不育（少数病例） 多发性肌炎/皮肌炎 重症肌无力 原发性硬化性胆管炎 交感性眼炎 混合性结缔组织病 多发性硬化症 溃疡性结肠炎 晶状体源性葡萄膜炎 系统性血管炎 脱髓鞘疾病 克罗恩病 抗磷脂综合征 寻常型天疱疮 自身免疫性肾小球肾炎 药物性狼疮 类天疱疮 肺肾出血综合征,SLE,Sjogren,RA,自身免疫病标志性抗体 Marker Aut

4、oantibodies of Autoimmune Disease,1 自身抗体临床应用; 1)协助自身免疫性疾病诊断. 2) 协助判断病情、疗效和预后。 3）协助进行不同疾病的鉴别诊断 4）用于各类疾病的免疫病理和机 制研究及流行病学的调研。,自身抗体是诊断自身免疫病五种主要依据(遗传倾向、 性别和年龄、免疫抑制剂疗效和多器官发病）之一,与自身免疫性疾病关系密切的自身抗体 自身免疫病标志性抗体,Marker antibodies of autoimmune diseases,对流免疫电泳法(Counter immunoelectrophoresis CIE) 免疫扩散法(immunodiff

5、usion assay ID) 间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assayIIF) 酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA) 免疫印迹法(Immunoblot assay IB),自身抗体检测方法,抗核抗体: Antinuclear antibody ANA 是细胞核抗原成分自身抗体的总称,是一组针对细胞核内DNA、RNA、蛋白质、脂类、酶类或这些物质的分子复合物的自身抗体。 ANA不仅指对核内成分的抗体，而是指凡是对核内成分相同的物质所产生的抗体均为ANA，这些具有抗原性的物质并非仅存在于核质内，

6、也存在于胞浆和其他细胞器中。,抗核抗体的检测 (Examination of antinuclear antibodies),细胞结构模式图,抗核抗体检测方法 IIF 法：Hep-2细胞底物（90%以上实验室采用） # 完整的ANAs抗原谱（细胞核、 浆、骨架、周期） # 可预测分析ANA靶抗原范围 # 经验性强 ELISA法：采用高度纯化抗原或全细胞抗原 # 抗原谱有限（十余种） # 假阴性结果 # 操作简单快速 其他方法：金标法、比浊法,抗核抗体检测方法 检测细胞内抗原自身抗体“金标准”IIF ANA检测方法进展：仅限于IIF改良法（底物 选择、制备方法）试图将ELISA发推广为最基本的筛

7、选方法未获成功 复制细胞抗原全部成分极其困难 抗原存在的相对浓度、自然抗原决定簇的二级结构及高级结构 荧光染色模型可初步判断相应抗体性质范围或确定抗体特异性,ANA检测抗原底物Hep-2细胞 人来源培养细胞(人喉癌细胞)，据有核大、细胞结构 清晰特点 便于结构观察及荧光染色核型分析 据有核抗原丰富、特异性强、含量高优点 较鼠肝（肾）组织冰冻切片检测ANA，阳性率可提高10-20% 主要包括：抗SSA/Ro抗体、抗着丝点抗体、抗 PCNA抗体、抗 rRNP抗体、 细胞浆抗体、细胞骨架抗体、细胞分裂周期抗体,间接免疫荧光法,用已知抗原细胞或组织标本的切片，加上待检血清，如果其中含有切片中某种抗原的

8、抗体，抗体便沉淀结合在抗原上. 再用间接荧光抗体（抗种属特异性IgG荧光抗体）与结合在抗原上的抗体反应（如检测人血清中的抗体必需用抗人IgG荧光抗体等），在荧光显微镜下可见抗原抗体反应部位呈现明亮的特异性荧光,IIF检测ANA荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺锤体型 颗粒型 （粗，细）高尔基体型 细胞角蛋白型 纺锤丝型 核仁型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型 着丝点型 颗粒型 （粗、细） 结蛋白（桥粒）型 PCNA型 （I型、II型） 核膜型 （抗板层素/gp210抗体型） 核少点型（抗p80抗体）

9、核多点型（抗Sp100抗体）,常见ANA荧光模型,均质型：Homogeneous pattern（H）,又称弥散型，核质 染色体均匀一致， 中期细胞染色质阳 性（亦呈均质型）。 此染色体与抗dsDNA 抗体、抗组蛋白抗体 有关。常见于SLE。,常见ANA荧光模型,斑点型：Speckled pattern（S）,又称颗粒型，核斑块型。 核质染色呈斑点状、斑 块状，核仁阴性，中期 细胞染色质阴性。 与抗ENA抗体有关。 见于SLE（Sm/RNP抗体） SS（SSA/SSB抗体） ScL（ScL-70抗体）,常见ANA荧光模型,核仁型：Nucleolar pattern（N）,核仁着染荧光，中期 细

10、胞染色质阴性。见 于Scl等,常见ANA荧光模型,核膜型：Membranous pattern（M）,又称周边型。荧光染色 在核的周围，中期细胞 染色阴性。与抗核层抗 体相关。见于SLE,常见ANA荧光模型,着丝点型：centromere pattern,又称散在斑点型。核内 均匀散布大小较一致的 着染荧光细颗粒（40-60 个），无核膜结构，中 期细胞染色质着丝点密 集排列。如中期细胞阳性， 可判断抗着丝点抗体阳性， 见于Scl，PBC等。,常见ANA荧光模型,胞浆型：Cytoplasmic pattern,细胞胞浆荧光染色阳性， 见于PBC等,IIF 检测ANA 荧光染色模型细胞核型,抗双

11、链DNA抗体 （Anti-double strand antibodies）,又称抗天然DNA抗体。 几乎仅在SLE病人中发现抗dsDNA抗体。 3 健康人中如检测到此抗体，其中85%的人在五年 内发展为SLE。 抗体滴度与疾病活动性相关。 5 抗体的滴度为监控治疗提供了有效的依据,短膜虫法(CL-IIF) 马疫锥虫法(TEIIF),间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体,Extractable nuclear antigen(ENA，可提取性核抗原) 是ANA中的一类蛋白的总称.因这类蛋白的共同特点是不含有组蛋白,且能溶解于生理盐水和磷酸缓冲液中,故被称为可提取性核抗原.针对这些可被提取的核抗原

12、产生的抗体,被称为抗ENA抗体. 有几十种，主要有：抗nRNP抗体、抗SM抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗Scl-70抗体和抗Jo-1抗体。,抗可提取性核抗原抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies,抗Sm抗体: 1 在一名Smith女性患者血中首先发现 2 对SLE具有高度特异性 3 和抗dsDNA抗体一起，对SLE具有确诊意义 4 在SLE中发生率为:20%-40%,临床意义,抗nRNP抗体： 1 抗原为小核糖核蛋白，由低分子的RNA和 多种蛋白质组成。 2 高滴度的抗nRNP为MCTD的特征 3 发生率95%-100% 4 抗体滴度

13、与疾病活动性相关 5 也可出现在SLE,抗SSA抗体: 1 SS-A为SS的A抗原 2 常见于SS(40%-95%) 3 也见于SLE(20-60%)及PBC(20%),临床意义,抗SSB抗体: 1 为SS的B抗原 2 几乎仅见于女性患者 3 可出现在SS(40-95%) 4 SLE(10-70%) 5 在SS, 抗SS-A抗体和抗SS-B抗体几乎同时出现,抗Scl-70抗体: 1 抗原为拓扑异构酶 2 PSS,发生率:25%-70%,临床意义,抗Jo-1抗体: 1 组氨酸-tRNA合成酶 2 PM, 发生率 25%-35%,抗原存在于真核细胞线粒体膜的内侧 具有器官特异性和种属特异性 主要有

14、9亚类,是一组与PBC相关的自身抗体 对PBC最具诊断意义的是AMA-2型,发生率98%.高滴度时特异性达97%.,抗线粒体抗体,抗肌动蛋白的抗体 I型自身免疫性肝炎的血清学标志 阳性率90%以上,高滴度时特异性几乎100%,抗平滑肌抗体 anti-Smooth antibody( SMA),定义:针对中性粒细胞胞浆抗原产生的抗体.其靶抗原实际为中性粒细胞胞浆中的颗粒蛋白酶.如: 蛋白酶3;(Proteinase 3 PR3) 髓过氧化物酶; (Myelopernoxidase MPO) 人白细胞弹性蛋白酶;(human leukocyte elastase HLE) 乳铁蛋白; (Lactp

15、ferrin LF) 组蛋白酶G;(cathepsin G cath G) 溶酶体酶等.(lysozyme) 检测方法:IIF、ELISA、IB,抗中心粒细胞胞浆抗体 Anti neutrophil cytoplastic antibodies,IIF法荧光模型: 胞浆型（cytoplastic ANCA C-ANCA） 靶抗原为蛋白酶3 核周型（perinuclear ANCA P-ANCA） 靶抗原为MPO MPO和PR3需用IB 或ELISA法进行确认,抗中心粒细胞胞浆抗体 Anti neutrophil cytoplastic antibodies,cANCA:见于多种系统性血管炎,

16、主要见于WG，约占ANCA阳性率的80-90%, 是活动性WG和微多动脉炎特异和敏感的标志抗体 其滴度和病情活动一致，在WG等原发性血管炎患 者常被作为判断疗效、估计复发的指标，从而指 导临床治疗。 pANCA: 多种系统性血管炎,与多种疾病相关.与病情活动相 关,也可用于疗效判断,估计复发和指导疗效.,抗中心粒细胞胞浆抗体检测临床意义 Cliical significance for Anti- neutrophil cytoplastic antibodies,其它自身抗体 The other autoantibodies,类风湿因子（Rheumatoid factor RF） 为一种自身

17、抗体，可与变性的IgG发生反应，与IgG的 FC段结合。 可分为：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型 凝集实验主要检测IgM型RF 检测方法： 乳胶凝集实验 血球凝集实验 速率散射比浊 ELISA,RA：发生率在90%以上，含量高 SS：发生率在此90%以上，滴度高 其它疾病： SLE PSS 高球蛋白血症 梅毒、麻风 病毒感染、肝硬化等 IgM-RF滴度高低可在一定程度上反映RA的活性，但无明确的密切关系。高滴度的IgM-RF阳性病人预后较差，持续阳性更易发生骨侵蚀,Clinical significance,抗丝集蛋白抗体（Anti-filaggrin antibodies AFA

18、） 主要见于RA患者, 阳性率:36%-59% 特异性:95-99% 可以先于疾病的临床表现，有时可提前几年 潜在的预后标志，高滴度阳性预示较严重类型RA.,其它自身抗体 The other autoantibodies,回 顾,体液免疫功能检查B细胞介导 免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE） 补体（C3、C4、CH50） 核抗原与自身抗体系列(ENA、ANA、ANCA) 细胞免疫功能检查T细胞介导 T细胞亚群（CD4、CD8）,临床应用,不明诊断的筛查试验 怀疑诊断的确诊试验 明确诊断的疗效评价试验,风湿性疾病的实验室诊断,常规筛查试验： 抗O黏蛋白试验 血沉 C反应蛋白 尿蛋白 常用筛查试验 抗核抗体 类风湿因子 免疫球蛋白 补体,风湿性疾病的实验室诊断,诊断试验 抗dsDNA抗体 抗可提取核抗原抗体谱（ENA） 抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA） 抗环瓜氨酸肽抗体（CCP） 抗角蛋白抗体（AKA） 抗磷脂抗体（APLA）,Ig系列的测定 补体系列的测定 细胞因子及细胞亚群的测定 相关基因的检测,免疫缺陷病与免疫增殖病,过敏原皮肤测试 IgE检测 循环免疫复合物测定 嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞测定,变态反应性疾病实验室诊断,谢 谢,