药物检测分析技术课件.ppt

1、维生素类药物的鉴别Page 2一、教学目标目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 维生素B1、C、A、E的结构特点、性质、分析方法Page 3二、实训内容操作：药物加入试剂现象维生素B1氢氧化钠、铁氰化钾、正丁醇蓝色荧光维生素C硝酸银试液黑色沉淀2,6-二氯靛酚钠颜色消失维生素E硝酸，加热橙红色Page 4（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)1.结构特点：三、维生素类药物NNNH2CH3CH2NSCH2CH2OHCH3C

2、l-HCl氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)Page 5（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)2.化学性质：硫色素反应：特征反应紫外吸收：不饱和结构、共轭结构溶解性：水溶性与生物碱沉淀试剂反应：含N原子氯化物特性：盐酸盐三、维生素类药物Page 6三、维生素类药物（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)3.分析方法：性状 吸收系数 246nm下测定吸光度，吸收系数为406436鉴别 硫色素反应 氯化物反应含量测定 非水溶液滴定法Page 7（二）维生素C1.结构特点三、维生素类药物烯二醇结构酸性酸性内酯结构OHOOHOCCH2OHHOH61234

3、5Page 8（二）维生素C2.化学性质溶解性：水溶性酸性：烯二醇结构旋光性：手性碳原子还原性：烯二醇三、维生素类药物Page 9（二）维生素C3.分析方法性状 比旋度 +20.5+21.5鉴别 硝酸银反应银（黑色沉淀）2,6-二氯靛酚钠颜色消失含量测定 碘量法三、维生素类药物Page 10三、维生素类药物含量测定 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6问题：（1）何为约、精密称定？（2）为何用

4、新沸过的冷水？（3）为何加稀醋酸？（4）为何要“立即”滴定？（5）如何进行计算？（6）如为注射液，加入丙酮，其作用？10%千分之一除氧气稳定防止氧化Page 11人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定 标准溶液制备：取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：V C在血浆中不稳定，在5

5、%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。三、维生素类药物Page 12（三）维生素E1.结构特点：合成型或天然型三、维生素类药物R1R2OCH3()CH3OCH3()CH3(CH2)3COCH3C(CH2)3HHC(CH2)3HHCHCH3CH3苯并二氢吡喃醇Vit E(dl-Tocopheryl Acetate)名称R1R2相对活性-Tocopheryl CH3CH31-Tocopheryl CH3H0.5-TocopherylHCH30.2-TocopherylHH

6、0.1Page 13（三）维生素E2.化学性质：溶解性：脂溶性水解性：酯键氧化性：水解后生育酚紫外吸收：苯并二氢吡喃醇三、维生素类药物Page 14（三）维生素E3.分析方法：性状 比旋度：不低于+24 吸收系数：284nm下，吸收系数为41.045.0鉴别 硝酸反应生育红（橙红色）检查 生育酚VE水解产物含量测定 气相色谱法三、维生素类药物max=284nmmin=254nmPage 15检查 生育酚三、维生素类药物OCH3CH3CH3CH3COOCH3C16H33OCH3CH3CH3HOCH3C16H33无水乙醇H2SO4回流CH3CH3CH3OOC16H33CH3OH+2Ce3+2Ce4

7、+取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。现象：亮黄灰紫Page 16含量测定色谱条件：载气N2；固定液硅酮（OV-17）；柱温265；检测器氢火焰离子化检测器(FID)；内标正三十二烷系统适应性实验：n 500；R2（USP：内标十六酸十六醇酯，R1.0）内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液：取VitE对照品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13l注入GC仪，测定，计算校正因子供试液：取供试品约20

8、mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13l注入GC仪，测定，计算含量。三、维生素类药物Page 17（四）维生素A1.结构特点三、维生素类药物CH3CH3CH3CH3CH2ORCH3912345678R=HRetinol(Vit A alcohol)R=CCH3OVA acetate全反式，效价最高Page 18（四）维生素A2.化学性质溶解性：脂溶性不稳定性：共轭多烯紫外吸收：共轭多烯与三氯化锑呈色三、维生素类药物Page 19（四）维生素A3.分析方法鉴别 三氯化锑反应：含量测定 三点校正法三、维生素类药物Vit ASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色

9、Vit A 含量表示效价(I.U./g)Page 20三、维生素类药物AnmVit A samplepure VA acetateimpurities测定原理u 杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；u 物质对光的吸收具有加和性维生素类药物的鉴别Page 22一、教学目标目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型维生素类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察维生素类药物的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 维生素B1、C、A、E的结构特点、性质、分析方法Page 23二、实训内容操作：药物加入试剂现象维

10、生素B1氢氧化钠、铁氰化钾、正丁醇蓝色荧光维生素C硝酸银试液黑色沉淀2,6-二氯靛酚钠颜色消失维生素E硝酸，加热橙红色Page 24（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)1.结构特点：三、维生素类药物NNNH2CH3CH2NSCH2CH2OHCH3Cl-HCl氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)Page 25（一）维生素B1(Thiamine Hydrochloride)2.化学性质：硫色素反应：特征反应紫外吸收：不饱和结构、共轭结构溶解性：水溶性与生物碱沉淀试剂反应：含N原子氯化物特性：盐酸盐三、维生素类药物Page 26三、维生素类药物（一）维生素B1(Thiamin

11、e Hydrochloride)3.分析方法：性状 吸收系数 246nm下测定吸光度，吸收系数为406436鉴别 硫色素反应 氯化物反应 红外光谱图含量测定 非水溶液滴定法Page 27（二）维生素C1.结构特点三、维生素类药物烯二醇结构酸性酸性内酯结构OHOOHOCCH2OHHOH612345Page 28（二）维生素C2.化学性质溶解性：水溶性酸性：烯二醇结构旋光性：手性碳原子还原性：烯二醇三、维生素类药物Page 29（二）维生素C3.分析方法性状 熔点 比旋度 +20.5+21.5鉴别 硝酸银反应银（黑色沉淀）2,6-二氯靛酚钠颜色消失含量测定 碘量法三、维生素类药物Page 30三、

12、维生素类药物含量测定 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6问题：（1）何为约、精密称定？（2）为何用新沸过的冷水？（3）为何加稀醋酸？（4）为何要“立即”滴定？（5）如何进行计算？（6）如为注射液，加入丙酮，其作用？10%千分之一除氧气稳定防止氧化Page 31三、维生素类药物Page 32人血浆中Vit C浓度的HPLC法测定 标准溶液制备：取V C对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶

13、中，加10%偏磷酸稀释至刻度，得维生素C储备液浓度为1mg/ml，置冰箱中2保存，3日内可用。血浆样品预处理：取受试者静脉血，立即置肝素化的离心试管中，3000rpm离心5min；取血浆0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，涡旋混合0.5min，离心，分取上清液，置冰箱2贮存，直至测定。稳定性考察：V C在血浆中不稳定，在5%偏磷酸溶液中也难以保持长期稳定，应尽可能缩短药物分离和处理时间。样品测定：每天抽取的血样应当日测定，每天建立一条标准曲线，并随行测定高、中、低浓度的双样本质控样品。三、维生素类药物Page 33（三）维生素E1.结构特点：合成型或天然型三、维生素类药物R1R2OC

14、H3()CH3OCH3()CH3(CH2)3COCH3C(CH2)3HHC(CH2)3HHCHCH3CH3苯并二氢吡喃醇Vit E(dl-Tocopheryl Acetate)名称R1R2相对活性-Tocopheryl CH3CH31-Tocopheryl CH3H0.5-TocopherylHCH30.2-TocopherylHH0.1Page 34（三）维生素E2.化学性质：溶解性：脂溶性水解性：酯键氧化性：水解后生育酚紫外吸收：苯并二氢吡喃醇三、维生素类药物Page 35（三）维生素E3.分析方法：性状 比旋度：不低于+24 折光率 吸收系数：284nm下，吸收系数为41.045.0鉴别

15、 硝酸反应生育红（橙红色）红外光谱 HPLC检查 生育酚VE水解产物 有关物质含量测定 气相色谱法三、维生素类药物max=284nmmin=254nmPage 36检查 生育酚三、维生素类药物OCH3CH3CH3CH3COOCH3C16H33OCH3CH3CH3HOCH3C16H33无水乙醇H2SO4回流CH3CH3CH3OOC16H33CH3OH+2Ce3+2Ce4+取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。现象：亮黄灰紫Page 37含量测定色谱条件：载气N2；固定液硅

16、酮（OV-17）；柱温265；检测器氢火焰离子化检测器(FID)；内标正三十二烷系统适应性实验：n 500；R2（USP：内标十六酸十六醇酯，R1.0）内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液：取VitE对照品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13l注入GC仪，测定，计算校正因子供试液：取供试品约20mg置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13l注入GC仪，测定，计算含量。三、维生素类药物Page 38（四）维生素A1.结构特点三、维生素类药物CH3CH3CH3CH3CH2ORCH391234567

17、8R=HRetinol(Vit A alcohol)R=CCH3OVA acetate全反式，效价最高Page 39（四）维生素A2.化学性质溶解性：脂溶性不稳定性：共轭多烯紫外吸收：共轭多烯与三氯化锑呈色三、维生素类药物Page 40（四）维生素A3.分析方法鉴别 三氯化锑反应：含量测定 三点校正法三、维生素类药物Vit ASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色Vit A 含量表示效价(I.U./g)Page 41三、维生素类药物AnmVit A samplepure VA acetateimpurities测定原理u 杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大

18、吸收度减小；u 物质对光的吸收具有加和性巴比妥类药物的鉴别Page 43一、教学目标目的：掌握采用化学方法鉴别药物的基本操作 掌握典型巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯内容：观察苯巴比妥的鉴别反应现象，理解结构和发生化学反应的关系 巴比妥类药物的结构特点、性质、分析方法Page 44二、实训内容操作：药物苯巴比妥司可巴比妥钠硫喷妥钠银盐反应过量，白色沉淀过量，白色沉淀过量，白色沉淀铜盐反应紫色沉淀紫色沉淀绿色沉淀溴 水褪色Page 45（一）结构特点三、巴比妥类药物环状丙二酰脲类化合物Page 46三、巴比妥类药物（二）代表药物(Phenylbarbital

19、)(barbital)Page 47三、巴比妥类药物(Secobarbital)戊巴比妥(Pentobarbital)Page 48三、巴比妥类药物（三）化学性质1.与金属离子反应a.与银盐反应1,5,5取代的巴比妥类药物AgNO3可溶性的一银盐Na2CO35,5取代的巴比妥类药物AgNO3Na2CO3可溶性的一银盐AgNO3二银盐白色沉淀Page 49三、巴比妥类药物CCOCONHNCONaR1R2白色难溶性二银盐CCOCONNCONaR1R2AgAgNO3Na2CO3滴加AgNO3AgCCOCONNCOR1R2Ag可溶性一银盐Page 50三、巴比妥类药物（三）化学性质1.与金属离子反应b

20、.与铜盐反应巴比妥类铜吡啶显色巴比妥类紫色或紫色沉淀硫巴比妥类绿色Page 51三、巴比妥类药物水吡啶部分离子化有色配位化合物Page 52三、巴比妥类药物（三）化学性质1.与金属离子反应c.与钴盐反应 巴比妥类药物+钴盐 紫堇色碱性Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2异丙胺无水甲醇或乙醇Page 53三、巴比妥类药物（三）化学性质1.与金属离子反应d.与汞盐反应巴比妥类药物+汞盐白色（可溶于氨试液）Page 54（三）化学性质2.弱酸性：pKa:7.38.4三、巴比妥类药物Page 55一级电离二级电离烯醇互变三、巴比妥类药物Page 56三、巴比妥类药物（三）化学性质3.水解性NHNO

21、NaOO+2H2OONHNH2O+NaHCO3pH6789分解率(%)261741pH对苯巴比妥分解率的影响20C放置一年巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，须制成粉针剂，临用时溶解Page 57三、巴比妥类药物（三）化学性质4.紫外吸收光谱特征(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥类药物的紫外吸收光谱ABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离)1,5,5-三取代巴比妥类药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。Page 58（三）化学性质4.紫外吸收光谱特征三、巴比

22、妥类药物3202802402000.80.50.2(nm)A238287304硫代巴比妥的紫外吸收光谱A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L)Page 59三、巴比妥类药物（三）化学性质5.显微结晶Page 60（四）分析方法1.鉴别（1）一般鉴别方法丙二酰脲类a.银盐反应b.铜盐反应（2）特殊鉴别反应a.测定熔点b.特殊取代基三、巴比妥类药物Page 61（四）分析方法用不饱和取代基的鉴别试验(司可巴比妥钠)三、巴比妥类药物NHNNaOOOCH3CH3CH2I2NHNNaOOOCH3CH3CH2II褪色NHNNaOOOCH3CH3CH2Br BrBr2NHNNaOO

23、OCH3CH3CH2OH OHKMnO4Page 62（四）分析方法利用芳环取代基的鉴别试验(苯巴比妥钠)a.硝化反应b.硫酸-亚硝酸钠反应：区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物c.甲醛-硫酸反应三、巴比妥类药物Page 63（四）分析方法硫元素反应(硫代巴比妥类)三、巴比妥类药物NHNOOSNaH3CCH3H3C+Pb2+NaOHNHNOOSH3CCH3H3C2PbPbSPage 64（四）分析方法2.杂质检查（1）酸度苯巴比妥检查 取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色（2）乙醇溶液澄清度（3）中性或碱性物质（4）有

24、关物质（5）干燥失重（6）炽灼残渣三、巴比妥类药物Page 65（四）分析方法3.含量测定（1）银量法(Argentometry)苯巴比妥三、巴比妥类药物0.2g甲醇 40ml苯巴比妥测定3%无水碳酸钠电位滴定法(AgNO3)Page 66（四）分析方法3.含量测定（2）溴量法司可巴比妥钠含量测定 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指

25、示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。三、巴比妥类药物何谓？量具？为何？为何？Page 67（四）分析方法3.含量测定（3）紫外分光光度法三、巴比妥类药物药名max(nm)E巴比妥240538苯巴比妥253320戊巴比妥240310异戊巴比妥238440司可巴比妥240330硫喷妥305930NaOH溶液(0.1mol/L)溶剂pH9.4硼酸盐缓冲液pH9.4硼酸盐缓冲液葡萄糖中氯化物、铁盐的检查Page 69一、教学目标目的：掌握采用纳氏比色管检查药品中一般杂质操作方法 掌握对照法检查杂质遵

26、循的平行原则 良好的记录实验现象及数据的习惯 踏实认真的工作态度内容：葡萄糖中氯化物、铁盐检查及限量计算 一般杂质检查方法Page 70二、实训内容操作：氯化物检查供试品稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml标准溶液稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml 暗处放置5min(避免AgCl分解)0.6g6.0ml观察到？Page 71注：供试品溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试品溶液两份，分别置50ml纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液，

27、另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。Page 72操作：铁盐检查二、实训内容供试品2.0g显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀HCl 4ml过硫酸铵 50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水定容观察到？Page 73注：如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，分层后，将正丁醇层移置50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至25ml，比较，即得。Page 74思考：平行原则：如何通过操作实现？观察现象：混浊？颜色？如何比较：浊度大小、颜色深浅限量计算：二、实训内容%

28、100SVC(%)L生物碱中特殊杂质检查Page 76一、教学目标目的：掌握采用TLC进行特殊杂质检查操作方法 掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯 掌握一定娴熟的操作技能内容：氨茶碱中有关物质的检查 生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法Page 77二、实训内容操作：.供试品：0.2g+2ml水，溶解，用甲醇稀释至10ml。10l对照品：1ml供试品用甲醇稀释至200ml。10l色谱条件：固定相：GF254展开剂：正丁醇-丙酮-三氯甲烷-浓氨溶液（4:3:3:1）显色：254nmPage 78操作二、实训内容.供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主

29、斑点比较，不得更深。供试品 对照品Page 79原理：特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法杂质未知且不可得比较方法：供试品杂质点与对照品主斑点限量计算：二、实训内容L=供试品点样量对照品点样量*100%是什么成分？Page 80三、生物碱类药物Page 81特点含氮碱性化合物没有共同母核多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）三、生物碱类药物Page 82三、生物碱类药物（一）结构与性质1.苯烃胺类R1HCOHHCR3NHR2*弱碱性：l 烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性。l 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（

30、或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性Page 83CHCHCH3NHCH3OH（伪）麻黄碱NCH3OHOOCH3H3COH3COH3CO秋水仙碱三、生物碱类药物Page 84OHOOHNCH32,H2SO4,H2OONCH3OHHOO,HBr,3H2O*OHOOHNCH32,H2SO4,H2OONCH3OHHOO,HBr,3H2O三、生物碱类药物（一）结构与性质2.托烷类12345678NOHH12345678N莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Tropine)硫酸阿托品(atropine)氢溴酸东莨菪碱 (

31、scopolamine hydrobromic acid)*Page 85三、生物碱类药物（一）结构与性质3.喹啉类N(Quinoline)12345678NHOHNHHHCCH2H3CO,H2SO4,2H2ONHHONHHCCH2H3CO,H2SO4,2H2OH22NFNOOHOHN,HCl,H2ONHOHNHHHC CH2H3CO,H2SO4,2H2ONHHONHHC CH2H3CO,H2SO4,2H2OH22NFNOOHOHN,HCl,H2O硫酸奎宁(Quinine sulfate)硫酸奎尼丁(quinidine sulfate)盐酸环丙沙星(ciprofloxacin hydrochl

32、oride)喹啉环喹核碱Page 86三、生物碱类药物（一）结构与性质4.异喹啉类NHOOHOHHHH3C吗啡 morphinPage 87三、生物碱类药物（一）结构与性质5.吲哚类OONN士的宁吲哚氮脂环氮芳环Page 88三、生物碱类药物（一）结构与性质6.黄嘌呤类NNNNOOCH3CH3CH3咖啡因弱碱性近中性Page 89三、生物碱类药物（二）鉴别方法1.一般鉴别方法a.生物碱沉淀试剂酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀反应。常用试剂：I2KI 鞣酸 碘化铋钾 硅钨酸 碘化汞钾生物碱与碘化铋钾反应显色Page 90三、生物碱类药物（二）鉴别方法1.一般鉴别方法b.熔

33、点测定：生物碱、衍生物c.显色反应：生物碱固体+显色试剂颜色 常用显色剂：浓H2SO4、浓HNO3、钼硫酸d.紫外分光光度法：max、Ee.TLC法：RfPage 91（二）鉴别方法2.特征鉴别方法a.双缩脲反应-苯烃胺类b.Vitaili反应-托烷类c.绿奎宁反应-喹啉类d.紫脲酸胺反应-黄嘌呤类e.甲醛-硫酸反应-吗啡（异喹啉）三、生物碱类药物Page 92三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法溶剂种类适用范围常用溶剂酸性有机弱碱冰醋酸碱性有机弱酸二甲基甲酰胺两性酸/碱甲醇惰性酸/碱甲苯、氯仿、丙酮Page 93三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法在水中碱性较

34、弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）BH+A-+HClO4BH+ClO4-+HA游离碱类盐被置换出的弱酸当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。Page 94三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法供试品+冰醋酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结果HClO4滴定空白试验校正指示剂碱性溶液pKb10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显Page 95（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法a.适用范围 主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定Kb为10-810-1

35、0时，宜选冰醋酸作为溶剂；Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。三、生物碱类药物咖啡因(pKb=14.2)Page 96三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法b.酸根影响冰醋酸中酸性：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2，如量不足终点不明显，结果偏低c.滴定剂稳定性01010011.01ttNNPage 97三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法d.终点指示方法：常用电位法和指示剂法结晶紫 Crystal Violet（CV）紫 蓝 蓝绿 黄绿 黄 （碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位

36、法校准。Page 98三、生物碱类药物（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法a.原理 样品 提取液(洗净、脱水等)直接加定过量酸标准液 提取 残渣 水 or 酸的水溶液 溶解 有机溶剂 提取 OH 碱化 有机碱以盐 有机碱以游 的形式存在 离形式存在 蒸去溶剂 蒸去溶剂 定过量酸标准溶液 碱标准液 残渣 中性乙醇溶解 酸标准液 酸提取液用碱标准液 重量法干燥、恒重、称量 Page 99（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论碱化试剂常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb生物碱的

37、pKb三、生物碱类药物Page 100（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。氯仿：比重大，易于分离对大部分生物碱都有较大的溶解度不燃烧，使用安全氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解三、生物碱类药物Page 101（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。三、生物碱类药物Page 102三、生物碱类药物（三）含量测定方法3.酸性染料比色法有机相(BH+In-)水相(BH+In-)+HIn H+In-+B H+BH+UV Page 103三、生物碱类药物（三）含量测定方法

38、3.酸性染料比色法影响因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分酸性染料里面的有色杂质Page 104三、生物碱类药物（三）含量测定方法3.酸性染料比色法示例 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定 精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。Page 105（三）含量测定方法4.紫外-可见分光光度法

39、直接紫外测定萃取后紫外测定萃取-双波长分光光度法5.HPLC6.LC-MS/MS三、生物碱类药物生物碱中特殊杂质检查Page 107一、教学目标目的：掌握采用TLC进行特殊杂质检查操作方法 掌握生物碱类药物的结构特点、性质、分析方法 良好的记录实验现象及数据的习惯 掌握一定娴熟的操作技能内容：氨茶碱中有关物质的检查 生物碱类药物分类、结构特点、性质、分析方法Page 108二、实训内容操作：.供试品：0.2g+2ml水，溶解，用甲醇稀释至10ml。10l对照品：1ml供试品用甲醇稀释至200ml。10l色谱条件：固定相：GF254展开剂：正丁醇-丙酮-三氯甲烷-浓氨溶液（4:3:3:1）显色：

40、254nmPage 1091.点样：点样量相同，位置在同一水平线上，不得破坏硅胶表面 如需重复点样：前一次点样溶剂挥干后，在同一位置点样 展开前需挥干溶剂2.展开剂配制：小体积展开剂用刻度吸管量取3.展开：用展开剂平衡展开缸 不要移动 展至距硅胶板边缘0.5-1cm停止4.结果显示：展开剂挥干后再观察 先日光灯、再紫外灯、最后显色剂5.结果判断：点圆而集中，无拖尾二、实训内容Page 110操作二、实训内容.供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。供试品 对照品Page 111原理：特殊杂质检查：供试品溶液自身稀释法杂质未知且不可得比较方法：供试品杂质点与对照品主斑点限量计算

41、：二、实训内容L=供试品点样量对照品点样量*100%是什么成分？Page 112三、生物碱类药物Page 113特点含氮碱性化合物没有共同母核多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）三、生物碱类药物Page 114三、生物碱类药物生物碱碱性强弱一般规律是：季铵碱类脂肪胺类NH3芳胺、N-芳杂环酰胺类OONOCH3OCH3+OH-盐酸小檗碱NH2.芳胺NNNNOOCH3CH3CH3咖啡因Page 115三、生物碱类药物（一）结构与性质1.苯烃胺类R1HCOHHCR3NHR2*弱碱性：l 烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性。l 游离碱难溶于水，易

42、溶于有机溶剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性Page 116CHCHCH3NHCH3OH（伪）麻黄碱NCH3OHOOCH3H3COH3COH3CO秋水仙碱三、生物碱类药物Page 117OHOOHNCH32,H2SO4,H2OONCH3OHHOO,HBr,3H2O*OHOOHNCH32,H2SO4,H2OONCH3OHHOO,HBr,3H2O三、生物碱类药物（一）结构与性质2.托烷类12345678NOHH12345678N莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Tropin

43、e)硫酸阿托品(atropine)氢溴酸东莨菪碱 (scopolamine hydrobromic acid)*Page 118三、生物碱类药物（一）结构与性质3.喹啉类N(Quinoline)12345678NHOHNHHHCCH2H3CO,H2SO4,2H2ONHHONHHCCH2H3CO,H2SO4,2H2OH22NFNOOHOHN,HCl,H2ONHOHNHHHC CH2H3CO,H2SO4,2H2ONHHONHHC CH2H3CO,H2SO4,2H2OH22NFNOOHOHN,HCl,H2O硫酸奎宁(Quinine sulfate)硫酸奎尼丁(quinidine sulfate)盐酸

44、环丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)喹啉环喹核碱Page 119三、生物碱类药物（一）结构与性质4.异喹啉类NHOOHOHHHH3C吗啡 morphinPage 120三、生物碱类药物（一）结构与性质5.吲哚类OONN士的宁吲哚氮脂环氮芳环Page 121三、生物碱类药物（一）结构与性质6.黄嘌呤类NNNNOOCH3CH3CH3咖啡因弱碱性近中性Page 122三、生物碱类药物（二）鉴别方法1.一般鉴别方法a.生物碱沉淀试剂酸性水溶液中，与重金属盐类和大分子酸类等沉淀试剂发生沉淀反应。常用试剂：I2KI 鞣酸 碘化铋钾 硅钨酸 碘化汞钾生物碱与碘化铋钾反应显色Pa

45、ge 123三、生物碱类药物（二）鉴别方法1.一般鉴别方法b.熔点测定：生物碱、衍生物c.显色反应：生物碱固体+显色试剂颜色 常用显色剂：浓H2SO4、浓HNO3、钼硫酸d.紫外分光光度法：max、Ee.TLC法：RfPage 124（二）鉴别方法2.特征鉴别方法a.双缩脲反应-苯烃胺类b.Vitaili反应-托烷类c.绿奎宁反应-喹啉类d.紫脲酸胺反应-黄嘌呤类e.甲醛-硫酸反应-吗啡（异喹啉）三、生物碱类药物Page 125三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法溶剂种类适用范围常用溶剂酸性有机弱碱冰醋酸碱性有机弱酸二甲基甲酰胺两性酸/碱甲醇惰性酸/碱甲苯、氯仿、丙酮Page

46、126三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）BH+A-+HClO4BH+ClO4-+HA游离碱类盐被置换出的弱酸当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。Page 127三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法供试品+冰醋酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结果HClO4滴定空白试验校正指示剂碱性溶液pKb10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显Page 128（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法a

47、.适用范围 主要用于Kb10-8的有机碱盐的含量测定Kb为10-810-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；Kb为10-1010-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb10-12时，应用醋酐作为溶剂。三、生物碱类药物咖啡因(pKb=14.2)Page 129三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法b.酸根影响冰醋酸中酸性：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2，如量不足终点不明显，结果偏低c.滴定剂稳定性01010011.01ttNNPage 130三、生物碱类药物（三）含量测定方法1.非水溶液滴定法d.终点指示方法：常用电位法和指示剂法结晶紫 Crystal Vi

48、olet（CV）紫 蓝 蓝绿 黄绿 黄 （碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。Page 131三、生物碱类药物（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法a.原理 样品 提取液(洗净、脱水等)直接加定过量酸标准液 提取 残渣 水 or 酸的水溶液 溶解 有机溶剂 提取 OH 碱化 有机碱以盐 有机碱以游 的形式存在 离形式存在 蒸去溶剂 蒸去溶剂 定过量酸标准溶液 碱标准液 残渣 中性乙醇溶解 酸标准液 酸提取液用碱标准液 重量法干燥、恒重、称量 Page 132（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论碱化试剂常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、M

49、gO等。对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb生物碱的pKb三、生物碱类药物Page 133（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂。氯仿：比重大，易于分离对大部分生物碱都有较大的溶解度不燃烧，使用安全氯仿在碱性下受热很容易分解，尤其是碱性较强时更容易分解三、生物碱类药物Page 134（三）含量测定方法2.提取酸碱滴定法b.讨论指示剂的选择：选择在酸性范围内变色的指示剂。甲基红、溴酚蓝。三、生物碱类药物Page 135三、生物碱类药物（三）含量测定方法3.酸性染料比色法有机相(BH+In-)水相(BH+In-)+HIn

50、H+In-+B H+BH+UV Page 136三、生物碱类药物（三）含量测定方法3.酸性染料比色法影响因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分酸性染料里面的有色杂质Page 137三、生物碱类药物（三）含量测定方法3.酸性染料比色法示例 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定 精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别