XX生物技术公司蛋白质双向电泳知识学习课件.ppt
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1、蛋白质双向电泳知识蛋白质双向电泳知识学习学习蛋白质组学(蛋白质组学(proteomics)l概念:是从整体角度分析生物体蛋白质组动态变化的一门科学l研究内容:蛋白质的识别、定量;蛋白质的定位、修饰;蛋白质之间的相互作用并根据这些研究最终确定它们的功能双向电泳(2DE/DIGE)实验组和对照组样品制备提出生物学问题凝胶图像分析差异蛋白点选取蛋白酶解及质谱分析差异蛋白点的成功鉴定生物学问题的解释技术流程技术流程 双向电泳双向电泳(2DE/DIGE)l目前进行蛋白质组学分析的最常规实验技术l能实现多达10000种不同蛋白质进行分离分析双向电泳(2DE)示意图提取的总蛋白溶液等电聚焦,实现蛋白质按等电
2、点进行分离SDS-PAGE分离,使得蛋白质按分子量大小排序分子量大小通过双向电泳使得不同等电点和分子量的蛋白质根据其自身特性分布到凝胶的不同位置从而实现蛋白质的双向分离硝酸银染色图谱考马斯亮蓝染色图谱2DE图谱图谱双向电泳(DIGE)示意图样品1:Cy3标记样品2:Cy5标记将标记的样品混合双向电泳分离荧光扫描仪扫描图像重叠分析DIGE图谱图谱样品制备样品制备l双向电泳的最关键步骤之一l制备原则:尽可能多地提取出总蛋白质,尽可能简单的操作步骤,注意防止样品提取过程中的各种化学修饰,去除样品中核酸、盐离子等干扰物质等电聚焦等电聚焦l通过10000V高压使得蛋白质按照其等电点特性进行聚焦l步骤:胶
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