细胞病理技术综述课件.ppt
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- 细胞 病理 技术 综述 课件
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1、 细胞病理技术综述 卢晓芳1主要内容细胞涂片技术细胞蜡块制作HPV检测技术1 12 23 32细细胞胞病病理理学学(c cy yt to op pa at th ho ol lo og gy y)定定义:义:是采集人体各部位的细胞,经染色后用显微镜观察其形态,协助临床诊断疾病的一门学科。3细细胞胞病病理理学学(c cy yt to op pa at th ho ol lo og gy y)评评价价(优优点)点):1.简单易行、安全性强;2.对设备要求不高、费用低;3.对患者造成的痛苦少,可反复取材检查;4.诊断迅速,特别适用于大规模防癌普查和高危人群的随访观察。45适适用用大大规规模模防防癌癌
2、筛筛查查 6 适用大规模防癌筛查适用大规模防癌筛查 甲状腺穿刺甲状腺穿刺妇科涂片妇科涂片乳腺穿刺乳腺穿刺7细细胞胞病病理理学学(c cy yt to op pa at th ho ol lo og gy y)评评价价(缺缺点)点):1.因细胞病理检查的局限性,只能看到少数细胞,不能全面观察病变组织结构,有一定的漏诊、误诊率;2.较难确定肿瘤的具体部位;3.不易对癌细胞做出明确的分型。8细细胞胞病病理理学学(c cy yt to op pa at th ho ol lo og gy y)分类(根据标本来源):分类(根据标本来源):1.1.脱落细胞学(脱落细胞学(exfoliative cytol
3、ogyexfoliative cytology)妇科:宫颈涂片非妇:胸腹腔积液、尿液、脑脊液、痰、乳溢、食管拉网等 2.2.细针吸取细胞学(细针吸取细胞学(fine needle aspiration cytologyfine needle aspiration cytology)甲状腺、乳腺、淋巴结、体表各部位;以及在影像学引导下,对胸腹腔的肿块穿刺。9传统制片技术传统制片技术一、直接制片一、直接制片将新鲜标本直接涂在载玻片将新鲜标本直接涂在载玻片上1.宫颈涂片2.痰涂片3.食管拉网4.乳溢5.鼻咽10涂片手法涂片手法11传统制片技术传统制片技术二、普通离心制片二、普通离心制片 胸腹腔积液、
4、心包积液、尿、脑脊液、穿刺液等液体标本,需要经离心后涂片。12传统制片技术传统制片技术二、普通离心制片二、普通离心制片 标本一般不少于标本一般不少于50ml50ml(脑脊液、穿刺液除外)(脑脊液、穿刺液除外)移到离心管中移到离心管中 离心离心2500r/102500r/10minmin 倒去倒去上清上清稀释合稀释合适浓度适浓度 重悬重悬沉淀沉淀 细胞细胞涂片涂片13传统制片技术传统制片技术二、普通离心制片二、普通离心制片 含血较多的标本,离心后会出现明显分层含血较多的标本,离心后会出现明显分层涂片时需取涂片时需取中间白膜层中间白膜层14传统制片技术传统制片技术 含血较多的标本,若红细胞过多,会
5、干扰医生诊断视野含血较多的标本,若红细胞过多,会干扰医生诊断视野15传统制片技术传统制片技术 红细胞裂解液祛除红细胞后,稀释合适浓度,直接重悬沉淀,涂片,背景清晰红细胞裂解液祛除红细胞后,稀释合适浓度,直接重悬沉淀,涂片,背景清晰 缺点:制成细胞蜡块后,有含铁血黄素生成,干扰免疫组化判读缺点:制成细胞蜡块后,有含铁血黄素生成,干扰免疫组化判读备注:备注:若标本量多,可若标本量多,可多分装几管离心。多分装几管离心。一部分祛红后涂片一部分祛红后涂片;另一部分,备做细另一部分,备做细胞蜡块,以免含铁血胞蜡块,以免含铁血黄素干扰。黄素干扰。16传统制片技术传统制片技术三、特殊离心涂片技术(三、特殊离心
6、涂片技术(细胞甩片细胞甩片)制备细胞含量很少的样品:如脑脊液、尿液、穿刺液Cytospin Cytospin 外观图外观图Cytospin Cytospin 内视图内视图17传统制片技术传统制片技术四、注意事项四、注意事项1.涂片时要注意避免来回反复摩擦,否则可能将细胞破坏;2.涂片尽可能均匀,太厚太薄,都不能满足镜下阅片要求;3.涂片完成后,潮干固定,不能过于干燥,否则细胞异型,不利于诊断,更易引起误诊;4.标本不宜放置时间过长,特别是尿液,需4冰箱冷藏,但不宜超过48h.18传统制片技术传统制片技术五、细胞涂片固定(固定剂种类)五、细胞涂片固定(固定剂种类)1.95%乙醇:首选固定剂2.甲
7、醇:固定作用比乙醇效果好,核结构清晰,但有毒性毒性3.丙酮:渗透力强,但使细胞强烈皱缩,对核的固定也欠佳4.10%NBF:交联固定,速度太慢5.Carnoy液:涂片做特染时常用固定剂19传统制片技术传统制片技术五、细胞涂片固定(注意事项)五、细胞涂片固定(注意事项)1.一病例,一容器,避免交叉污染(理想状态,不现实理想状态,不现实)2.固定液原则上每日更换,若为节省成本,没有日更换,也需过滤后使用,且必须保持其浓度3.固定时间:约15mim4.4.关键:涂片完成后,潮干立即固定,不可干燥,否则细胞褪变。关键:涂片完成后,潮干立即固定,不可干燥,否则细胞褪变。20传统制片技术传统制片技术干燥后固
8、定,细胞褪变干燥后固定,细胞褪变正常湿固定正常湿固定21液液基基细细胞胞学学技技术术 定义定义 液基细胞学检验技术,通过标本采集及保存、细胞混匀、分离提取诊断细胞、全自动制片及染色等过程制作细胞薄片,全过程均在液体状态全过程均在液体状态下完成,故称为液基细胞学技术。分类分类1.膜式薄层制片技术(thin-prep cytolosy test,TCT)2.LCT沉降式薄层检测技术(Auto Cyte PREP,LCT)22传传统统制制片片与与液液基基制制片片技技术术的的比比较较传统制片传统制片液基制片液基制片约约20%20%标本移至玻片标本移至玻片几乎几乎100%100%标本被收集至保存液中标本
9、被收集至保存液中制片技术不稳定、不能重复制片制片技术不稳定、不能重复制片技术稳定可靠、可以重复技术稳定可靠、可以重复易受血、粘液、炎性物遮盖易受血、粘液、炎性物遮盖去除血、粘液、及大量炎性遮盖物去除血、粘液、及大量炎性遮盖物细胞分布不均匀细胞分布不均匀,易重叠易重叠细胞分布均匀集中细胞分布均匀集中,不易重叠不易重叠涂片区域过大,观察费时费力涂片区域过大,观察费时费力,易漏诊易漏诊制片区域集中,不易漏诊制片区域集中,不易漏诊23液液基基细细胞胞妇妇科科标标本本采采集集耗耗材材24液基细胞标本采集步骤液基细胞标本采集步骤漂洗漂洗拧紧拧紧记录记录25液基细胞妇科标本采集注意事项液基细胞妇科标本采集注
10、意事项采样过程中,将宫颈刷向同一方向转采样过程中,将宫颈刷向同一方向转3535圈,不圈,不要太用力或转得过多以免出血冲淡细胞并使用恰当要太用力或转得过多以免出血冲淡细胞并使用恰当的力度保证取到更多的细胞。的力度保证取到更多的细胞。经期不能取材。经期不能取材。分泌物太多时要用干绵签擦干净后再取。分泌物太多时要用干绵签擦干净后再取。宫颈糜烂严重的旋转不要超过宫颈糜烂严重的旋转不要超过3 3圈,以免出血。圈,以免出血。旋转时向同一方向,不要来回转动以免加大创伤引旋转时向同一方向,不要来回转动以免加大创伤引起出血。起出血。26液液基基细细胞胞制制片片技技术术膜式薄层制片技术(膜式薄层制片技术(thin
11、-prep cytolosy test,TCTthin-prep cytolosy test,TCT)新柏氏膜式液基薄层细胞学(TCT):1996年5月通过美国FDA批准用于临床宫颈癌筛查。拥有超过27项国际专利。27TCTTCT取材优点取材优点28液液基基细细胞胞制制片片技技术术膜式薄层制片技术(膜式薄层制片技术(thin-prep cytolosy test,TCTthin-prep cytolosy test,TCT)新柏氏新柏氏T2000T2000(原理:负压膜吸附)(原理:负压膜吸附)29液液基基细细胞胞学学技技术术膜式薄层制片技术(膜式薄层制片技术(TCTTCT)制片过程)制片过程
12、30液液基基细细胞胞学学技技术术膜式薄层制片技术(膜式薄层制片技术(TCTTCT)制片后巴氏染色)制片后巴氏染色31 新柏氏新柏氏 玻片扫描分析影像系统(玻片扫描分析影像系统(TISTIS)自动阅片系统)自动阅片系统 TIS使医生阅片技巧与计算机强大影像处理能力完美结合。与传统涂片人工阅片相比,TIS 可帮助医生工作效率提高75%,且可将假阴性率降低至 0.012%。备注:该系统只能扫描备注:该系统只能扫描TCTTCT32液液基基细细胞胞学学技技术术沉降式液基薄层制片技术沉降式液基薄层制片技术(Auto Cyte PREPAuto Cyte PREP,LCTLCT)该技术为沉降式沉降式原理技术
13、。代表公司有美国BD公 司的LCT,国产广州安必平公司的LBP 33液液基基细细胞胞制制片片技技术术LCTLCT沉降式液基薄层制片技术原理沉降式液基薄层制片技术原理(一)用梯度密度试剂分离去除液基细胞学中的血液、黏液等干扰成分,富集细胞及诊断成份。(二)根据人体不同类型细胞其比重不同的特点,尤其是病变细胞比重大、沉降速度快,与特殊处理后的载玻片相互吸引,从而最大程度地捕获病变细胞和具诊断价值的成份,最终制成背景清晰、诊断线索明确的单层细胞薄片 34液液基基细细胞胞学学技技术术LCTLCT沉降式液基薄层制片技术原理沉降式液基薄层制片技术原理病变程度越重的细胞,沉降得越快,被玻片捕获的机率就越大,
14、即使选择病变程度越重的细胞,沉降得越快,被玻片捕获的机率就越大,即使选择诊断面积内的细胞数量为诊断面积内的细胞数量为50005000个,亦是所采集的所有细胞中病变程度相对最个,亦是所采集的所有细胞中病变程度相对最重的重的50005000个细胞,可明显提高检出率。个细胞,可明显提高检出率。35液基细胞制片技术液基细胞制片技术1.1.宫颈细胞刷宫颈细胞刷 直接入瓶,通过震荡器处直接入瓶,通过震荡器处理,保证细胞刷收集到的细胞理,保证细胞刷收集到的细胞100%100%用用于制片,避免丢弃采样刷而导致刷上于制片,避免丢弃采样刷而导致刷上细胞丢失的情况。细胞丢失的情况。2.2.标本处理液标本处理液 主要
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