医科大学精品课件：免疫学技术及其在科研中的应用.pptx

1、免疫学技术及其在科研中的应用 郑州大学第三附属医院检验科 石 瑛 免疫学技术研究范畴 免疫细胞相关试验技术 免疫分子相关试验技术 免疫学相关标记技术 免疫学相关蛋白质技术 免疫学相关分子生物学技术 免疫学相关检测技术 免疫学相关实验动物模型 免疫细胞相关技术 介绍单核巨噬细胞、树突状细胞、NK细 胞、T细胞、B细胞以及这些细胞的亚群的 理论背景、相关实验和具体方法 免疫细胞的检测 免疫细胞数量的检测 免疫细胞功能的检测 免疫细胞的分布 外周血 免疫器官：胸腺、骨髓、脾脏、淋巴结 黏膜相关淋巴组织 组织 1. 免疫细胞分离试验 外周血单个核细胞的分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞

2、亚群的分离 分离免疫细胞的目的 检测免疫细胞的数量和功能，评判机体免 疫状态 免疫细胞的细胞生物学研究 免疫细胞的培养与建株 1.1 外周血单个核细胞的分离 免疫细胞的种类 淋巴细胞 单核细胞 树突状细胞 粒细胞 分离免疫细胞的样本来源 外周血 脾脏 淋巴结 胸腺 骨髓 分离免疫细胞的一般原理 根据各种免疫细胞物理学和生物学特征不 同 密度大小 表面标志 生物学活性，如吞噬、粘附 根据密度不同进行外周血单个核细胞分离 血小板：1.030-1.035 淋巴细胞和单核细胞：1.075-1.090 粒细胞：1.092 红细胞：1.093 Ficoll分离液法 Ficoll是商品名：聚蔗糖-泛影葡胺

3、是一种单次差速密度梯度离心方法 1.2 淋巴细胞的分离 去除单个核细胞 贴壁粘附法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll法（聚乙烯吡咯烷酮） 1.3 T细胞和B细胞的分离 E花环沉淀的方法 T细胞亚群的分离 根据相应细胞表面标志不同进行分离纯化 免疫磁珠分离方法 流式细胞术分离方法 2. 淋巴细胞功能检测 T细胞功能检测 B细胞功能检测 NK细胞功能检测 吞噬细胞功能检测 2.1 T细胞功能检测 T细胞增殖试验 形态发生改变 化学物质发生改变（细胞因子、表面标志） 生物学功能发生改变（细胞毒性） 体内试验（IV型超敏反应：单个核细胞浸润，结节 ） 2.2 B细胞功能检测 B细胞增殖试验 溶

4、血空斑试验（B细胞活化能力，产生抗体 能力） 酶联免疫吸附试验（细胞因子等） 体内试验（接种免疫） 2.3 NK细胞活性测定 形态学法（NK与小鼠脾细胞混合培养，观察 死细胞数量） 酶释放法（LDH） 放射性核素（放射性核素标记靶细胞，靶细胞 死亡越多，上清中放射性越强） 化学发光的方法（活性氧自由基，与细胞内某 些物质发生反应，产生微弱的光） 2.4 吞噬细胞功能检测 中性粒细胞 趋化功能检测 吞噬和杀伤功能检测 巨噬细胞功能检测 碳粒廓清试验 吞噬功能检测 巨噬细胞溶酶体酶的测定 细胞毒作用 巨噬细胞促凝血活性测定 复习题 外周血单个核细胞的分离要点 T、B淋巴细胞功能检测的方法有哪些，其 要点是什么