选修一专题二-微生物的培养与应用课件.ppt

1、考纲要求：考纲要求：1 1、微生物的分离和培养、微生物的分离和培养2 2、某种微生物数量的测定、某种微生物数量的测定3 3、培养基对微生物的选择作用、培养基对微生物的选择作用专题专题2：微生物的培养与应用微生物的培养与应用 课题课题1 微生物的实验室培养微生物的实验室培养一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 按照微生物对按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其生生长繁殖长繁殖的营养基质的营养基质培养基。培养基。固体培养基固体培养基和和液体培养基液体培养基概念概念按用途分为按用途分为成分成分pHpH、特殊营养物质、氧气、特殊营养物质、氧气 种类种类

2、选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基有的有特殊要求：有的有特殊要求：碳源、氮源、碳源、氮源、水、无机盐水、无机盐例如，培养乳酸杆菌加例如，培养乳酸杆菌加维生素维生素，培养霉菌，培养霉菌PH酸酸性，性，细菌细菌中中性或微性或微碱碱性，培养厌氧微生物要性，培养厌氧微生物要无无氧。氧。按物理状态分按物理状态分（二）无菌技术（二）无菌技术1 1、无菌技术是围绕什么展开的？包括哪些方面？、无菌技术是围绕什么展开的？包括哪些方面？避免避免杂菌杂菌污染污染主要包括以下几个方面：主要包括以下几个方面：(1)(1)空间、衣着、手，空间、衣着、手，清洁清洁和和消毒消毒。(2)(2)器皿、接种用具和培养基等

3、器皿、接种用具和培养基等灭菌灭菌。(3)(3)实验操作在酒精灯实验操作在酒精灯火焰火焰附近进行。附近进行。(4)(4)避免避免已灭菌的材料用具与周围物品已灭菌的材料用具与周围物品接触接触。方法方法2 2、消毒和灭菌、消毒和灭菌用强烈的理化因素用强烈的理化因素杀死杀死物体内外物体内外所有所有的微生的微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。煮沸煮沸消毒法消毒法巴氏巴氏消毒法消毒法化学药剂化学药剂消毒法：消毒法：70%70%酒精、氯气、石酒精

4、、氯气、石炭酸炭酸、紫外线紫外线消毒消毒 煤酚皂煤酚皂消毒消毒概念概念灭菌灭菌方法方法概念概念灼烧灼烧灭菌灭菌干热干热灭菌：灭菌：160-170 1-2h。高压蒸汽高压蒸汽灭菌：灭菌：100kPa、121 15-30min避免操作者自身被微生物感染。避免操作者自身被微生物感染。（1 1）、（）、（2 2）需要）需要灭菌灭菌；（；（3 3）需要）需要消毒消毒。1、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来、无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来 微生物污染外，还有什么目的？微生物污染外，还有什么目的？2、请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如、请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭

5、菌。如 果需要，请选择合适的方法。果需要，请选择合适的方法。（1）培养基与培养皿培养基与培养皿 （2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3）实验操作者的双手实验操作者的双手高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌70%酒精酒精思考：思考：二、实验操作：二、实验操作：用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养。杆菌的纯化培养。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌：灭菌：培养基放入锥形瓶，塞上棉花塞，包上牛皮培养基放入锥形瓶，塞上棉花塞，包上牛皮纸，纸，高压蒸汽

6、灭菌锅高压蒸汽灭菌锅中灭菌中灭菌培养皿用培养皿用干热灭菌箱干热灭菌箱灭菌。灭菌。5.5.倒平板：倒平板：培养基冷却到培养基冷却到5050左右，在酒精灯附近倒左右，在酒精灯附近倒平板。（平板。（倒平板操作倒平板操作见课本）见课本）2d2d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。板，无杂菌污染才可用来接种。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌平板划线法平板划线法：微生物的接种微生物的接种方法：方法：稀释稀释 涂布平板法涂布平板法：用接种环在用接种环在固体固体培养基表面培养基表面连续连续划线，将聚集的菌种逐步划线，将聚集的菌种逐步稀释稀释分分散，分离到一个细胞繁殖的散，分离到一个细胞繁殖的一一个

7、个菌落。菌落。三、结果分析评价三、结果分析评价 若有菌落，说明被若有菌落，说明被污染污染，若无未被污染。，若无未被污染。可观察到。若相似，可观察到。若相似，符合符合要求；要求；不相似，不相似，不合不合要求。要求。应不同；培养应不同；培养24h24h，菌落，菌落大大、灰色、灰色深深，光泽度强。，光泽度强。由于培养时间由于培养时间长长。1 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落有菌落 生长生长说明了什么？说明了什么？2 2、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到独立的、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到独立的 菌落？这些菌落的颜色、大小、形状相

8、似么？菌落？这些菌落的颜色、大小、形状相似么？3 3、培养、培养12h12h和和24h24h，观察到的实验结果相同吗？如果不，观察到的实验结果相同吗？如果不 同，请分析产生差异的原因。同，请分析产生差异的原因。比较比较无土栽培无土栽培营养成分营养成分无菌条件无菌条件植物组织培养植物组织培养微生物培养微生物培养无机物和有机物无机物和有机物无机物无机物无机物和有机物无机物和有机物需要需要不需要不需要需要需要4 4、若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能、若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能 是什么？是什么？菌液菌液不纯不纯，或操作过程被，或操作过程被杂菌杂菌污染。污染。课题课题2 土壤中

9、分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课题背景课题背景 尿素尿素CO(NH2)2是一种重要的是一种重要的农业化肥农业化肥。但是尿素。但是尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。尿素最初是从人能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。尿素最初是从人的尿液中发现的，的尿液中发现的，1828年，德国化学家维勒通过无机年，德国化学家维勒通过无机物的化学反应合成了物的化学反应合成了尿素尿素这种有机物，此

10、后尿素的生产这种有机物，此后尿素的生产走向了工业化，尿素逐步成为农业生产中重要的氮肥。走向了工业化，尿素逐步成为农业生产中重要的氮肥。本课题以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到本课题以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到两个主要目的：两个主要目的：从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。O=CNH2NH2结构简式结构简式立体结构立体结构1 1、尿素能直接被植物吸收吗？、尿素能直接被植物吸收吗？不能不能。土中细菌将。土中细菌将尿素尿素分解成分解成氨氨才能才能2 2、土壤中的土

11、壤中的细菌为什么能利用尿素呢？细菌为什么能利用尿素呢？能合成能合成脲脲酶酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+CO+CO2 2NHNH3 3+H+H2 2O O3 3、本课题的目的是什么呢？、本课题的目的是什么呢？从土壤中从土壤中分离分离出能够分解尿素的细菌出能够分解尿素的细菌统计统计每克土壤中每克土壤中分解尿素分解尿素的细菌的数目的细菌的数目启示：寻找目的菌株，到相应的环境中去找。启示：寻找目的菌株，到相应的环境中去找。原因：热泉温度高，淘汰原因：热泉温度高，淘汰不耐热不耐热的，选出的，选出耐热耐热的的.筛选菌株筛选菌株2 2、实验室中微生物的筛选原理是什么？、实验室中微生物的筛选原

12、理是什么？1、为什么、为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来呢？这对细菌能从热泉中被筛选出来呢？这对 我们寻找目的菌株有何启示？我们寻找目的菌株有何启示？用用选择选择培养基培养基一、研究思路：一、研究思路：15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO447H7H2 2O O2.1g2.1gNaHNaH2 2POPO4 41.4g1.4gKHKH2 2POPO4 43.3.分析本课题培养基配方，回答下列问题：分析本课题培养基配方，回答下列问题：在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖葡

13、萄糖、尿素尿素 氮源：氮源：尿素尿素有。有。氮源只有氮源只有尿素尿素，只有能合成，只有能合成脲脲酶的微生物才能酶的微生物才能分解尿素得到氮源。分解尿素得到氮源。该该培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，是是 如何进行选择的？如何进行选择的？什么是选择培养基？什么是选择培养基？只允许只允许特定特定种类的微生物生长，同种类的微生物生长，同抑制抑制或或阻止阻止其它其它种类微生物生长的培养基。种类微生物生长的培养基。以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨接种接种实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型 土壤稀释液土壤稀释液 结果结果只生长

14、分解尿素的只生长分解尿素的细菌，菌落数少。细菌，菌落数少。生长多种微生物，生长多种微生物，菌落数多。菌落数多。接种接种怎样证明此培养基具有选择性呢？怎样证明此培养基具有选择性呢？活菌计数活菌计数法（常用：法（常用：稀释涂布平板稀释涂布平板法）法）显微镜直接计数显微镜直接计数法（法（抽样检测抽样检测法）法）稀释度足够高时，一个菌落，来源于稀释度足够高时，一个菌落，来源于一一个活菌。个活菌。菌落菌落数数=活菌活菌数数将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，选择菌落将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，选择菌落数数30300的平板计数的平板计数。1、测定样品中的微生物数量有哪些方法？、测定样品中的微生物数

15、量有哪些方法？2 2、稀释涂布平板法的原理是什么、稀释涂布平板法的原理是什么?3、为了确保结果准确，一般选择菌落数是多少的平板、为了确保结果准确，一般选择菌落数是多少的平板 计数？计数？.统计菌落数目：统计菌落数目：统计菌落数，最好统计统计菌落数，最好统计3个平板，计算平均值，按个平板，计算平均值，按课本公式计算。课本公式计算。4 4、如何从平板上的菌落数推测每克样品中的菌落数？、如何从平板上的菌落数推测每克样品中的菌落数？其中，其中，C C平均菌落数，平均菌落数，V V稀释液体积稀释液体积(ml)(ml)，M M代表稀代表稀释倍数。释倍数。每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M分析课

16、本案例：两位同学用稀释涂布平板法测定同分析课本案例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌的数。在对应稀释倍数为一土壤样品中的细菌的数。在对应稀释倍数为10106 6的培养基中，得到以下两种统计结果。的培养基中，得到以下两种统计结果。第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计菌第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计菌落数为落数为230230。第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计菌第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计菌落数分别为落数分别为2121、212212和和256256，该同学以这三个平板，该同学以这三个平板的平均数的平均数163163作为统计结果。作为统计结果。5 5、

17、你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为实验需你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为实验需要改进吗？如何改进？要改进吗？如何改进？第二位同学涂布了第二位同学涂布了3 3个平板，个平板，1 1个平板的计数结果个平板的计数结果与另与另2 2个相差太个相差太远远，说明操作过程中可能出现了错误。，说明操作过程中可能出现了错误。第第一一位同学更接近位同学更接近 第一位同学只涂布了第一位同学只涂布了一一个平板，没有设置重复个平板，没有设置重复组，结果不具有说服力。组，结果不具有说服力。改进：涂布至少改进：涂布至少3个平板。分析结果时，一定要个平板。分析结果时，一定要考虑所设置的考虑所设置的重复重复组的结

18、果是否一致，结果不一致，组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。意味着操作有误，需要重新实验。6、统计的菌落数与真实活菌数有何关系？为什么？、统计的菌落数与真实活菌数有何关系？为什么？统计的菌落数往往比活菌的实际数统计的菌落数往往比活菌的实际数低低。因为当。因为当两两个或个或多多个细胞连在一起时，平板上观察的只是一个菌落。个细胞连在一起时，平板上观察的只是一个菌落。1 1、什么是对照实验？设置对照的主要目的是什么？、什么是对照实验？设置对照的主要目的是什么？.设置对照：设置对照：对照实验是除对照实验是除被测试被测试条件外，其它条件都相同的实条件外，其它条件都相同的实验。目的

19、是排除验。目的是排除非测试非测试因素的影响，提高实验结果因素的影响，提高实验结果的可信度。的可信度。2 2、分析实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落、分析实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落 数目的实验时，数目的实验时，A A同学从对应的同学从对应的10106 6倍稀释的培养基倍稀释的培养基中中 筛选出大约筛选出大约150150个菌落，但是其他同学在同样的稀释个菌落，但是其他同学在同样的稀释 度下只选择出大约度下只选择出大约5050个菌落。分析其原因。个菌落。分析其原因。土样土样不同不同 培养基培养基污染污染或或操作操作失误失误 (或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质)

20、方案一：其他同学用与方案一：其他同学用与A A同学同学相同相同土样实验土样实验 方案二：将方案二：将A A同学配制的培养基在同学配制的培养基在不加不加土样的情况土样的情况下进行培养。下进行培养。结果预测：如果结果与结果预测：如果结果与A A同学一致，证明同学一致，证明A A无误无误；如果结果不同，证明如果结果不同，证明A A同学有操作同学有操作失误失误或培养基的或培养基的配制配制有问题。有问题。3 3、如何设置对照排除上述两个影响因素呢？、如何设置对照排除上述两个影响因素呢？结果预测：如果有菌落，被结果预测：如果有菌落，被杂菌杂菌污染；如没有菌落，污染；如没有菌落，则则无无污染。污染。样品的稀

21、释和稀释液的取样培养流程示意图样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图二、实验设计：二、实验设计：土壤中各类微生物的土壤中各类微生物的数量数量不同的不同的1、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释液？、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释液？稀释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6保证获得菌落数在保证获得菌落数在3030300300之间、适于之间、适于计数计数的平板的平板放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4分析教材回答：分析教材回答：2、培养不同的微生物时温度和时间一样吗？、培养不

22、同的微生物时温度和时间一样吗？不一样不一样3、菌落特征有哪些？、菌落特征有哪些？形状、形状、大小、隆起程度和颜色大小、隆起程度和颜色 2 2、制备培养基、制备培养基 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和选择培养基选择培养基 （牛肉膏蛋白胨培养基作对照）（牛肉膏蛋白胨培养基作对照）3、培养液的稀释：稀释倍数为、培养液的稀释：稀释倍数为103107根据流程图和三个资料设计详细实验方案：根据流程图和三个资料设计详细实验方案：6 6、细菌的计数、细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在 3030300300的平板进行计数。求出平均值，计算出样的平板进行计数。求出平均

23、值，计算出样 品中细菌的数目。品中细菌的数目。4 4、涂布平板涂布平板1、土壤取样、土壤取样 5、微生物的培养与观察、微生物的培养与观察 三、操作提示三、操作提示 1、本课题的无菌操作要注意哪些问题？、本课题的无菌操作要注意哪些问题？2、做好、做好标记标记取土工具取土工具灭菌灭菌。火焰旁火焰旁操作。操作。3、制定、制定计划计划如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，的平板，成功；如果菌落数相差较大，不成功。成功；如果菌落数相差较大，不成功。2、如何判断样品的稀释操作是否成功？、如何判断样品的稀释操作是否成功？1、如何分析培养物中是否有

24、杂菌污染及选择培养基是、如何分析培养物中是否有杂菌污染及选择培养基是 否筛选出一些菌落？否筛选出一些菌落？设置对照。设置对照。培养基培养基是否接种是否接种 预期结果预期结果对照对照1 1对照对照2 2选择培养基选择培养基牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨接种接种不接种不接种无菌落无菌落菌落明显多于实验组菌落明显多于实验组四、结果分析与评价四、结果分析与评价课题课题3 分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离3、纤维素在生物圈的分布状况？纤维素在生物圈的分布状况？4、纤维素酶的组成及作用？纤维素酶的组成及作用？含量最丰富的含量最丰富的多糖多糖类物质。棉花、木材、作物秸秆类物质。棉花、木材、作物秸秆

25、富含富含纤维素纤维素。是是复合酶复合酶，有三种组分，即，有三种组分，即C1酶、酶、CX酶酶和和葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。二糖分解成葡萄糖。1、纤维素是构成植物细胞什么结构的主要组成成分？纤维素是构成植物细胞什么结构的主要组成成分？2、土壤中的某些微生物为什么能分解植物产生的纤维素？土壤中的某些微生物为什么能分解植物产生的纤维素？细胞壁。葡萄糖。细胞壁。葡萄糖。产生纤维素酶。产生纤维素酶。一、基础知识一、基础知识（一）纤维素与纤维素酶（一）纤维素与纤维素酶纤维素的基本组成单位是什么？纤维素的

26、基本组成单位是什么？请你设计实验来证明纤维素酶的作用。请你设计实验来证明纤维素酶的作用。材料用具：滤纸条材料用具：滤纸条 、缓冲液、纤维素酶、缓冲液、纤维素酶实验步骤：实验步骤：(1)(1)取取2 2支支20mL20mL的试管的试管,分别放入分别放入1cm1cm6cm6cm的滤纸条的滤纸条 。(2)(2)再分别加入再分别加入pHpH为为4.84.8，物质的量浓度为，物质的量浓度为0.1 mol0.1 molL-1L-1 的的醋酸醋酸醋酸钠醋酸钠缓冲液缓冲液10mL10mL、11mL11mL。(3)(3)在加入在加入lOmLlOmL缓冲液的试管中加入缓冲液的试管中加入1mL1mL纤维素酶。纤维素

27、酶。(4)(4)将将2 2支试管固定在摇床上，振荡反应支试管固定在摇床上，振荡反应1 1。结果：。结果：加纤维素酶的滤纸条被分解，另一支中的未分解。加纤维素酶的滤纸条被分解，另一支中的未分解。则证明：则证明：纤维素纤维素酶有分解纤维素的作用酶有分解纤维素的作用 。1 1、筛选方法、筛选方法刚果红染色法刚果红染色法刚果红能与纤维素这样的多糖类物质形成刚果红能与纤维素这样的多糖类物质形成红色红色复合物，不与纤维二糖、葡萄糖发生复合物，不与纤维二糖、葡萄糖发生此反应。纤维素被酶分解，复合物就无法此反应。纤维素被酶分解，复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为形成，培养基中会出现以纤维素分解菌

28、为中心的中心的透明圈透明圈 。通过是否产生。通过是否产生透明圈透明圈来来筛选纤维素分解菌。筛选纤维素分解菌。（二）纤维素分解菌的筛选（二）纤维素分解菌的筛选原理：原理：2 2、用刚果红染色法筛选纤维素分解菌常用的两种用刚果红染色法筛选纤维素分解菌常用的两种 方法是什么？各有哪些优点与不足？方法是什么？各有哪些优点与不足？优点优点缺点缺点方方法法一一颜色反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用操作操作繁琐繁琐；加入刚果红会使菌落；加入刚果红会使菌落之间发生混杂之间发生混杂方方法法二二操作简便；操作简便；不存在菌落混不存在菌落混杂问题杂问题产生淀粉酶的微生物也产生产生淀粉酶

29、的微生物也产生模糊模糊透明圈，透明圈，有些微生物能降解色素，形成有些微生物能降解色素，形成明明显显的透明圈。的透明圈。一是先培养微生物，再加入刚果红，一是在倒平板一是先培养微生物，再加入刚果红，一是在倒平板时就加入刚果红。时就加入刚果红。二、实验设计二、实验设计土壤取样土壤取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释挑选产生挑选产生透透明圈明圈的菌落的菌落将样品涂布到将样品涂布到鉴别鉴别纤维素分解菌的培纤维素分解菌的培养基上养基上思考与讨论：思考与讨论：1、本实验流程与课题、本实验流程与课题2中的实验流程有什么异同？中的实验流程有什么异同？多了多了选择选择培养。其他步骤基本一致。培养。其他步骤基本一致

30、。纤维素分解菌的含量纤维素分解菌的含量高高2、为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？、为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？3、将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋入、将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋入 土壤多深？土壤多深？使纤维素分解菌相对聚集。使纤维素分解菌相对聚集。10cm左右左右4 4、选择培养的目的是什么？、选择培养的目的是什么？增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度5、区别选择培养基和鉴别培养基、区别选择培养基和鉴别培养基三、结果分析与评价三、结果分析与评价：1、你选了哪种实验样品来分离纤维素分解菌？取样的、你选了哪种实验样品来分离纤维素分解菌

31、？取样的 环境有哪些特点？做出这种选择的理由是什么？环境有哪些特点？做出这种选择的理由是什么？在富含腐殖质的土中取样，环境在富含腐殖质的土中取样，环境潮湿潮湿、枯枝落叶多，、枯枝落叶多，分解分解纤维素纤维素菌的数量多。菌的数量多。2、如果你的分离结果和其他同学的不同，分析产生不、如果你的分离结果和其他同学的不同，分析产生不 同结果的可能原因。同结果的可能原因。分解纤维素的微生物有很多，有分解纤维素的微生物有很多，有真菌真菌、放线菌放线菌及及细菌细菌。课题延伸：课题延伸：进行进行发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶的实验。的实验。测定方法：一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后测定方法：一般是对纤维素酶分解

32、滤纸等纤维素后 产生的产生的葡萄糖葡萄糖进行定量测定。进行定量测定。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行什么实验？为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行什么实验？用什么方法测定纤维素酶？用什么方法测定纤维素酶？倒平板：倒平板：用手触摸锥形瓶，刚刚用手触摸锥形瓶，刚刚不烫手不烫手时时2 2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？防止瓶口的防止瓶口的微生物微生物污染污染1 1、培养基灭菌后，需要冷却到、培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用左右时，才能用 来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？3 3、平板冷

33、凝后，为什么要将平板倒置？、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？使使水分水分更好挥发，防止皿盖上的更好挥发，防止皿盖上的水珠水珠落入培养基。落入培养基。4 4、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖 与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物 吗？为什么？吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不用。上滋生，最好不用。平板划线法平板划线法讨论讨论第一步第一步1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧、为什么在操作的第一步以及每次

34、划线之前都要灼烧 接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环 吗？为什么？吗？为什么？杀死残留的杀死残留的菌种菌种，避免污染环境和感染操作者。，避免污染环境和感染操作者。接种环上有接种环上有微生物微生物杀死上次划线结束残留的杀死上次划线结束残留的菌种菌种结束时结束时问题讨论：问题讨论：每次划线前每次划线前2 2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免温度太高，杀死菌种。以免温度太高，杀死菌种。3 3、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么

35、总是从上 一次划线的末端开始划线？一次划线的末端开始划线？使菌数随划线次数的增加而使菌数随划线次数的增加而减少减少，得到，得到单个单个细菌繁殖细菌繁殖而来的菌落。而来的菌落。各细节保证各细节保证“无菌无菌”。如，酒精灯与培养皿的。如，酒精灯与培养皿的距离距离要要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。灯火焰周围等等。4、涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板、涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板 划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应步应 如何进行无菌操作？如何进行无菌操作？