蔡奕彪创新答辩-中山大学化学学院课件.ppt

1、固体发酵培养南海红树林内生固体发酵培养南海红树林内生真菌真菌1403#次级代谢产物研究次级代谢产物研究答辩人：答辩人：蔡奕彪蔡奕彪 导导 师：师：蔡小玲蔡小玲 讲师讲师中山大学创新论文答辩中山大学创新论文答辩 蔡奕彪蔡奕彪2009年年6月月5日日 原创性声明原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对其他个人或集体已经发表或撰写过

2、的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。结果由本人承担。主要内容主要内容一、一、研究意义研究意义二、二、实验方法及创新之处实验方法及创新之处三三、结果与讨论结果与讨论 四、四、总结总结 开发新药开发新药陆地陆地海洋海洋海洋生物海洋生物红树红树林内林内生生真菌真菌1、海洋红树林内生真菌次级代谢产物化学、海洋红树林内生真菌次级代谢产物化学结构新颖、种类繁多，是天然药物先导结构新颖、种类繁多，是天然药物先导化合物的重要来源。化合物的重要

3、来源。2、近年来，从海洋真菌中分离鉴定了许多、近年来，从海洋真菌中分离鉴定了许多结构新颖的次级代谢产物，这些化合物结构新颖的次级代谢产物，这些化合物显示了良好的抗肿瘤、抗细菌或抗真菌显示了良好的抗肿瘤、抗细菌或抗真菌等生物活性，为新药的开发和各种疑难等生物活性，为新药的开发和各种疑难疾病的治愈提供了新的希望。疾病的治愈提供了新的希望。一、研究意义一、研究意义3、在固体发酵中，菌体可以更高效地利用、在固体发酵中，菌体可以更高效地利用培养基中的营养物质，促进次级代谢产物的培养基中的营养物质，促进次级代谢产物的产生产生。4、固体发酵还有含水量少，废水、废渣少，、固体发酵还有含水量少，废水、废渣少，环

4、境污染少等优点。环境污染少等优点。1、实验方法（固体培养）、实验方法（固体培养）第一步：菌种和菌种的固体培养。第一步：菌种和菌种的固体培养。采用了固体营养基，对采用了固体营养基，对1403#内生真菌进内生真菌进行固体发酵，使用行固体发酵，使用PDA固体培养基（固体培养基（10 g蛋白胨、蛋白胨、5 g酵母膏、酵母膏、10 gNaCl、1.5%的琼脂，加的琼脂，加dH2O溶解后，调溶解后，调pH至至7.4，H2O定容至定容至1 L，115，20 min高压高压灭菌），接种于平板上的固体培养基中，灭菌），接种于平板上的固体培养基中，在温度设置在在温度设置在26培养箱中培养培养箱中培养25天。天。2

5、、创新之处：、创新之处：二、二、实验方法及创新之处实验方法及创新之处第二步：提取和分离第二步：提取和分离 。近近4升的固体培养基培养升的固体培养基培养30天后，将固体培养基切碎，天后，将固体培养基切碎，并用甲醇（并用甲醇（MO）浸泡一周后，用纱布过滤，分离固）浸泡一周后，用纱布过滤，分离固体培养基和菌液，此过程重复体培养基和菌液，此过程重复3次，培养基晒干，菌次，培养基晒干，菌液浓缩，再用乙酸乙酯（液浓缩，再用乙酸乙酯（EA）萃取，）萃取，EA提取物用适提取物用适量的量的 200-300 目硅胶拌样，上柱粗分。分别用目硅胶拌样，上柱粗分。分别用 5%，10%，20%，30%，50%，80%，1

6、00%的的EAPE（石油醚）淋洗，收集各组分再经反复柱层析，制备（石油醚）淋洗，收集各组分再经反复柱层析，制备薄层层析，重结晶纯化。固体培养基晒干后，用薄层层析，重结晶纯化。固体培养基晒干后，用MO反复浸泡。提取物浓缩后合并，再拌硅胶过大柱，以反复浸泡。提取物浓缩后合并，再拌硅胶过大柱，以EAPE梯度淋洗。收集各组分再经反复柱层析，制备梯度淋洗。收集各组分再经反复柱层析，制备薄层层析，重结晶纯化。薄层层析，重结晶纯化。2、本实验创新之处、本实验创新之处-固体培养固体培养A、固体发酵中，菌体可以更高效地利用、固体发酵中，菌体可以更高效地利用培养基中的营养物质，促进次级代谢产培养基中的营养物质，促

7、进次级代谢产物的产生物的产生 B、固体发酵含水量少，废水、废渣少，、固体发酵含水量少，废水、废渣少，环境污染少等优点。环境污染少等优点。C、固体发酵更好的模拟了其生活环境，且、固体发酵更好的模拟了其生活环境，且当菌株附着与固体基质上生长时，供氧丰富，当菌株附着与固体基质上生长时，供氧丰富，生长密度大，生存竞争更为激烈，因此产生生长密度大，生存竞争更为激烈，因此产生的次级代谢产物的量也会提高的次级代谢产物的量也会提高 1、此次固体培养、此次固体培养1403#内生真菌，经过分内生真菌，经过分离纯化得到离纯化得到5个化合物，尚未得到新化合个化合物，尚未得到新化合物，目前分离仍在进行中，下面是所分物，

8、目前分离仍在进行中，下面是所分离得到的化合物。离得到的化合物。A、灰黄霉素、灰黄霉素 B、去氯灰黄霉素、去氯灰黄霉素 三、结果与讨论三、结果与讨论 C、1,4-二羟基二羟基-7-甲基甲基-9,10-蒽醌蒽醌 D、大黄酚、大黄酚 E、化合物、化合物1-hydroxy-3-methylanthracene-9,10-dione(3-8)2、讨论、讨论 由于海洋环境具有低温、高压、高盐、少光照、贫营养等特点，所以海洋微生物有着自己独特的代谢方式，从而产生结构新颖、活性显著的代谢产物。本文是对对南海红树林内生真菌1403#进行了固体培养，得到一系列的醌类类化合物。由于只培养量较少（4升），相对于液体培

9、养，产量还是较丰富，但尚未得到新化合物，目前分离仍在进行中。总结总结1.初步介绍了来自中国南海红树林内生真菌初步介绍了来自中国南海红树林内生真菌1403#的次级的次级代谢产物。代谢产物。2.采用固体培养这种比较新颖的方法发现了五种化合物。采用固体培养这种比较新颖的方法发现了五种化合物。3.固体发酵对产量有极大的影响固体发酵对产量有极大的影响，下一步的工作还有就，下一步的工作还有就是更换种子培养基以及发酵培养基，对真菌的发酵条是更换种子培养基以及发酵培养基，对真菌的发酵条件进行优化，并件进行优化，并对固液发酵的影响因素进行探讨，对固液发酵的影响因素进行探讨，以以得到更丰富的代谢产物。得到更丰富的代谢产物。