聚合酶链反应1.ppt

聚合酶链反应,PCR,目的,掌握聚合酶链反应的原理和方法,原理,PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR反应分3步: 变性:通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA， 退火：当温度突然降低时，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链， 延伸：在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸底物及Mg 2+存在的条件下，53的聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应， 以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下个循环的模板；数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达2106-7拷贝。,实验步骤,一、PCR反应体系,Tag酶：放在写着“T”字小管，每管内装10l 模板：放在写着“模”字小管 加最后一个试剂时多吹吸几次混匀,二、PCR反应循环设置,94 4min 94 30sec 55 30sec 25cycles 72 30sec 72 5min,三、电泳鉴定,Marker: 10l DNA Marker 样品: 4l上样缓冲液 + 扩增后DNA样品混匀 上样量均为10l 电泳电压:110-120V，约40分钟 DNA Marker为D2000,实验结果观察,本次实验模板在400-500bp位置,项目 日期室温,一、目的 二、原理 三、实验步骤 四、实验结果 画PCR电泳示意图,