高考生物一轮复习-专题2-微生物的培养与应用课件-新人教版选修.ppt

1、专题专题2微生物的培养与应用微生物的培养与应用读读教材基础一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1培养基培养基(1)概念：人们按照微生物对概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出的不同需求，配制出供其生长繁殖的供其生长繁殖的_。2无菌技术无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。方法。(2)关键：关键：_。(3)措施措施条件条件结果结果常用的方法常用的方法消消毒毒较为温和较为温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部一部分对或内部一部分对人体有害的微生人体有害的微生物物(不包括芽孢和不

2、包括芽孢和孢子孢子)_消毒消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化法、紫外线或化学药剂消毒法学药剂消毒法灭灭菌菌强烈的理强烈的理化因素化因素杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子_灭菌、灭菌、干热灭菌、干热灭菌、_灭菌灭菌3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏纯化大肠杆菌以及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：计算制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：计算称量称量溶溶化化_。(2)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌原理：在培养基上将细菌稀释或分散成原理：在培养基上将细菌稀释或分散成_，使其，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。长成单个的菌落，

3、这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法：方法：_、_。(3)菌种的保藏菌种的保藏短期保存：短期保存：_上上4保存，菌种易被污染或产生保存，菌种易被污染或产生变异。变异。长期保存：长期保存：_中中20在冷冻箱中保藏。在冷冻箱中保藏。为什么在倒平板时，等平板冷却后要将平板倒置？为什么在倒平板时，等平板冷却后要将平板倒置？二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1菌种筛选：菌种筛选：使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。2统计菌落数目：统计菌落数目：常用方法有常用方法有_、显微镜直接计、显微镜直接计数法。数法。3细菌分离与计数的实验流程

4、：细菌分离与计数的实验流程：土壤取样土壤取样配制配制_微生物的培养与观察微生物的培养与观察细菌的计数。细菌的计数。三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复合酶，它包括组成：纤维素酶是一种复合酶，它包括_。(2)作用作用2菌种筛选菌种筛选(1)方法：方法：_。(2)原理原理3筛选流程筛选流程土壤取样：富含土壤取样：富含_的环境的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量梯度稀释梯度稀释涂布平板：将样品涂布于含涂布平板：将样品涂布于含CR的鉴别纤维素分解菌的培养基上的鉴别

5、纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落：产生挑选产生透明圈的菌落：产生_的菌落周围出现透明圈的菌落周围出现透明圈一、一、1.(1)营养物质营养物质 营养基质营养基质 (3)固体培养基固体培养基 2.(2)防止外防止外来杂菌的入侵来杂菌的入侵 (3)煮沸灼烧高压蒸汽煮沸灼烧高压蒸汽3.(1)灭菌倒平板灭菌倒平板(2)单个细胞单个细胞 平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 (3)固体斜面固体斜面培养基培养基 甘油瓶甘油瓶二、二、2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 3.培养基培养基三、三、1.(1)C1酶、酶、CX酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶 2.(1)刚果红染色法刚果红染色法 (2

6、)是否产生透明圈是否产生透明圈 3.纤维素纤维素 纤维素酶纤维素酶想一想想一想提示：将平板倒置的目的是防止培养皿盖上的提示：将平板倒置的目的是防止培养皿盖上的水珠滴落到平板上造成污染。水珠滴落到平板上造成污染。1教材第教材第17页倒平板操作的讨论页倒平板操作的讨论(1)培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。降到刚刚不烫手时，就可以进行

7、倒平板了。(2)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖

8、与皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。因此最好不要用这个平板培养微生物。2教材第教材第18页平板划线操作的讨论页平板划线操作的讨论(1)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步

9、灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细结束后灼烧接种环，能及时杀死接

10、种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。菌污染环境和感染操作者。(2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。(3)在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，

11、最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3教材第教材第22页两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤页两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数样品中的细菌数，在对应稀释倍数106的培养基中，得到以下两的培养基中，得到以下两种统计结果：种统计结果：1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为的菌落数为230；2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板统计第二位同学在该浓度下涂布了三个平板统计的菌落数分别为的菌落数分别为20、200、239，并且取平均值，并且取平均值153作为统计结作为

12、统计结果。果。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另个平板的计数结果与另2个相差太个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。个平板的计数值用来求平均值。研研核心要点 1培养基的成分培养基的成分(1)碳源碳源含义：能提供碳元素的物质。含义：能提供碳元素的物质。作用

13、：构成生物体的物质，异养生物的能源物质。作用：构成生物体的物质，异养生物的能源物质。主要来源主要来源无机物：无机物：CO2、NaHCO3。有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等。有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等。(2)氮源氮源含义：能提供氮元素的物质。含义：能提供氮元素的物质。作用：合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物。作用：合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物。主要来源主要来源无机物：无机物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐。、铵盐、硝酸盐。有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等。有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等。(3)生长因子生长因子含义：生长不可少的微量有机物。含义：生长不可少的微量有机物。作用：酶和核酸

14、的成分。作用：酶和核酸的成分。主要包括：维生素、氨基酸、碱基等。主要包括：维生素、氨基酸、碱基等。(4)水水含量：在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更含量：在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高。高。作用：不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构作用：不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定。的稳定。主要来源：培养基、大气、代谢产物等。主要来源：培养基、大气、代谢产物等。(5)无机盐无机盐含义：为微生物提供除含义：为微生物提供除C、H、O以外的各种重要元素，以外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素。包括大量元素和微量元素。作用：细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自作用

15、：细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养菌的能源、酶的激活剂。养菌的能源、酶的激活剂。主要来源：培养基、大气等。主要来源：培养基、大气等。2常见的消毒和灭菌方法常见的消毒和灭菌方法内容内容种类种类主要方法主要方法应用范围应用范围灭菌灭菌灼烧灭灼烧灭菌法菌法酒精灯火焰灼烧酒精灯火焰灼烧微生物接种工具，如接种环、接种针或其微生物接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具等，接种过程中试管口或瓶口他金属用具等，接种过程中试管口或瓶口等等干热灭干热灭菌法菌法干热灭菌箱干热灭菌箱160170加热加热1 h2 h玻璃器皿玻璃器皿(如吸管、培养皿等如吸管、培养皿等)、金属用具、金属用具等凡不适合用其他方

16、法灭菌而又能耐高温等凡不适合用其他方法灭菌而又能耐高温的物品的物品高压蒸汽高压蒸汽灭菌法灭菌法121维持维持15 min30 min培养基及多种器材、物品培养基及多种器材、物品消毒消毒巴氏消巴氏消毒法毒法7075煮煮30 min或或80煮煮15 min牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体灭菌的液体煮沸消煮沸消毒法毒法100煮沸煮沸5 min6 min日常食品、罐装食品日常食品、罐装食品紫外线紫外线消毒法消毒法紫外线照射紫外线照射30 min接种室、接种箱等接种室、接种箱等化学药化学药物消毒法物消毒法用体积分数为用体积分数为70%75%的酒精、碘酒涂

17、抹，来苏的酒精、碘酒涂抹，来苏水喷洒等水喷洒等用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒、用于皮肤、伤口、动植物组织表面消毒、手术器械、塑料或玻璃器皿等手术器械、塑料或玻璃器皿等自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同(1)自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。类型。(2)含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，

18、也能作含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也既作为硝化细菌的氮源也作为能源。作为能源。师说师说一语破天机一语破天机该考点在高考中主要考查微生物的消毒和灭菌，在该考点在高考中主要考查微生物的消毒和灭菌，在2011年年全国课标卷中做了重点考查，预计在全国课标卷中做了重点考查，预计在2014年高考中还有可能考年高考中还有可能考查。查。选题选题典型中选秀典型中选秀例例1：2011新课标全国卷新课标全国卷有些细菌可分解原油，从而消有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选除由原油泄漏造

19、成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即种，即_和和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力小，分解圈大说明该菌株的降解能力

20、_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、方法有灼烧灭菌、_和和_。无菌技术要求实验操。无菌技术要求实验操作应在酒精灯作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。污染。破题破题分层揭秘密分层揭秘密(一一)明确解题思路明确解题思路实验目的是为了筛选出可以分解原油的高效菌株，因此在实验目的是为了筛选出可以分解原油的高效菌株，因此在筛选的时候选择培养基的碳源为原油。纯化分离微生物的方法筛选的时候选择培养基的碳源为原油。纯化分离微生物的方法有两种：平板划线法和稀释涂布平板法；灭菌

21、的方法有灼烧灭有两种：平板划线法和稀释涂布平板法；灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。(二二)调动和运用知识解题调动和运用知识解题(1)原油选择原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法平板划线法稀释涂布平板法(3)强强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰(三三)同类互动探究同类互动探究(1)若在该培养基中加入青霉素，能更好地起到筛选作用若在该培养基中加入青霉素，能更好地起到筛选作用吗？吗？提示：提示：不能。不能。分析：分析：青霉素培养基往往是真菌选择培养基，在加青霉素青霉素培养基往往是真菌选择培养基，在加青霉素的培养基中，细菌生长被抑制，因

22、而不能筛选出能高效降解原的培养基中，细菌生长被抑制，因而不能筛选出能高效降解原油的菌株油的菌株(细菌细菌)。(2)细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌？菌？提示：提示：培养基、手、接种环。培养基、手、接种环。分析：分析：高压蒸汽灭菌的设备，通常用于培养基的灭菌。用高压蒸汽灭菌的设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微

23、生物的接种工具，如接种环。灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。1.原理：原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。2微生物接种方法微生物接种方法(1)平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐

24、减少，最后可能形成纯种的单个菌落。少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图如下图)(2)稀释涂布平板法稀释涂布平板法10倍系列稀释操作倍系列稀释操作将分别盛有将分别盛有9 mL水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按101106的顺的顺序编号。序编号。用移液管吸取用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入101倍稀释的试管倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充次，使菌液与水充分混匀。分混匀。从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入稀释液，注入102倍稀释倍稀释的试管中，重复的试管中，重复步混匀

25、操作。依次类推，直到完成最后步混匀操作。依次类推，直到完成最后1支支试管的稀释。试管的稀释。平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同的不同(1)第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。(2)每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。(3)划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。污染环境和感染操作者

26、。师说师说一语破天机一语破天机本考点内容常以环境污染为背景考查微生物的生存条件及本考点内容常以环境污染为背景考查微生物的生存条件及分离、纯化和培养条件等，复习中引起关注。分离、纯化和培养条件等，复习中引起关注。选题选题典型中选秀典型中选秀例例2：从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集菌样菌样富集培养富集培养纯种分离纯种分离性能测定。性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化、是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯

27、化、培养噬盐菌的菌样应从培养噬盐菌的菌样应从_环境中采集。环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_的培养基，并在的培养基，并在_条件下培养。条件下培养。(3)接种前要对培养基进行接种前要对培养基进行_处理。在整个微生物的处理。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在分离和培养中，一定要注意在_条件下进行。条件下进行

28、。(4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。的效果图，请分析接种的具体方法。获得图获得图A效果的接种方法是效果的接种方法是_，图，图B效果的接种方效果的接种方法是法是_。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是的菌落连成一片，最可能的原因是_，应当怎，应当怎样操作才可避免此种现象？样操作才可避免此种现象？_。(5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是_，应该保持，应该保持_等不变等不变

29、(至少答两项至少答两项)。破题破题分层揭秘密分层揭秘密(一一)明确解题思路明确解题思路(1)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找，筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找，故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。(2)富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、繁殖。繁殖。(3)微生物的分离及培养中必须保证无菌，包括培养基的灭微生物的分离及培养中必须保证无菌，包括培养基的灭菌和操作过程的灭菌等。菌和操作过程的灭菌等。(4)纯化培养中接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，纯化培养中接种方法有平板划线法和稀

30、释涂布平板法，前一种方法形成的菌落分布较均匀，后一种方法形成的菌落分前一种方法形成的菌落分布较均匀，后一种方法形成的菌落分布不均匀，先划线的部分菌落密集甚至相连，后划线的部分菌布不均匀，先划线的部分菌落密集甚至相连，后划线的部分菌落分布稀疏。落分布稀疏。(5)探究温度对酶活性的影响时，温度为自变量，酶活性为探究温度对酶活性的影响时，温度为自变量，酶活性为因变量，其他变量如底物和酶的用量、因变量，其他变量如底物和酶的用量、pH、反应时间等均为无、反应时间等均为无关变量。关变量。(二二)调动和运用知识解题调动和运用知识解题(1)海滩等高盐海滩等高盐(2)以淀粉为唯一碳源高温以淀粉为唯一碳源高温(3

31、)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 无菌无菌(4)稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法 菌液浓度过高菌液浓度过高 增大稀释增大稀释倍数倍数(或培养过程被杂菌污染或培养过程被杂菌污染 严格无菌操作；或用接种环划下严格无菌操作；或用接种环划下一区域前接种环没有灭菌一区域前接种环没有灭菌 每划一个新区域前都要对接种环进每划一个新区域前都要对接种环进行灭菌处理行灭菌处理)(原因与操作要对应原因与操作要对应)(5)温度温度 纤维素的量与浓度、反应时间、纤维素的量与浓度、反应时间、pH(三三)同类变式训练同类变式训练如图表示平板划线法分离纯化细菌示意图。根据所学生物如图表示平板划线法分离纯化细菌示意

32、图。根据所学生物学知识，完成下列问题。学知识，完成下列问题。(1)微生物所需的营养成分一般包括微生物所需的营养成分一般包括_、_、水和无机盐。水和无机盐。(2)培养微生物时，除考虑微生物生长所需的营养外，还要培养微生物时，除考虑微生物生长所需的营养外，还要考虑微生物生长所需的温度、考虑微生物生长所需的温度、_以及是否需要以及是否需要O2等。等。(3)对培养基进行灭菌时，多采用对培养基进行灭菌时，多采用_法，而对接种环法，而对接种环或涂布器灭菌时则用或涂布器灭菌时则用_法。法。(4)平板划线时，为保证每次划线都从上次划线末端的微生平板划线时，为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始，所以每

33、次划线前都要物浓度开始，所以每次划线前都要_，平板划线结束，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线后，最后一次划的线不能与第一次划的线_。(5)脲酶可以将尿素分解为脲酶可以将尿素分解为NH3，从而使尿素溶液，从而使尿素溶液pH升高，升高，这可用这可用_试剂来检验。用纤维素作唯一碳源的培养基培试剂来检验。用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物，得到的纤维素分解菌中可能还混有养微生物，得到的纤维素分解菌中可能还混有_。答案：答案：(1)碳源氮源碳源氮源(2)pH(3)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灭菌(4)对接种环灼烧灭菌相交对接种环灼烧灭菌相交(相接、相连、交叉等相接、相连、交叉等

34、)(5)酚红自养微生物酚红自养微生物(硝化细菌硝化细菌)解析：解析：(1)(2)培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源等培养基中一般含有水、无机盐、碳源、氮源等物质；培养基中除含有营养物质外还需提供适宜的温度、物质；培养基中除含有营养物质外还需提供适宜的温度、pH、O2等。等。(3)培养基常采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿常采用干热灭培养基常采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿常采用干热灭菌，接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。菌，接种环等金属器具常采用灼烧灭菌。(4)考查平板划线法的考查平板划线法的操作方法，如果划线相重合则不能分离出纯种。操作方法，如果划线相重合则不能分离出纯种。(5)酚红可检验酚红可检验碱性

35、溶液，用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物，得到纤碱性溶液，用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物，得到纤维素分解菌，但自养微生物可以利用空气中的维素分解菌，但自养微生物可以利用空气中的CO2作为碳源，作为碳源，也能生存，需要进一步分离。也能生存，需要进一步分离。1筛选菌株筛选菌株(1)原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。阻止其他微生物的生长。(2)菌株筛选原理的比较菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌 分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物选择培养基的成分：选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源

36、尿素作为唯一的氮源鉴定方法：在培养基中鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指加入酚红指示剂，若指示剂变红，示剂变红，pH升高，说升高，说明细菌能分解尿素明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源素作为唯一的碳源鉴定方鉴定方法：刚果红染色法，即刚果法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈中心的透明圈2.统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜原理

37、：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株

38、数(CV)M，其中，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板代表涂布平板时所用的稀释液的体积时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计的平板进行计数。数。选择培养基的选择方法选择培养基的选择方法(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得

39、到金可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。上加入。(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出消除离出固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出消除石油污染的微生物。石油污染的微生物。(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。环境下培养，可以得到耐高温的微生物。师说师说一语破天机一语破天机本部分

40、知识常与前面两考点综合在一起考查，单科试卷中本部分知识常与前面两考点综合在一起考查，单科试卷中多有涉及，理综考试中多以填空形式出现。多有涉及，理综考试中多以填空形式出现。选题选题典型中选秀典型中选秀例例3：下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：实验，完成下列问题：实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方养。在这

41、种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有培养基、盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有菌培养皿、盛有90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。无菌水的锥形瓶、恒温箱。(1)方法步骤：方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在板，应在_操作。操作。制备土壤稀释液：取土样制备土壤稀释液：取

42、土样10 g加入盛有加入盛有90 mL无菌水的无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至盛有，转至盛有9 mL的无菌水的试管中，依次稀释到的无菌水的试管中，依次稀释到107稀释度。稀释度。涂布：按照由涂布：按照由107103稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个。个。培养：放入恒温箱内，在培养：放入恒温箱内，在2830下培养下培养3 d4 d。细菌的计数：当菌落

43、数目稳定时，选取菌落数在细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。如果测定的平均值为的平板进行计数。如果测定的平均值为50，则每克样，则每克样品中的菌落数是品中的菌落数是_。(稀释度是稀释度是105)(2)预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数落数_ (填填“多于多于”或或“少于少于”)无氮培养基上的数无氮培养基上的数目。原因是目。原因是_。破题破题分层揭秘密分层揭秘密(一一)明确解题思路明确解题思路在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌污染。为了保证结在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌污染。为了保证结果准确，一般设置

44、果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在个平板，选择菌落数在30300的平板的平板进 行 计 数，并 取 平 均 值，则 每 克 样 品 中 的 菌 落 数 为进 行 计 数，并 取 平 均 值，则 每 克 样 品 中 的 菌 落 数 为(500.1)1055107。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多。所以，它比无氮培养基上的菌落数目多。(二二)调动和运用知识解题调动和运用知识解题(1)酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁 3 1 3

45、0300 5107(2)多于多于 无无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，而牛肉膏蛋白氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存(三三)同类互动探究同类互动探究(1)据上题可知，在稀释涂布平板法中，为何需涂布三个平据上题可知，在稀释涂布平板法中，为何需涂布三个平板？板？提示：提示：对照作用、减少实验误差等。对照作用、减少实验误差等。分析：分析：一是作为对照实验，判断实验操作的准确性；二是一是作为对照实验，判断实验操作的准确性；二是作为重复实验，统计时取平均值，以减少实验误差。作为重复实验，统计时取平均值，

46、以减少实验误差。(2)用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比如何？实际值相比如何？提示：提示：比实际值低。比实际值低。分析：分析：培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。体繁殖而来，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。随堂对点练习1.2012北京理综，北京理综，5高中生物学实验中，在接种时不进高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁

47、中将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案：答案：C解析：解析：考查微生物的培养和应用，实验分析能力。将转基考查微生物的培养和应用，实验分析能力。将转基因植物叶片接种到无菌培养基上，是进行植物组织培养，必需因植物叶片接种到无菌培养基上，是进行植物组织培养，必需严格的无菌操作，否则会失败。严格的无菌操作，否则会失败。2.饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，饲养动物常用的植物饲料

48、中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，并且影响对其他营养物质的利用。若在很难被动物吸收利用，并且影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以被动物吸收利用饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以被动物吸收利用的磷酸盐等。如图是科研人员从作物根部土壤中分离产生植酸的磷酸盐等。如图是科研人员从作物根部土壤中分离产生植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答：酶的菌株的过程示意图。请分析作答：(1)培养基中除了添加植酸钙以外，应含有培养基中除了添加植酸钙以外，应含有_、_、水、无机盐等基本营养物质。、水、无机盐等基本营养物质。(2)为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行

49、为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行_，其中，培养基的制备过程中灭菌之前要进行，其中，培养基的制备过程中灭菌之前要进行_。(3)接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成_。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的计平板上的_就能大致推测出样品中的活菌数。就能大致推测出样品中的活菌数。(4)由于植酸钙不溶解，使培养基形成白色浑浊状态。产生由于植酸钙不溶解，使培养基形成白色浑浊状态。产生植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形

50、成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产生植酸酶。实验根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产生植酸酶。实验结果显示结果显示AE五种菌株中，五种菌株中，_是产生植酸酶的理想菌是产生植酸酶的理想菌株。株。(5)获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行_。答案：答案：(1)碳源氮源碳源氮源(2)(高压蒸汽高压蒸汽)灭菌调灭菌调pH(3)单个菌落菌落数单个菌落菌落数(4)E(5)扩大培养扩大培养解析：解析：(1)从土壤中分离培养产生植酸酶的菌株的过程中，从土壤中分离培养产生植酸酶的菌株的过程中，培养基中加入植酸钙，以筛选所需要的微