分子生物学常用技术课件.ppt

1、1ppt课件2ppt课件3ppt课件4ppt课件5ppt课件6ppt课件7ppt课件8ppt课件9ppt课件10ppt课件11ppt课件12ppt课件13ppt课件同位素半衰期比活性用途特点32P14.3 天9120D N A放射性强35S87.1 天1490D N A/蛋白3H12.1 年29D N A/蛋白分辨率高125I60 天2400蛋白标记简单14ppt课件15ppt课件16ppt课件17ppt课件18ppt课件标记方法标记物探针缺口平移同位素或半抗原DNA 探针随机引物标记同位素或半抗原DNA 探针5或3末端标记同位素寡核苷酸探针PCR标记同位素或半抗原DNA 探针体外转录同位素或

2、半抗原单链 RNA 探针化学标记半抗原均可19ppt课件20ppt课件21ppt课件22ppt课件23ppt课件24ppt课件25ppt课件26ppt课件转膜转膜27ppt课件28ppt课件29ppt课件30ppt课件31ppt课件32ppt课件33ppt课件DNADNA的体内复制的体内复制ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解链酶DNADNA解解旋解链旋解链34ppt课件ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCG

3、CG5引物酶引物酶RNA引物RNA引物DNADNA解解旋解链旋解链引物引物合成合成DNADNA的体内复制的体内复制35ppt课件ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5TAGCGCTATCGCATCGACGCT3ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3DNA聚合酶DNA聚合酶DNA解解旋解链旋解链引物引物合成合成新链新链延伸延伸DNA的体内复制的体内复制36ppt课件ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35变性复

4、性加热退火DNA加热解链37ppt课件模板DNA9438ppt课件55引物1引物2DNA引物39ppt课件引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶40ppt课件第1轮结束94第2轮开始41ppt课件72TaqTaqTaqTaq5542ppt课件第2轮结束43ppt课件重复30轮后230=1,073,741,824模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增 第5轮扩增第6轮扩增理想拷贝数=2n n 循环次数实际拷贝数=(1+x)n X 平均效率,约为0.85 n 循环次数 44ppt课件1234522557294时间（min）温度（）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1-3步25-30

5、轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性新链延伸DNA的体外扩增的体外扩增热循环DNA解链45ppt课件PCR反应体系反应体系4种dNTP混合物 各200 mol/L引物 各0.1-0.5 mol/L模板DNA 0.12 gTaq DNA聚合酶 2.5 UMg2+1.5mmol/LDNA的体外扩增的体外扩增46ppt课件47ppt课件48ppt课件DNA聚合酶催化的聚合反应dNTP49ppt课件50ppt课件51ppt课件52ppt课件53ppt课件54ppt课件55ppt课件5356ppt课件57ppt课件58ppt课件59ppt课件60ppt课件61ppt课件62ppt课件63ppt课件64ppt课件65ppt课件66ppt课件67ppt课件68ppt课件69ppt课件70ppt课件71ppt课件72ppt课件73ppt课件74ppt课件75ppt课件76ppt课件77ppt课件78ppt课件79ppt课件80ppt课件81ppt课件82ppt课件83ppt课件84ppt课件85ppt课件86ppt课件87ppt课件88ppt课件89ppt课件90ppt课件91ppt课件92ppt课件93ppt课件94ppt课件95ppt课件96ppt课件97ppt课件