补体和循环免疫复合物的检测课件.ppt

1、第第1111章章 补体和循环免疫复合物的检测补体和循环免疫复合物的检测n是一组存在于人和动物是一组存在于人和动物血清与血清与组织液组织液中的具有中的具有酶活性酶活性的不耐的不耐热的热的糖蛋白糖蛋白。n补体性质不稳定补体性质不稳定010 条件下活性只能保持条件下活性只能保持34d56、30min灭活灭活 多种理化因素多种理化因素（射线、机械振荡、酒精）（射线、机械振荡、酒精）均可破坏补体均可破坏补体n所以：补体活性检测要快，保存在所以：补体活性检测要快，保存在20 Ag激活补体激活补体溶血溶血应用：应用：正常值：正常值：50-100U/ml 增高：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等增高：急性炎症、组

2、织损伤、恶性肿瘤等 降低：严重肝病、某些自身免疫性疾病降低：严重肝病、某些自身免疫性疾病 （如肾小球肾炎、（如肾小球肾炎、SLE等等)溶血率溶血率705030 0（%）血清补体血清补体n2%绵羊红细胞悬液绵羊红细胞悬液0.5mlnH2O2.0mln1.8%NaCl溶液溶液2.0mln2%SRBC悬液悬液0.5ml试管号试管号 1：20稀释血清稀释血清 缓冲液缓冲液 2U溶血素溶血素 2%SRBE1 0.10 1.40 0.5 0.52 0.15 1.35 0.5 0.53 0.20 1.30 0.5 0.54 0.25 1.25 0.5 0.55 0.30 1.20 0.5 0.56 0.35

3、 1.15 0.5 0.57 0.40 1.10 0.5 0.58 0.45 1.05 0.5 0.59 0.50 1.00 0.5 0.510 0.00 1.50 0.5 0.5选择溶血程度与选择溶血程度与50%溶血标准管最为接近的两管，测定溶血标准管最为接近的两管，测定OD值，以值，以OD值值最接近标准管的定为最高有效反应管。最接近标准管的定为最高有效反应管。nCH50（U/ml）1/血清用量血清用量 稀释倍数稀释倍数 1u 0.3ml201 1、测定的是补体、测定的是补体9 9种成分的综合水平种成分的综合水平2 2、方法简便、快速，但敏感性较低、方法简便、快速，但敏感性较低3 3、影响因

4、素多、影响因素多1、方法：方法：单扩法单扩法 免疫比浊免疫比浊法法2、应用：正常值应用：正常值免疫化学法免疫化学法原理：原理：用已知的用已知的检测检测是否结合补体。是否结合补体。灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏灵敏度高。比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得多，能测定度高得多，能测定0.05g/ml的抗体。的抗体。特异性强。各种成分都事先滴定，选择最特异性强。各种成分都事先滴定，选择最佳比例，出现交叉反应的机率小。佳比例，出现交叉反应的机率小。易于普及，试验结果显而易见；易于普及，试验结果显而易见；试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用试验条件要求低，不需要特殊仪器或只用分光光度计。分光光度计。n

5、但参与反应的成分多，影响因素复杂，但参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁锁，所以常常被其他方法所操作步骤繁锁，所以常常被其他方法所取代。取代。n但对于免疫学技术的基本训练仍是一个但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很好的试验。很好的试验。免疫复合物是机体内抗原抗体形成免疫复合物是机体内抗原抗体形成的抗原抗体复合物，沉积在血管壁、皮肤、的抗原抗体复合物，沉积在血管壁、皮肤、脏器的免疫复合物称为局部免疫复合物，脏器的免疫复合物称为局部免疫复合物，随血液循环的称为循环免疫复合物。随血液循环的称为循环免疫复合物。局部免疫复合物用免疫组化法检测，局部免疫复合物用免疫组化法检测，而循环免疫复合物检测技

6、术分为而循环免疫复合物检测技术分为抗原特异抗原特异性检测技术性检测技术和和非抗原特异性检测技术非抗原特异性检测技术两类。两类。1、原理：低浓度的原理：低浓度的PEG能选择性地沉淀能选择性地沉淀IC，一般，一般PEG的最终浓度选择的最终浓度选择3.5，PEG5将失去对将失去对IC的选择性。的选择性。2、方法：方法：PEG（7）+等量待检血清等量待检血清416-18小时后离心沉淀小时后离心沉淀NaOH溶解溶解280nm测定测定A值，值，A0.21判为阳性。判为阳性。3、评价：简单方便，既可检测又可以用评价：简单方便，既可检测又可以用于分离；但特异性差，血清中的大分子于分离；但特异性差，血清中的大分子蛋白质易造成假阳性。蛋白质易造成假阳性。C1q固相法固相法1、原理；原理；固相固相C1q+待测血清（待测血清（IC）+酶标抗人酶标抗人IgG+底物底物根据颜色深浅判断根据颜色深浅判断IC含量含量2、评价：评价：敏感度较高敏感度较高 重复性好重复性好 结果稳定性易受影响结果稳定性易受影响 1、可作为评价疾病的活动情况及其对治可作为评价疾病的活动情况及其对治疗的反应性、恶化预兆和疾病分期的指疗的反应性、恶化预兆和疾病分期的指标。标。2、可帮助诊断某些疾病。可帮助诊断某些疾病。3、可协助研究疾病的发病机理。可协助研究疾病的发病机理。