分子医学技能实验课件：1口腔粘膜细胞基因组DNA制备.ppt

1、蔡俊超蔡俊超 实验一实验一 口腔粘膜细胞基因组口腔粘膜细胞基因组DNA制备制备目的：目的：v 实验材料及试剂实验材料及试剂主要试剂的功能主要试剂的功能v抽提缓冲液抽提缓冲液：由：由SDS、EDTA、蛋白酶、蛋白酶K组成组成 SDS的作用是裂解细胞的作用是裂解细胞 EDTA 的作用是络合掉镁等二价金属离子，防止的作用是络合掉镁等二价金属离子，防止DNA酶对酶对DNA分子的降解作用。分子的降解作用。蛋白酶蛋白酶K的作用是水解蛋白质。的作用是水解蛋白质。v酚和氯仿酚和氯仿/异戊醇异戊醇：抽提分离蛋白质：抽提分离蛋白质v乙醇乙醇：沉淀：沉淀DNAvTE：溶解：溶解DNA取材取材:用生理盐水漱口后，口含

2、生理盐水用生理盐水漱口后，口含生理盐水1015ml约约23min，用，用15ml离心管（离心管（4000rpm 10min）收集细胞沉淀）收集细胞沉淀 （离心机的使用，平衡）（离心机的使用，平衡）加入加入0.5ml抽提缓冲液，重悬沉淀抽提缓冲液，重悬沉淀 ，转移至，转移至1.5ml EP管管 （微量移液器的正确使用）（微量移液器的正确使用）混匀，混匀，65 温育温育30min 加入等体积的加入等体积的【饱和酚饱和酚(0.25ml)：氯仿：氯仿/异戊醇异戊醇(0.25ml)】充分颠倒混匀充分颠倒混匀（不要剧烈震荡！）（不要剧烈震荡！）实验步骤及注意事项（一人一组）：实验步骤及注意事项（一人一组）

3、：12000rpm 5min，上层水相转移至，上层水相转移至新的新的EP管管 （高速离心机的使用与安全意识）（高速离心机的使用与安全意识）加入等体积加入等体积【氯仿氯仿/异戊醇异戊醇】，颠倒混匀，颠倒混匀12000rpm 5min，上层水相转移到，上层水相转移到新的新的EP管管 加入加入2倍体积倍体积 无水无水乙醇，颠倒混匀乙醇，颠倒混匀12000rpm 10min 弃上清，沉淀中加入弃上清，沉淀中加入300 l 70%乙醇乙醇 12000rpm 2min 轻轻弃去上清，打开轻轻弃去上清，打开EP盖，待乙醇挥发干净盖，待乙醇挥发干净 加入加入30 l 0.1TE溶液，充分混匀后检测结果溶液，充

4、分混匀后检测结果 分子医学实验注意事项分子医学实验注意事项v微量移液器的正确使用微量移液器的正确使用v离心机的正确使用离心机的正确使用v上课纪律上课纪律v撰写实验报告的规范撰写实验报告的规范 定性分析：定性分析：DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 apoB基因多态性基因多态性分析分析常见问题：常见问题：1、提取的、提取的DNA不纯不纯 原因？改进的方法？原因？改进的方法？2、提取的、提取的DNA成涂布状成涂布状 原因？改进的方法？原因？改进的方法？3、没有获得足够量的、没有获得足够量的DNA 改进的方法？改进的方法？实验报告格式实验报告格式v实验目的和应用价值实验目的和应用价值v实验原理实验原理v实验基本流程和注意事项实验基本流程和注意事项v实验结果和讨论实验结果和讨论v总结或感想总结或感想完成两部分的作业：课后作业，实验报告完成两部分的作业：课后作业，实验报告