CreloxP、CRISPRCas9技术与病毒载体在基因敲除中的联用课件.ppt
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- 关 键 词:
- CreloxP CRISPRCas9 技术 病毒 载体 基因 中的 联用 课件
- 资源描述:
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1、2016-04-252ppt课件3ppt课件4ppt课件Cre蛋白于蛋白于1981年从年从P1噬菌体中被发现,属于噬菌体中被发现,属于Int酶超基因家族。酶超基因家族。p Cre重组酶基因编码区序列全长重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码编码343个个氨基酸氨基酸,38kDa,单体单体蛋白蛋白。p Cre重组酶不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,重组酶不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能特异地在两能特异地在两个个loxP位点位点间发生基因重组间发生基因重组。p Cre重组酶无需借助任何辅助因子,可作用于多种结构的重组酶无需借助任何辅助因子,可作用于多种结构的DNA底物,如线形、底物,如
2、线形、环状甚至超螺旋环状甚至超螺旋DNA。loxP位点,是位点,是locus of X-over P1的缩写,来自的缩写,来自P1噬菌体。间隔序列决定噬菌体。间隔序列决定loxP的方向,如下所示:的方向,如下所示:13bp 8bp 13bpATAACTTCGTATA-NNNTANNN-TATACGAAGTTATCyclization recombinase5ppt课件6ppt课件7ppt课件启动子启动子靶组织或细胞靶组织或细胞albumin肝脏肝脏insulin胰岛胰岛b b细胞细胞adipose protein 2脂肪细胞脂肪细胞b b-lactoglobin乳腺乳腺keratin 5皮肤皮
3、肤muscle creatine kinase骨骼肌骨骼肌myosin心脏心脏protamine-1精子精子CD19B淋巴细胞淋巴细胞proximal lckT淋巴细胞淋巴细胞Wnt-1 or engrailed-2神经系统神经系统8ppt课件启动子启动子诱导物诱导物Cre表达的靶组织表达的靶组织Mx1IFN肝脏、免疫细胞肝脏、免疫细胞CMV-tTAtetracycline广泛表达广泛表达CMV-ERtamoxifen广泛表达广泛表达MerCreMer重组蛋白重组蛋白9ppt课件10ppt课件传统的基因传统的基因打靶打靶技术技术主要依赖于基因同源重组,利用设计的同源臂替主要依赖于基因同源重组,
4、利用设计的同源臂替代靶基因片段,从而代靶基因片段,从而达到目的。达到目的。但是但是同源重组在细胞中的发生概率极低,而且步骤比较复杂、耗时间、同源重组在细胞中的发生概率极低,而且步骤比较复杂、耗时间、费用也比较高费用也比较高。非同源末端连接(非同源末端连接(non homologous end joining,NHEJ)11ppt课件p均由自然界存在的核酸酶系统改造而来均由自然界存在的核酸酶系统改造而来p均具有识别核酸碱基特异性的结构域均具有识别核酸碱基特异性的结构域p作用机制:作用机制:均通过在细胞基因组创造双链断裂缺口,均通过在细胞基因组创造双链断裂缺口,从从而诱发细胞自身修复机制完成基因修
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