全血胆碱脂酶测定精讲课件.ppt
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- 关 键 词:
- 胆碱 测定 讲课
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1、全血胆碱酯酶活性的测定全血胆碱酯酶活性的测定三氯化铁比色法三氯化铁比色法实验目的实验目的掌握全血掌握全血ChE活性测定的意义活性测定的意义掌握全血掌握全血ChE活性测定原理、方法活性测定原理、方法方方 法法Asch-DTNB比色法(比色法(GBZ52)三氯化铁比色法三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝(溴麝香草酚蓝(BTB)比色法)比色法纸片法纸片法Biocheck法(便携式分析仪)法(便携式分析仪)三氯化铁比色法三氯化铁比色法原理原理乙酰胆碱乙酰胆碱胆碱酯酶胆碱酯酶胆碱胆碱+乙酸乙酸碱性羟胺碱性羟胺乙酰羟胺乙酰羟胺HClHClFeClFeCl3 3羟肟酸铁羟肟酸铁(棕红色络合物棕红色络合物)三氯化铁比
2、色法三氯化铁比色法原理原理血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸,终止反应后,剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺,然后在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟酸铁络合物。其颜色深浅与乙酰胆碱的量成正比,在520nm进行比色定量,从而推算出胆碱脂酶活性。实验器材一次性注射器一次性注射器(1ml)12个,采血用;个,采血用;微量移液器(微量移液器(20l);分光光度计;);分光光度计;玻璃比色杯玻璃比色杯(每组至少每组至少3个个);擦镜纸;擦镜纸;恒温水浴箱(恒温水浴箱(370.5 )移液管移液管(0.2ml,1ml,5ml);试管;漏斗;容量瓶试管;漏斗;容量瓶 试剂试剂均为分析纯,
3、水为蒸镏水或去离子水。试剂均为分析纯,水为蒸镏水或去离子水。1磷酸盐缓冲溶液,磷酸盐缓冲溶液,pH=7.2 准确称取磷准确称取磷酸氢二钠酸氢二钠(Na2HP0412H2O)16.72g和磷酸二氢钾和磷酸二氢钾(KH2PO4)2.72g,用水溶解并稀释到,用水溶解并稀释到1000ml,置置4冰箱中保存。冰箱中保存。2碱性羟胺溶液碱性羟胺溶液 临用时将临用时将139 g/L的盐酸的盐酸羟胺溶液与羟胺溶液与140 g/L的氢氧化钠溶液等体积混的氢氧化钠溶液等体积混合。合。3盐酸溶液盐酸溶液1+2 浓盐酸浓盐酸l份加水份加水2份混合。份混合。试剂 4三氯化铁溶液三氯化铁溶液(100 g/L)称取称取1
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