大学精品课件：专英chapter5中药研究中的色谱分析方法.ppt

1、中药研究中的色谱分析方法,Chromatography Methods of Analysis in Chinese medicines,Chapter 5.,Qualitative analysis 定性分析：物质的组成 color, odor, or melting point,quantitative analysis 定量分析：成分的含量 weight or volume,分 析 化 学,化 学 分 析,仪 器 分 析,酸碱滴定,配位滴定,氧化还原滴定,沉淀滴定,电化学分析,光化学分析,色谱分析,波谱分析,重量分析,滴定分析,按测定原理(分析方法)分类,Classical Analyt

2、ical methods,Instrumental analytical methods,precipitation, extraction and distillation 沉淀、萃取、蒸馏,High-Performance Liquid Chromatography,a dynamic equilibrium 动态平衡 isocratic elution 等度洗脱 gradient elution 梯度洗脱 peak widths 峰宽 peak area 峰面积 peak height 峰高 the extent of tailing 拖尾因子 the retention time of

3、 the peak 色谱峰的保留时间,the theoretical plates理论塔板数 relative standard deviation 相对标准偏差 tailing factor 拖尾因子,system suitability 系统适用性,external libration 外标法 internal libration 内标法,Method validation 方法学验证,Accuracy 准确度,Precision 精密度,Specificity 专属性,Linerarity 线性,Ruggedness 耐用性,LOQ 定量限,LOD 检测限,High-Performanc

4、e Liquid Chromatography,准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。 测定方法的准确度 可用已知纯度的对照品做加样回收测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品。 用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。 回收率% =（C-A）/B100% A为供试品所含被测成分量； B为加入对照品量； C为实测值。,Accuracy 准确度,试验方法,同一样品，制备相同浓度的6份样品（样品取样量减半，以1：1比例加入对照品。,同

5、一样品，制备3个浓度的供试品，每个浓度分别制备3份供试液，共9份，对照品的加入方式有3种： A： 取相同量样品9份（一般为样品取样量的一半），设计3个浓度，按不同比例加入对照品。0.5：1、1：1、1.5：1 B：取3个不同量的样品各3份，每个取样量分别按1：1比例加入对照品，中间浓度应选定在正常测定浓度。 C： 按标示量计算的组分，可参照化学药品测定方法，取9份样品，按 0.8：1、1：1、1.2：1的比例加入对照品（样品取样量减半） recovery% 95-105% RSD%3%（HPLC）,精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 日内精密

6、度within-day precision 日间精密度day to day precision 重复性repeatability：在相同操作条件下，由同一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精密度称为重复性； 中间精密度intermediate precision：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度称为中间精密度； 重现性reproducibility：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度称为重现性。,Precision 精密度,Specificity 专属性,专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测成分的特性。鉴别试验、限量

7、检查、含量测定等方法均应考察其专属性,1、鉴别试验 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均不得干扰测定。显微鉴别、色谱及光谱鉴别等应附相应的代表性图像或图谱。 2、含量测定和限量检查 以下含被测成分的供试品（除去含待测成分药材和饮片或不含待测成分的模似复方）试验说明方法的专属性。色谱法、光谱法等应附代表性图谱，并标明相关成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。,线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 Range 范围 系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

8、应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。,Linearity 线性,the range 范围 the slope 斜率 the intercept 截距 the regression line 回归线 the correlation coefficient 相关系数,TLCS: r0.99 HPLC-UV: r0.999 HPLC-ELSD: r0.995,耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使

9、方法用于常规检验提供依据，开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。 经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。,Ruggedness 耐用性,薄层色谱的变动因素有：不同厂牌的薄层板，点样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化等。,典型的变动因素有： 被测溶液的稳定性， 样品提取次数、时间等。,液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成比例或pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速及检测波长等。,气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样品和检测器温度等。,limit of detection 检测限 LOD,检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。确定检测限常用的方法如下。 即把已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。,定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。用于限量检查的定量测定的分析方法应确定定量限。 常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10：1时相应浓度或注入仪器的量进行确定。,Limit of quantitation 定量限 LOQ,检测限与定量限 被分析物可被检测和被准确定量的最低值,