筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选培训课件.ppt

1、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选4 4、诱导方法：、诱导方法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、灭活的病毒、电激等。灭活的病毒、电激等。5 5、过程：、过程：3 3、过程：、过程：细胞相互凝集细胞相互凝集膜上蛋白质分子和膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布脂质分子重新排布细胞膜打开细胞膜打开细胞发生融合细胞发生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。作用，使细胞相互凝集。6 6、优点：、优点：突破了有性杂交的局限，突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能动植物细胞在结构上有何区别？这与它们动

2、植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？杂交或融合过程有什么影响？问题讨论问题讨论动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。不须去除细胞壁和再生出细胞壁。问题讨论问题讨论、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性相同，都是细胞膜的流动性问题讨论问题讨论主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化

3、学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途用途诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目？（一）获得抗体的传统方法（一）获得抗体的传统方法1、方法：、方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。2、缺点：、缺点：.3、解决问题的设想、解决问题的设想:免疫反应过程中，免疫反应过

4、程中，每一个每一个B淋巴淋巴细胞细胞只分泌一种只分泌一种特异性抗体。特异性抗体。克隆单一的克隆单一的B淋巴细胞，形成细淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。胞群，获得大量的单一抗体。4、面临的新问题：、面临的新问题：一个一个B淋巴细胞不可能在体外培养淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的。条件下无限增殖的。.1 1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？问题讨论问题讨论提示：提示：2 2、瘤细胞和癌细胞有何区别？、瘤细胞和癌细胞有何区别？2 2、单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合

5、、细胞融合、筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选，继续培养，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体（选择性培养基）（选择性培养基）诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤、细胞融合后培养液中有几种细胞？、细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞筛选杂种细胞思考：思考：杂交瘤细胞杂交瘤细胞、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？3、单克隆抗体的概念：单克隆

6、抗体的概念：化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体4、单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可大量制备。特异性强，灵敏度高，并可大量制备。（三）（三）单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速（导向作用，作为载体，生物导弹（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体单克隆抗体+药物，药物，用于用于治疗肿瘤）治疗肿瘤）两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优

7、势一个优势单克隆抗体特异单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势性强、灵敏度高的优势 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过

8、程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 世界上第一只克隆羊世界上第一只克隆羊“多莉多莉”的培育过程如的培育过程如图所示，请据图回答：图所示，请据图回答：乙乙甲甲abcdef(1)图中的甲为苏格兰绵羊，图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，乙为多莉羊。那么，

9、a和和b是通过是通过_分裂形成的，分裂形成的，其其DNA含量是体细胞的含量是体细胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 细细胞，乙的遗传性状与提供胞，乙的遗传性状与提供 _的绵羊的绵羊 一致一致.减数减数一半一半体体细胞核细胞核乙乙甲甲abcdef(2)产生产生 甲和乙的过程分别甲和乙的过程分别是是和和（3）在形成乙是的过程中，）在形成乙是的过程中，需要将需要将d的细胞核取出，将的细胞核取出，将c细胞核移入细胞核移入d细胞内，此技术细胞内，此技术叫叫。所需的受体细胞。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因大多采用动物卵细胞的原因是是（4）绵羊的白色对黑色为）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要显色

10、。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是它交配的绵羊最好是-有性生殖有性生殖克隆克隆核移植核移植卵细胞大，易于操作；卵细卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能胞具有继续分化的潜能。黑毛黑毛乙乙甲甲abcdef（5）在产生多莉羊时，需将）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（头母羊（f）子宫里，这种技术）子宫里，这种技术在细胞工程中叫在细胞工程中叫（6）继植物组织培养后，克隆）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细绵羊的培育成功，证明动物细胞也有胞也有（7）在繁殖多莉羊的过程中，）在繁殖多莉羊的过程中，是否遵循孟德尔遗传规律？多是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与莉羊的性状与d羊、羊、c羊及羊及f羊的羊的关系是什么？关系是什么？胚胎移植胚胎移植全能性全能性不遵循，多莉羊的多数性状象不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性羊，个别性状象状象d羊，发育也会受到羊，发育也会受到f羊影响羊影响。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢