土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(已用)课件.ppt

1、选择选择培养基：培养基：在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许特定种类的微生物特定种类的微生物生长，同时生长，同时抑制或阻止抑制或阻止其他种类微生物生长的其他种类微生物生长的培养基。培养基。思考思考1从物理性质看此培养基属于从物理性质看此培养基属于 培养基，是由于加入培养基，是由于加入了凝固剂了凝固剂 。从功能上看属于从功能上看属于 培养基，此培养基的培养基，此培养基的 只有尿只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培养素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培养基上生长，此培养基属于基上生长，此培养基属于 培养基。培养基。思考思考2 2该培养基对微生物该培养基对微生物 （具有

2、，不具（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是有）选择作用。如果具有，其选择机制是 。具有具有 只有能够以只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长选择选择固体固体琼脂琼脂选择选择氮源氮源思考思考3活学活用1.1.在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入在培养基中加入10%10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分

3、利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出离出()A.A.乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B.B.固氮细菌、大肠杆菌、放线菌固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C.C.固氮细菌、霉菌、放线菌固氮细菌、霉菌、放线菌D.D.固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌C（1 1）原理：原理：当样品的当样品的稀释度足够高稀释度足够高时，培养基表面生时，培养基表面生长的一个菌落，长的一个菌落，来源于样品稀释液中的来源于样品稀释液中的一个一个活菌。通活菌。通过统计平板上的过统计平板上的菌落数菌落数，就能推测出样品中大约含有，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

4、多少活菌。（2 2）常用方法：）常用方法：稀释涂布平板法。稀释涂布平板法。想一想，如何根据平板上的菌落数推测出每克想一想，如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计能统计3个平板，计算出平板上的菌落数的个平板，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按以下公式进行计算。平均值，然后按以下公式进行计算。旁栏思考题旁栏思考题实例分析实例分析P22 第二位同学第二位同学的统计结果更接近真实值。因为第一位同学的统计结果更接近真实值。因为第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。只涂布了

5、一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？需要，如何改进？都需要都需要。第一位同学在该浓度下可以多涂布几个平板第一位同学在该浓度下可以多涂布几个平板；第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中但是其中1个平板的计数结果与另外个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单

6、地将3个个平板的计数值用来求平均值，平板的计数值用来求平均值，可以在该浓度下重新进行可以在该浓度下重新进行实验。实验。恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，将含将含已知数目的红细胞已知数目的红细胞液体与液体与待测的菌液待测的菌液按按1：1均匀混合，均匀混合，在显微镜下在显微镜下数出各自的数目数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。，然后求菌液中的细胞数目。（比例计数法，类似与标志重捕法）（比例计数法，类似与标志重捕法）待测样品待测样品等量的已知含量的红细胞等量的已知含量的红细胞 混匀混匀涂抹涂抹测定：测定：红细胞数目红细胞数目细菌数目细菌数目计算单位体

7、积内的细菌数目计算单位体积内的细菌数目细菌细菌红细胞红细胞【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。举例：已知红细胞浓度为举例：已知红细胞浓度为M个个/mL，从体积，从体积为为N mL的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红细胞液细胞液等量均匀混合等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞同一视野中发出有红细胞W个，大肠杆菌个，大肠杆菌Y个，个，求求NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X是多少？是多少？XNM YW(个个)观察到的红细胞平均数观察到的红细胞平均

8、数/观察到的细菌平均数观察到的细菌平均数红细胞含量红细胞含量/细菌含量细菌含量（类似于标志重捕法）（类似于标志重捕法）公公 式式 W/Y M/X(每每mL中）中）NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X为：为：2.2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是()A.A.菌落数量最多的平板菌落数量最多的平板B.B.菌落数量最少的平板菌落数量最少的平板C.C.菌落数

9、量适中的平板菌落数量适中的平板D.D.取若干个平板菌落数量的平均值取若干个平板菌落数量的平均值D D活学活用设置对照的方法：设置对照的方法：空白对照：空白对照：不给对照组任何处理不给对照组任何处理因素；因素；条件对照：条件对照：给对照组施以部分实验因素，但给对照组施以部分实验因素，但不是所要研不是所要研究的处理因素究的处理因素；自身对照：自身对照：对照组和实验组对照组和实验组都在同一研究对象都在同一研究对象上进行；上进行；相互对照：相互对照：不单设对照组，而是不单设对照组，而是几个实验组相互对照几个实验组相互对照。教材提供的案例中教材提供的案例中A A同学的结果与其他同学不同学的结果与其他同学

10、不同，可能的解释有两种：同，可能的解释有两种：一是一是由于土样不同由于土样不同；二是二是由于培养基污染或操作失误由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？如何设置对照实验来确定原因？方案一：方案一：其他同学用其他同学用与与A A同学一样同学一样的土样进行实验。的土样进行实验。如果结果如果结果与与A A同学一致同学一致，则证明，则证明A A同学同学操作操作无误无误；如果如果结果不同结果不同，则证明，则证明A A同学存在操作失误同学存在操作失误或培养基的配制有问题。或培养基的配制有问题。教材提供的案例中教材提供的案例中A A同学的结果与其他同学不同，同学的结果与其他同学不同，可能的解释

11、有两种：可能的解释有两种：一是一是由于土样不同；由于土样不同；二是二是由于培养基污染或操作失误。由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？如何设置对照实验来确定原因？方案二：方案二：将将A A同学配制的培养基在同学配制的培养基在不加土样的情况下进不加土样的情况下进行培养，作为空白对照行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到，以证明培养基是否受到污染。污染。小结：小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，服力，对照实验对照实验的设置是必不可少的。的设置是必不可少的。9实验设计：实验设计：实验设计包括对实验设计包括对实验方案实验方案，所需，所

12、需仪器仪器、材材料料、用具用具和和药品药品，具体的实施，具体的实施步骤步骤以及时以及时间安排等的综合考虑和安排。间安排等的综合考虑和安排。二实验设计与操作二实验设计与操作下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意图，请结下面是土壤中尿素分解菌的分离与计数的实验流程示意图，请结合教材提供的资料，进行实验设计，并写出详细的实验方案：合教材提供的资料，进行实验设计，并写出详细的实验方案：菌落计数菌落计数配制土壤配制土壤溶液溶液系列稀释系列稀释涂布平板涂布平板与培养与培养实验设计：实验设计：实验方案：实验方案：（三）样（三）样品的稀释品的稀释（四）取样涂布（四）取样涂布（五）微生物的培养与观察并

13、计数（五）微生物的培养与观察并计数（六）鉴定（六）鉴定 （三）样品的稀释（三）样品的稀释 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？土壤中各类微生物的数量（单位：株土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg/kg）是不同的）是不同的。测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？旁栏思考题旁栏思考题微生物细菌放线菌真菌稀释度104、105、106103、104、105102、103、104保证获得菌落数在30300的平板进行计数。稀释度稀释度实验时

14、要实验时要对培养皿对培养皿作作好标记好标记。注。注明培养基类明培养基类型、培养时型、培养时间、间、稀释度稀释度、培养物等。培养物等。3.3.下列是关于下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，实验操作的叙述，其中错误的是其中错误的是()A.A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板。灭菌后倒平板。B.B.取取10104 4、10105 5、10106 6倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL0.1 mL，分别涂布于各组平板上。分别涂布于各组平板上。C.C.将实验组和对照组平板倒置，将实验

15、组和对照组平板倒置，37 37 恒温培养恒温培养24244848小时。小时。D.D.确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组以上的实验组平板进行计数。平板进行计数。活学活用D4.4.测定土壤中细菌数量一般选用测定土壤中细菌数量一般选用10104 4、10105 5和和10106 6倍的倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用10102 2、10103 3和和10104 4倍稀释，其原因是倍稀释，其原因是()A.A.细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大B.B.细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释

16、，真菌不易稀释C.C.细菌在土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多D.D.随机的，没有原因随机的，没有原因C活学活用 当菌落当菌落数目稳定数目稳定时，选取菌落数在时，选取菌落数在3030300300的平板的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对进行计数。在同一稀释度下，至少对3 3个个平板进行重平板进行重复计数，然后求出复计数，然后求出平均值平均值，并根据平板所对应的，并根据平板所对应的稀释稀释度度计算出样品中细菌的数目。计算出样品中细菌的数目。关注菌落的关注菌落的形状形状、大小大小、隆起程度隆起程度、颜色颜色、质地等等，、质地等等，都是区分细菌的重都是区分细菌的重要手段。要手段。注意注意研

17、究未知的微生物，一定要注意进研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被行规范的无菌操作，以防被致病的微生物致病的微生物感感染，实验后，一定要洗手。染，实验后，一定要洗手。（六）鉴定：（六）鉴定：筛选后必鉴定筛选后必鉴定 鉴定（鉴别）培养基鉴定（鉴别）培养基：加入某种指示剂或化学药加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存。品，不影响微生物的生存。1 1、酚红培养基：、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌是否存在鉴定分解尿素的细菌是否存在 2、伊红、伊红美蓝培养基：美蓝培养基：鉴定大肠杆菌是否存在鉴定大肠杆菌是否存在 1 1、酚红培养基酚红培养基：鉴定鉴定分解尿素的细菌分解尿素的细菌。原

18、理：原理：脲酶脲酶催化尿素分解成氨催化尿素分解成氨培养基碱性培养基碱性增强增强 酚红酚红变红变红脲脲酶阳性酶阳性2 2、伊红伊红美蓝培养基：美蓝培养基：鉴定鉴定大肠杆菌大肠杆菌。原理：代谢产物与伊红原理：代谢产物与伊红美蓝美蓝结合结合 菌落呈菌落呈深紫色并带有金属光深紫色并带有金属光泽泽。鉴定（鉴别）培养基的实例：鉴定（鉴别）培养基的实例：1.实验设计和操作提示步骤步骤实验操作实验操作操作提示操作提示土壤土壤取样取样从酸碱度接近从酸碱度接近 潮潮湿的土壤中取样。先铲去湿的土壤中取样。先铲去表层土表层土_左右，再取左右，再取样，将样品装入事先准备样，将样品装入事先准备好的信封中。好的信封中。取样

19、用的小铁铲和盛土取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过样的信封都要经过_制备制备培养培养基基分别配制牛肉膏蛋白胨培分别配制牛肉膏蛋白胨培养基和养基和 为唯一为唯一氮源的氮源的 培养基培养基牛肉膏蛋白胨培养基可牛肉膏蛋白胨培养基可以作为以作为 ，用来判断选择培养基是用来判断选择培养基是否起到了否起到了 作用作用3 cm3 cm选择选择灭菌灭菌选择选择中性中性尿素尿素对照对照填一填填一填样样品品的的稀稀释释和和涂涂布布称取称取 g g土样加到盛土样加到盛有有 mL mL无菌水的锥形瓶无菌水的锥形瓶中，充分摇匀；中，充分摇匀；吸取吸取上清液上清液 mL mL，转移，转移至盛有至盛有 mL mL的无菌水

20、的无的无菌水的无菌大试管中，按照上图流程菌大试管中，按照上图流程进行样品的稀释；进行样品的稀释；按照由按照由10107 710103 3稀释度的顺稀释度的顺序分别吸取序分别吸取 mL mL进进行行 操作。按照浓操作。按照浓度度 到到 的顺序涂布平的顺序涂布平板，不必更换移液管板，不必更换移液管应在应在 旁称取土旁称取土样；样；由于初次实验，对由于初次实验，对于稀释的范围没有把于稀释的范围没有把握，因此选择了一个握，因此选择了一个较为宽泛的范围较为宽泛的范围 _倍的稀释液；倍的稀释液；实验时要对所用的实验时要对所用的平板、试管作平板、试管作好好 。如培养皿。如培养皿要注明培养基类型、要注明培养基

21、类型、培养时间、培养时间、培、培养物等养物等高高稀释度稀释度10109090190.1平板涂布平板涂布低低火焰火焰103107标记标记培培养养将涂布好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在_ 温度下培养。随着培养时间温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录等，并做好记录在牛肉膏蛋白胨培在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落养基上生长的菌落数目应明显数目应明显_ _ 选择培养基上的数选择培养基上的数目，才说明选择培目，才说明选择培养基有养基有_作用作用

22、3037 选择选择多于多于计计数数当菌落数目当菌落数目_ _ 时，选取菌落数在时，选取菌落数在_ 的平板的平板进行计数。在同一进行计数。在同一稀释度下，至少对稀释度下，至少对 _个平板进行重个平板进行重复计数，然后求出复计数，然后求出_ _ ，并，并根据平板所对应的根据平板所对应的稀释度计算出样品稀释度计算出样品中细菌的数目中细菌的数目如果得到了如果得到了_菌落菌落数目符合要求的平板，则说明稀数目符合要求的平板，则说明稀释操作比较成功；释操作比较成功；如果同一稀释倍数的三个重复如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明实验不的菌落数相差较大，表明实验不精确，需要精确，需要_ ；在菌落计数

23、时，每隔在菌落计数时，每隔24 h24 h统计统计一次菌落数目。选取菌落数目稳一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的培养时间不足而导致遗漏菌落的数目数目平均值平均值重新实验重新实验稳定稳定3030032 2个或个或2 2个以上个以上四、结果分析与评价四、结果分析与评价（一）如何判断培养物中是否有杂菌污染以及选（一）如何判断培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？择培养基是否筛选出菌落？对照的培养皿对照的培养皿在培养过程中在培养过程中没有菌落没有菌落生长，生长，说明培养基没有被杂菌污染。说明培养基没有被杂菌污染

24、。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。，说明选择培养基已筛选出一些菌落。（二）如何判断样品的稀释操作是否成功？（二）如何判断样品的稀释操作是否成功？如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上个以上菌落数目在菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。进行菌落的计数。如果学生选取的是同一种土样，如果学生选取的是同一种土样，统计的结统计的结果应该接近果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步。如果结果相差太远，需要进一步分析产生差

25、异的原因。分析产生差异的原因。（三）重复组的结果是否一致的判定方法：（三）重复组的结果是否一致的判定方法：四、结果分析与评价四、结果分析与评价 课题小结稀释涂布平板法显微镜直接计数法目的菌株1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的

26、微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()()A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B.B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.CO C.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平

27、板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（）A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B

28、.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C（宁夏，（宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行基和培养皿进行_（消

29、毒、灭菌）；操作者的双手需要（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的证待测样品稀释的_。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步

30、的菌落特征对细菌进行初步的_。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是对于固体培养基应采用的检测方法是_。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。温度温度 酸碱度酸碱度易培养易培养生活周期短生活周期短灭菌灭菌消毒消毒损伤损伤DNA的结构的结构比例合适比例合适鉴定鉴定(或分类或分类)将未接种的培养基在适将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间宜的

31、温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生。观察培养基上是否有菌落产生。灭菌灭菌 8当堂检测1.1.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是通常用来作为菌种鉴定的重要依据是()A.A.菌落菌落 B.B.细菌形态细菌形态 C.C.细菌体积细菌体积 D.D.细菌结构细菌结构A2.2.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是不正确的是()A.A.将土壤用无菌水稀释，制备将土壤用无菌水稀释，制备10103 310106 6土壤稀释液土壤稀释液 B.B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C.C.用加入刚果

32、红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌细菌 D.D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株菌株C3.3.请选出下列正确的操作步骤请选出下列正确的操作步骤()土壤取样称取土壤取样称取10 g10 g土壤，取出加入盛有土壤，取出加入盛有90 mL90 mL无菌无菌水的锥形瓶中吸取水的锥形瓶中吸取0.1 mL0.1 mL土壤溶液进行平板涂布依土壤溶液进行平板涂布依次稀释至次稀释至10101 1、10102 2、10103 3、10104 4、10105 5、10106 6、10107 7稀释度稀释度A.

33、A.B.B.C.C.D.D.C4.4.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是目的是()A.A.筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 B.B.对分离的菌种作进一步鉴定对分离的菌种作进一步鉴定 C.C.作细菌的营养成分作细菌的营养成分 D.D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素B5.5.甘蔗是南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘甘蔗是南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁榨汁(蔗蔗糖糖)酵母菌发酵酵母菌发酵蒸馏蒸

34、馏成品成品(燃料酒精燃料酒精)。(1)(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤步骤1 1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。变处理。步骤步骤2 2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意意_和和 ，加琼脂后，加琼脂后灭菌，制成固体平板。灭菌，制成固体平板。步骤步骤3

35、3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。步骤步骤4 4：根据：根据_，筛选出突变菌。，筛选出突变菌。添加高添加高浓度蔗糖浓度蔗糖(葡萄糖葡萄糖)调低调低pHpH是否能在选择培养基上生长是否能在选择培养基上生长(2)(2)上述步骤上述步骤2 2、3 3和和4 4的依据分别是的依据分别是_ 。5.5.甘蔗是南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘甘蔗是南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗榨汁榨汁(蔗蔗糖糖)酵母菌发酵酵母菌发酵蒸馏蒸馏成品成品(燃料酒精燃料酒精)。(1)(1)具有耐高糖和耐酸特

36、性的酵母菌是理想的酒精发酵具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤步骤2 2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意意_和和 ，加琼脂后，加琼脂后灭菌，制成固体平板。灭菌，制成固体平板。步骤步骤3 3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。步骤步骤4 4：根据：根据_，筛选出突变菌。，筛选出突变菌。添加高添加高浓度蔗糖浓度蔗糖(葡萄糖葡萄糖

37、)调低调低pHpH是否能在选择培养基上生长是否能在选择培养基上生长获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的特性提供高糖和酸性的筛选环境；提供高糖和酸性的筛选环境；课后练习课后练习 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括物，其中也包括分解尿素的微生物分解尿素的微生物。由于。由于瘤胃中的微生物多为瘤胃中的微生物多为厌氧菌厌氧菌，接触空气后，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备物除了需要准备选择培养基选择培养基外，还应参照外，还应参照厌氧菌的

38、培养厌氧菌的培养方法进行实验设计。方法进行实验设计。大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心,有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红代谢产物与伊红美蓝结合美蓝结合，使菌落呈，使菌落呈深紫色并带有金属光泽深紫色并带有金属光泽，使大肠杆，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。其他微生

39、物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基例如：鉴别大肠杆菌培养基 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是

40、区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。归纳提炼1.选择培养基(1)选择培养基的含义：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离出所需要的微生物。(2)常见的选择培养基加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。无氮源培养基可以分离固氮微生物。石油是唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。2.用稀释涂布平板法对微生物进行计数时的注意事项(1)为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取其平均值。(2)统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。