土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件.ppt

1、+土壤有土壤有“微生物的天然培养基微生物的天然培养基”之称。同之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，有更多的微生物。而这些微生物中只有一小部有更多的微生物。而这些微生物中只有一小部分能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物分能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？中筛选出能够分解尿素的细菌呢？允许特定种类的微生物生允许特定种类的微生物生 长，同时抑制或阻止其他种长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。类微生物生长的培养基。当样品的

2、当样品的稀释度稀释度足够高时，培养基表面生长的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。大约含有多少活菌。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。菌落。讨论题讨论题1 1：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为对应稀释倍数为10106 6的培养基中，得到以下两种统计结果。的培养基

3、中，得到以下两种统计结果。1 1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230230。2 2、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为别为2121、212212、256256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163163作作为统计结果。为统计结果。分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？学的实验需要改进吗？如果需要，如何改

4、进？甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。服力。乙有一个平板与另外两个平板相差很大，说明操作过程可能乙有一个平板与另外两个平板相差很大，说明操作过程可能有误，必须重做实验。有误，必须重做实验。1、实验时必须设置重复组，、实验时必须设置重复组，至少要涂布至少要涂布3个平板。个平板。2、分析结果时，一定要考虑、分析结果时，一定要考虑所设置的重复组结果是否一致，所设置的重复组结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，结果不一致，意味着操作有误，需要重做实验。需要重做实验。讨论题讨论题2 2：在做本课题的实验时，在做本课题的实验时

5、，A A 同学从对应同学从对应10106 6倍稀释的培养基中筛选倍稀释的培养基中筛选出大约出大约150150个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约5050个菌落。个菌落。其他同学认为其他同学认为A A同学的结果有问题。他们分析同学的结果有问题。他们分析可能是可能是A A同学的培养同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。但是，但是，A A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他

6、同学的结果同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同自己所选用的土壤样品不同。但是，。但是，A A同学在同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。据。分析：你能通过设置对照，帮助分析：你能通过设置对照，帮助A A同学学排除上述两个可能影响同学学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？实验结果的因素吗？对照实验是指除了被测试的对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验的实验，其作用是比照实

7、验组，排除任何其他可能原因组，排除任何其他可能原因的干扰的干扰 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。制备制备以尿素为唯一氮源的以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛选择培养基和牛肉膏蛋白胨固体培养基。肉膏蛋白胨固体培养基。筛选出能够分解筛选出能够分解尿素的细菌尿素的细菌与选择培养基作对照，与选择培养基作对照，检测选择培养基是否检测选择培养基是否具有选择作用具有选择

8、作用10104 4、10105 5、10106 6倍的稀释度倍的稀释度 10103 3、10104 4、10105 5倍的稀释度倍的稀释度10102 2、10103 3、10104 4倍的稀释度倍的稀释度第一次实验可将稀释度放宽一点，选择第一次实验可将稀释度放宽一点，选择10103 310107 7思考：思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？数量，选用的稀释范围相同吗？原因：原因：不同微生物在土壤中的含量不同。不同微

9、生物在土壤中的含量不同。目的：目的：保证能从中选择出菌落数在保证能从中选择出菌落数在30300间间的平板进行计数。的平板进行计数。实验时要对实验时要对培养皿作好标培养皿作好标记。记。注明培养注明培养基类型、培养基类型、培养时间、稀释度、时间、稀释度、培养物等。培养物等。四、结果分析与评价四、结果分析与评价1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基

10、的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功：样品的稀释操作是否成功：如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。3.3.重复组的结果是否一致：重复组的结果是否一致：如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则可能操作有误，需要重做试验。如果结果相差太远，则可能操作有

11、误，需要重做试验。加入酚红指示剂的培加入酚红指示剂的培养基从功能上划分属养基从功能上划分属于什么培养基？于什么培养基？伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基从功能上划分属从功能上划分属于什么培养基？于什么培养基？练习练习1 1、需要在火焰旁操作的有（、需要在火焰旁操作的有（）土壤取样土壤取样 称取土壤称取土壤 稀释土壤溶液稀释土壤溶液 涂布平板涂布平板 微生物的培养微生物的培养 A A B B C C D D 2 2、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（）A.A.筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 B B培养基中缺乏酚红指示

12、剂作细菌的营养培养基中缺乏酚红指示剂作细菌的营养 C C对分离的菌种作进一步的鉴定对分离的菌种作进一步的鉴定 D D如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素3 3、测定土壤中细菌数量一般选用、测定土壤中细菌数量一般选用10104 4、10105 5和和10106 6倍的稀释液进行平板培养，而倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用测定真菌的数量一般选用10102 2、10103 3和和10104 4倍稀释，其原因是倍稀释，其原因是()A A细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大 B B细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释，真菌不易稀释C C细菌在

13、土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多 D D随机的，没有原因随机的，没有原因4 4、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A A B B C C D D5 5.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1

14、M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作作为该样品菌落数的估计值为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。6 6、实验测定链霉素对、实验测定链霉素对3 3种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用3 3种细菌在事先准备好的琼脂种细菌在事先准备好的琼脂平板上画平板上画3 3条等长的平行线条等长的平行线

15、(3(3条线均与图中的链霉素带接触条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于，将平板置于37 37 条件下恒温培养条件下恒温培养3 3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是是()A A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长 B B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人7 7、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照

16、是()A A未接种的选择培养基未接种的选择培养基B B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D D接种了的选择培养基接种了的选择培养基8 8、下列是关于、下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，错误的是实验操作的叙述中，错误的是()A A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B B取取10104 4、10105 5、10106 6倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 0.1 mLmL，分别涂布于各组平，分

17、别涂布于各组平板上板上C C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 37 恒温培养恒温培养242448h48hD D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组平板进行计数以上的实验组平板进行计数9 9、某同学从稀释度为、某同学从稀释度为10103 3倍的稀释液中各取了倍的稀释液中各取了0.1mL0.1mL土壤菌液涂布到三个平土壤菌液涂布到三个平板上得到菌落数分别为板上得到菌落数分别为200200、215215、210210。求每克土壤样品中的菌落数为。求每克土壤样品中的菌落数为_。1010、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会

18、对环境造成污、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1 1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有是无菌的，常用的灭菌方法有 、和和 （2 2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程

19、中每一步都要在过程中每一步都要在 旁进行操作接种后的培养皿旁进行操作接种后的培养皿_于于3737的的 中培养中培养（3 3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于该培养基属于 培养基若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落培养基若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的 使使pHpH升高，酚红升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色区域指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越大，表明该菌株利用尿素的能力 （4 4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数数 A A多多 B B少少 C C相等相等 D D几乎为零几乎为零