（实验）培养基的配制和灭菌课件.ppt

1、到目前为止到目前为止几十项诺贝尔生理学和医学奖、化学奖几十项诺贝尔生理学和医学奖、化学奖 都与都与微生物学微生物学有关有关微生物基础知识微生物基础知识微生物的分类微生物的分类 原核生物原核生物 原生生物原生生物真菌真菌病毒病毒特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小。通个体多数十分微小。通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚。常要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚。专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用一、培养基作用、种类一、培养基作用、种类二、无菌技术二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌四、纯化大肠杆菌主要内容主要

2、内容一、培养基一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。1.培养基定义：培养基定义：2.2.培养基的营养构成培养基的营养构成(1)(1)基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源无机碳源：无机碳源：有机碳源：有机碳源：COCO2 2、COCO3 32 2-、HCOHCO3 3-牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源氮源无机氮源：无机氮源：有机氮源：有机氮源：NHNH4 4、NONO3 3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含C C、H H、O O、

3、N N的的有机物有机物是是异养异养型微生物的型微生物的碳源、氮源碳源、氮源u 牛肉膏 又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。富含：糖类、碳源、维生素、磷酸盐等u 蛋白胨 蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。富含：氮源、一些维生素(2)(2)特殊营养：特殊营养：（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋

4、白胨中含有）(3)(3)pHpH、氧气的需求、氧气的需求维生素维生素、碱基等碱基等例如例如:培养培养乳酸杆菌乳酸杆菌时需要在培养基中添加时需要在培养基中添加维生素维生素；培养培养霉菌霉菌时需将时需将PHPH调至酸性调至酸性；培养培养细菌细菌时需将时需将PHPH调至中性或微碱性调至中性或微碱性；培养培养厌氧型微生物厌氧型微生物时则需要提供时则需要提供无氧无氧的条件。的条件。营养要素营养要素含义含义作用作用主要来源主要来源碳源碳源凡能提供所凡能提供所需碳元素的需碳元素的物质物质构成生物体细构成生物体细胞的物质和一胞的物质和一些代谢产物；些代谢产物；有些是异养生有些是异养生物的能源物质物的能源物质无

5、机化合物无机化合物：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3；有机化合物有机化合物：糖：糖类、脂肪酸、花类、脂肪酸、花生饼粉、石油等生饼粉、石油等氮源氮源凡能提供所凡能提供所需氮元素的需氮元素的物质物质合成蛋白质、合成蛋白质、核酸以及含氮核酸以及含氮的代谢产物的代谢产物无机化合物无机化合物：N N2 2、NHNH3 3、铵盐、铵盐、硝酸盐；硝酸盐；有机化合物有机化合物：尿：尿素、牛肉膏、蛋素、牛肉膏、蛋白胨等白胨等培养基的成分及功能培养基的成分及功能特殊营特殊营养物质养物质生长必不可少的生长必不可少的微量微量有机物有机物酶和核酸的组酶和核酸的组成成分成成分维生素、氨基维生素、氨基酸、碱基等酸

6、、碱基等水水在生物体内含量在生物体内含量很高，在低等生很高，在低等生物体内含量更高物体内含量更高不仅是优良的不仅是优良的溶剂而且可维溶剂而且可维持生物大分子持生物大分子结构的稳定结构的稳定无机盐无机盐为微生物提供除为微生物提供除碳、氮以外的各碳、氮以外的各种重要元素，包种重要元素，包括大量元素和微括大量元素和微量元素量元素细胞内的组成细胞内的组成成分，生理调成分，生理调节物质；某些节物质；某些化能自养菌的化能自养菌的能源，酶的激能源，酶的激活剂活剂据化学成分可分为：_培养基和_培养基据外观物理状态可分为：_培养基_培养基和_培养基据培养基功能可分为：_培养基和_培养基和基础培养基天然合成液体半

7、固体固体鉴别培养基的类型培养基的类型选择3.3.培养基的类型和用途培养基的类型和用途比较：比较：固体培养基固体培养基和和半固体半固体培培养基、液体培养基养基、液体培养基。区别：区别：加入加入琼脂琼脂的量决定培养基的形态。的量决定培养基的形态。熔点：熔点：96 凝固点：凝固点：40 注意：一般细菌不能利用琼脂。注意：一般细菌不能利用琼脂。培养基种类培养基种类特点特点作用作用固体培养基固体培养基外观固态外观固态微生物的纯化、分离、计数微生物的纯化、分离、计数半固体培养基半固体培养基容器倒放不致流出，容器倒放不致流出，剧烈震动则破散剧烈震动则破散观察微生物的运动、观察微生物的运动、鉴定菌种鉴定菌种液

8、体培养基液体培养基呈液态呈液态常用于工业生产常用于工业生产菌落菌落 选择培养基选择培养基用途：用途：从众多微生物中从众多微生物中选择、分离选择、分离出所需要的微生物出所需要的微生物原理：原理：依据某些微生物依据某些微生物对某些物质的抗性对某些物质的抗性而设计而设计制备方法：制备方法：在培养基中在培养基中加入某种化学物质加入某种化学物质,以抑制不需以抑制不需 要的微生物的生长要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。促进所需要的微生物的生长。常见选择培养基举例：常见选择培养基举例：加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳

9、有机物的无碳培养基:唯一碳源为纤维素的培养基：唯一碳源为纤维素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离固氮菌 分离自养型微生物分离自养型微生物分解纤维素的细菌分解纤维素的细菌 鉴别培养基鉴别培养基用途：用途：鉴别鉴别不同种类的微生物不同种类的微生物原理：原理：依据微生物产生的某些代依据微生物产生的某些代谢产物与培养基中特定谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计，产生明显的特征变化而设计制备方法：制备方法：在培养基中在培养基中加入某种指示剂或化学药品加入某种指示剂或化学药品,用以用以鉴别不同种类的微生物。鉴别不同种类的微生物

10、。鉴定培养基举例：鉴定培养基举例：大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝伊红美蓝培养基上典型特征培养基上典型特征大肠杆菌菌落呈黑色中心大肠杆菌菌落呈黑色中心 ,有金属光泽有金属光泽4.4.培养基配制原则：培养基配制原则：（1 1）目的要明确：）目的要明确：要根据所培养的微生物的种类、培要根据所培养的微生物的种类、培养的目的等，选择原料配制培养基。养的目的等，选择原料配制培养基。（2 2）营养要协调：）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。注意各种营养物质的浓度和比例。（碳源和氮源的比最为重要）（碳源和氮源的比最为重要）如：谷氨酸生产中如：谷氨酸生产中 C:N=4:1C:N=4:1菌体大量繁殖而产生的

11、谷氨酸少。菌体大量繁殖而产生的谷氨酸少。C:N=3:1C:N=3:1菌体繁殖受抑制但谷氨酸的合成量大增。菌体繁殖受抑制但谷氨酸的合成量大增。（3 3）pHpH要适宜：要适宜：各种微生物适宜生长的各种微生物适宜生长的pHpH范围不同。范围不同。细菌细菌pHpH为：为：6.5-7.56.5-7.5；放线菌；放线菌pHpH为：为：7.5-8.57.5-8.5；真菌真菌pHpH为：为：5.0-6.05.0-6.0。二、无菌技术二、无菌技术1 1、获得纯净培养物的关键：、获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵2 2、无菌技术包括：、无菌技术包括：（1 1）对实验）对实验操作空间操作空

12、间、操作者的、操作者的衣着和手衣着和手进行进行清洁和清洁和消毒消毒 ；（2 2）将）将培养器皿、接种用具和培养基培养器皿、接种用具和培养基等器具进等器具进行行灭菌灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒在酒精灯火焰附近精灯火焰附近旁进行；旁进行；（4 4）避免已灭菌处理的材料用具与）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品周围物品相相接触。接触。（1）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）对象：操作空间、双手3.3.消毒与灭菌的概念消毒与灭菌的概念 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的

13、微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。对象：接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 （2）灭菌的定义：(1)(1)常用的消毒方法：常用的消毒方法：4.4.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法煮沸消毒法煮沸消毒法:在在100100煮沸煮沸5-6min5-6min可以杀死微可以杀死微生物细胞和一部分芽孢。生物细胞和一部分芽孢。巴氏消毒法：巴氏消毒法：在在70-75 70-75 煮煮30min30min或或 80 80 煮煮15min15min可以杀死不耐高温的液体中的微生物，并可以杀死不耐高温的液体中的微生物，并且使液体中的营养成分不被破坏。（如且使液体中的营养成分不被破坏。（如牛奶牛

14、奶）化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用70%70%的酒精的酒精擦拭进行皮肤擦拭进行皮肤消毒消毒;用用氯气氯气消毒水源等。消毒水源等。紫外线消毒紫外线消毒灼烧灭菌：灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。(2)(2)常用的灭菌方法：常用的灭菌方法：干热灭菌：干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160160170170O OC C中加热中加热1 12h2h即可。即可

15、。(2)(2)常用的灭菌方法：常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到热至锅内压力到100kPa100kPa，温度到，温度到121121O OC C后，维持后，维持151530min30min即可。即可。(2)(2)常用的灭菌方法：常用的灭菌方法：1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒

16、请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨 NaClNaCl 琼脂琼脂水

17、水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.称量称量 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。三、实验操作三、实验操作3.3.溶化：溶化：先将先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白

18、胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至解后，加自来水定溶至100mL100mL。4.4.灭菌：灭菌：将配制好的将配制好的培养基培养基放到锥形瓶中放到锥形瓶中,瓶口瓶口加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧再放到加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧再放到高高压锅内灭菌压锅内灭菌；将；将培养皿培养皿放入放入干热灭菌箱内灭菌干热灭菌箱内灭菌5.5.倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050O OC C左右时左右时倒平板倒平板。倒平板操作的讨论倒平板操作的讨论:1.1.培养基灭菌后要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050O O

19、C C时倒平板。用时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。即可开始倒平板。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养既可以使培

20、养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。珠落入培养基，造成污染。4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌微生物接种常见方法：微生物接种常见方法：平板划线法

21、平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.1.平板划线法平板划线法 通过通过接种环接种环在琼脂固体培养基表面在琼脂固体培养基表面连续划线连续划线的操作，将聚集的菌种的操作，将聚集的菌种逐步稀释逐步稀释分散到培养基的分散到培养基的表面。表面。在数次划线后可以分离到在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体来的肉眼可见的子细胞群体称称菌落菌落。菌落菌落1.1.定义：单个或少数细菌定义：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个殖时，就会形成一个肉眼可见的肉眼可见的，具，具有一定形态有一定形态结构的子细胞群体结构的子细胞群体，叫做

22、菌落，叫做菌落。2.2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.3.功能：菌落是功能：菌落是鉴定菌种鉴定菌种的重要依据。的重要依据。菌落菌落细菌的菌落特细菌的菌落特征因种而异征因种而异 菌落菌落细菌的菌落特细菌的菌落特征因种而异征因种而异 1 1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？第一步灼烧接种环第一步灼烧接种环是是为了避免接种环上可能存在的为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物微生物污染培养物；每次划线

23、前灼烧接种环每次划线前灼烧接种环是是为了杀死上次划线结束后，为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。以便得到菌落。划线结束后划线结束后仍然要灼烧接种环，仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。平板划线法的讨论平板划线法的讨论:2.2.在灼烧接

24、种环之后，为什么要等其冷却后再进行在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。细菌繁殖而来的菌落。

25、平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况平板划线法获取的微生物经恒温培养后的生长情况 2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度将菌液进行一系列的梯度稀释稀释，然后，然后将不同稀释度将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落在培养基表面形成单个的菌落。稀释涂布平板法操作过

26、程分两个步骤，即稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释系列稀释操作操作和和涂布平板操作涂布平板操作。系列稀释操作系列稀释操作10101 110102 210103 310104 410105 510106 6(1)(1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水的试管灭菌并编号。水的试管灭菌并编号。(2)(2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培养的菌液，注入第二支试管中，培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀吹吸三次使之充分混匀。(3)(3)从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入第三支稀释液，注入第三支试管中，重复步

27、骤试管中，重复步骤2 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。涂布平板操作涂布平板操作(1)(1)将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有7070的酒精的酒精的烧杯中。的烧杯中。(2)(2)取少量菌液（取少量菌液（不超不超0.1mL0.1mL），滴加到培养基表面。），滴加到培养基表面。(3)(3)将将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷，火熄后冷却却8 810s10s。(4)(4)用涂布器将菌液用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面均匀地涂布在培养基表面。稀释涂布平板法获取的菌落稀释涂布平板法获取的菌落涂布平板操作讨论涂布平板操作讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行

28、。结合涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到放到37370 0C C的恒温箱的恒温箱中，中，培养培养121224h24h后进行观察并后进

29、行观察并记录结果。记录结果。1.1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？果有菌落生长，说明了什么？未接种的培养基在恒温箱中保温未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。要重新制备。2.2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形

30、状、颜色相似的菌落。到大小、形状、颜色相似的菌落。四、结果分析与评价四、结果分析与评价 3.3.培养培养12h12h和和24h24h后，观察到的实验结果相同后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？吗？如果不同，请分析产生差异的原因？培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。使菌落不断增大。4.4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。请分析其可能的原因。无菌操作未达到要

31、求：可能是培养基灭菌不无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。养的过程中受到了污染。1.1.临时保藏临时保藏 将菌种接种到试管的将菌种接种到试管的固体斜面培养基固体斜面培养基上，培上，培养成菌落后，置于养成菌落后，置于4 4O OC C的冰箱中保存（的冰箱中保存（每隔每隔3 36 6个个月月要重新接种培养后再保存）。要重新接种培养后再保存）。2.2.甘油管藏甘油管藏 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高压灭菌。的甘油，高压灭菌。将将1mL1mL培养的菌液转移到甘

32、油瓶中，充分混合后，培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于置于2020O OC C的冷冻箱中保存。的冷冻箱中保存。五、课题延伸五、课题延伸-菌种的保藏菌种的保藏例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于微生物的具体

33、情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；作为自养型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作为自养型微生，可作为自养

34、型微生物的碳源和无机盐；而物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于DD选选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NHNH3 3可为硝化可为硝化细菌提供能量和氮源。细菌提供能量和氮源。D例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.就是指消灭杂菌就是指消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前 解析：解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A

35、说说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物，包括芽孢和孢子；全部微生物，包括芽孢和孢子；C C是正确的，因为与发是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在

36、接种前，如果接物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。B编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培养基成分，请据此回答：养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养）右表培养基可培养的微生物类型的微生物类型是是 。（2 2）

37、若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物（3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CHCH2 2OO），该培养基），该培养基可用于培养可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则）右表中各成分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种分离和计数，应该增）若右表培养基用于菌种分离和计数，应该增加的成分是加的成分是 。自生固氮微生物自生固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）