自身抗体检测及应用推选课件.ppt

1、一、概述自身免疫耐受。自身免疫耐受。自身免疫自身免疫autoimmunity）自身抗体自身抗体autoantibody或自身或自身致敏淋巴细胞致敏淋巴细胞自身免疫性疾病自身免疫性疾病二、自身抗体的检测（一抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）泛指抗各种细胞核成分DNA，RNA，蛋白质和酶的抗体。1 1、ANAANA的类型的类型（1 1抗核蛋白抗体抗核蛋白抗体（2 2抗抗DNADNA抗体抗体抗双链抗双链DNADNA抗体抗抗体抗dsDNAdsDNA）抗单链抗单链DNADNA抗体抗抗体抗ssDNAssDNA）。）。（3 3抗抗ENAENA抗体抗体 可提取性核抗原可提取性核抗原e

2、xtractable nuclear extractable nuclear antigensantigens，ENAENA）2 2、ANAANA的检测方法的检测方法间接免疫荧光法间接免疫荧光法用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，用小鼠肝切片或印片作为细胞核基质，还可用核质丰富的培养细胞如还可用核质丰富的培养细胞如Hep-2Hep-2，作，作为抗原。为抗原。用荧光显微镜观察用荧光显微镜观察ANAANA荧光着染强度和免荧光着染强度和免疫荧光图形。疫荧光图形。稀释待检血清可检测稀释待检血清可检测ANAANA效价。效价。几乎仅出现在PSS进行性系统性硬皮病患者体内，是PSS的特征抗体RF的检测最常用I

3、gG致敏的胶乳颗粒凝集试验，或速度散射比浊法，但只能检测IgM类的RF。APLA包括一组自身抗体，如抗心磷脂抗体ACLA），抗磷脂酸抗体APAA和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。分胞质型cANCA和核周型pANCA）。常用间接免疫荧光分析检测。是自身免疫性肝炎的血清学标志性抗体。抗心磷脂抗体anti-phospholipid antibody，APLA）最常见于多发性肌炎PM患者。自身抗体的检测 及应用几乎仅出现在PSS进行性系统性硬皮病患者体内，是PSS的特征抗体分胞质型cANCA和核周型pANCA）。2、抗ENA抗体的主要类型及 临床意义抗中性粒细胞胞质抗体（anineutrophil cytopl

4、asmic antibodies，ANCA）可提取性核抗原extractable nuclear antigens，ENA）APLA包括一组自身抗体，如抗心磷脂抗体ACLA），抗磷脂酸抗体APAA和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。3.常见的ANA图形及临床意义均质型均质型homogeneohomogeneousus，H H）斑点型斑点型speckledspeckled，S S）核膜型核膜型membranousmembranous，M M）核仁型核仁型nucheolarnucheolar，N N）4.4.抗抗dsDNAdsDNA的检测的检测常用间接免常用间接免疫荧光法检疫荧光法检测，常用的测，常用的抗原基

5、质是抗原基质是马疫锥虫或马疫锥虫或绿蝇短膜虫。绿蝇短膜虫。（二抗（二抗ENAENA抗体谱抗体谱不同的自身免疫病可产生不同的不同的自身免疫病可产生不同的抗抗ENAENA抗体。通过检测抗抗体。通过检测抗ENAENA抗体抗体的类型及其组合，可综合诊断自的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。身免疫病的类型。1、检测方法双向免疫扩散双向免疫扩散对流免疫电泳对流免疫电泳斑点酶免疫技术斑点酶免疫技术免疫印迹技术免疫印迹技术免疫印迹技术最常用）免疫印迹技术最常用）先将先将ENAENA混合抗原作凝胶电泳，混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把这些分离开不同的区带，然后把这些区带转印到硝酸纤维膜上，加

6、入区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清，最后用酶标抗体使相待检血清，最后用酶标抗体使相应的抗原带显色应的抗原带显色2 2、抗、抗ENAENA抗体的主要类型及抗体的主要类型及 临床意临床意义义（1 1抗抗SmSm抗体抗体 抗抗SmSm是是SLESLE的特异性标志之一的特异性标志之一 （2 2抗核抗核RNPRNP抗体抗抗体抗nRNPnRNP抗体又抗体又称抗称抗U1RNPU1RNP抗体。抗体。抗抗U1RNPU1RNP抗体是诊断混合性结缔组织抗体是诊断混合性结缔组织病（病（MCTD MCTD的重要血清学依据，是的重要血清学依据，是MCTDMCTD的诊断标准之一。的诊断标准之一。（3 3抗抗SSA/Ro

7、SSA/Ro和抗和抗SSB/LaSSB/La 这两种抗体是干燥综合症这两种抗体是干燥综合症SSSS患者最常见的两种自身抗患者最常见的两种自身抗体体（4 4抗抗J0-1J0-1抗体抗体 最常见于多发性肌炎最常见于多发性肌炎PMPM患者。患者。（5 5抗抗Scl-70Scl-70抗体抗体 几乎仅出现在几乎仅出现在PSSPSS进行性进行性系统性硬皮病患者体内，是系统性硬皮病患者体内，是PSSPSS的特征抗体的特征抗体免疫印迹技术最常用）自身抗体的检测 及应用这两种抗体是干燥综合症SS患者最常见的两种自身抗体先将ENA混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后把这些区带转印到硝酸纤维膜上，加入待检血清

8、，最后用酶标抗体使相应的抗原带显色抗心磷脂抗体anti-phospholipid antibody，APLA）几乎仅出现在PSS进行性系统性硬皮病患者体内，是PSS的特征抗体抗Sm是SLE的特异性标志之一自身免疫autoimmunity）可提取性核抗原extractable nuclear antigens，ENA）（三类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是自身免疫性肝炎的血清学标志性抗体。泛指抗各种细胞核成分DNA，RNA，蛋白质和酶的抗体。（5抗Scl-70抗体与成年型重症肌无力有关。（四其他自身抗体 1.抗中性粒细胞胞质抗体（anineutrophil cytoplas

9、mic antibodies，ANCA）不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。（三类风湿因子（rheumatoid factor，RF）RFRF是以变性是以变性IgGIgG为靶抗原的抗体，为靶抗原的抗体，它能与人或动物的变性它能与人或动物的变性IgGIgG结合，结合，而不与正常而不与正常IgGIgG结合，结合，RFRF主要出主要出现在类风湿关节炎患者。现在类风湿关节炎患者。RF RF的检测最常用的检测最常用IgGIgG致敏的胶乳致敏的胶乳颗粒凝集试验，或速度散射比浊颗粒凝集试验，或速度散射比浊法，但只能检测法，但只能检测IgMIgM类的类的RFRF。IgGIgG类，类，IgAIgA类和类和

10、IgEIgE类类RFRF需需ELISAELISA等等方法检测。方法检测。（四其他自身抗体（四其他自身抗体 1.抗中性粒细胞胞质抗体抗中性粒细胞胞质抗体（anineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）以人中性粒细胞胞质为靶抗原，以人中性粒细胞胞质为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病有关。与临床多种小血管炎性疾病有关。分胞质型分胞质型cANCAcANCA和核周型和核周型pANCApANCA）。可用）。可用ELISAELISA或间接免或间接免疫荧光法测定。疫荧光法测定。2.2.抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体anti-anti-phospholipid antibodyp

11、hospholipid antibody，APLAAPLA）靶抗原是血浆中的磷脂结合蛋白。靶抗原是血浆中的磷脂结合蛋白。APLAAPLA包括一组自身抗体，如抗心包括一组自身抗体，如抗心磷脂抗体磷脂抗体ACLAACLA），抗磷脂酸抗），抗磷脂酸抗体体APAAAPAA和抗磷脂酰丝氨酸抗和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。体等。3.3.抗平滑肌抗体抗平滑肌抗体anti-smooth anti-smooth muscle antibodymuscle antibody，ASMAASMA）是自身免疫性肝炎的血清学标志是自身免疫性肝炎的血清学标志性抗体。常用间接免疫荧光分析性抗体。常用间接免疫荧光分析检测。检测。4.

12、4.抗角蛋白抗体抗角蛋白抗体anti-keratin anti-keratin antibodyantibody，AKAAKA）主要见于类风湿性关节炎患者，主要见于类风湿性关节炎患者，对于早期诊断对于早期诊断RARA有重要意义。可有重要意义。可用间接免疫荧光法检测。但敏感用间接免疫荧光法检测。但敏感性较低。与性较低。与RFRF不平行。不平行。5.5.抗乙酰胆碱受体抗体抗乙酰胆碱受体抗体是重症肌无力的标志性自身抗体，是重症肌无力的标志性自身抗体，对重症肌无力的诊断有特异性。对重症肌无力的诊断有特异性。可用可用ELISAELISA检测。检测。6.6.抗骨骼肌抗体抗骨骼肌抗体 与成年型重症肌无力有关。与成年型重症肌无力有关。7.7.抗胰岛细胞抗体抗胰岛细胞抗体 与与I I型糖尿病有关。型糖尿病有关。三、临床应用三、临床应用1 1、检测项目的选择、检测项目的选择2 2、检测方法的选择、检测方法的选择3 3、自身抗体检测的质量控制、自身抗体检测的质量控制 谢谢观看谢谢观看