实验-两对半的检测课件.ppt
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- 关 键 词:
- 实验 对半 检测 课件
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1、 ELISAELISA检测检测“乙肝二对半乙肝二对半”(Enzyme linked immunosorbent Assay ELISA)酶酶免免疫疫技技术术分分类类 酶免疫组化酶免疫组化 酶免疫测定酶免疫测定 固固相相酶酶免免疫疫测测定定 液液相相酶酶免免疫疫测测定定均相酶免疫测定均相酶免疫测定非均相酶免疫测定非均相酶免疫测定ELISAELISA的概念的概念酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 (enzyme-linked immunosorbent assayenzyme-linked immunosorbent assay,ELISAELISA)酶联酶联:抗原或抗体的酶标记。:抗原或抗体的酶标
2、记。免疫免疫:以抗原抗体特异性反应为基础。:以抗原抗体特异性反应为基础。吸附吸附:抗原或抗体包被于固相载体表面。:抗原或抗体包被于固相载体表面。在固相载体表面实现抗原抗体的反应,通过酶标记的手段,酶催化底在固相载体表面实现抗原抗体的反应,通过酶标记的手段,酶催化底物形成水解、氧化或还原反应,形成有色物质,其颜色的深浅与标本中的物形成水解、氧化或还原反应,形成有色物质,其颜色的深浅与标本中的抗原或抗体的量直接相关。抗原或抗体的量直接相关。ELISAELISA技术特点技术特点 具有良好的具有良好的灵敏度灵敏度和和特异性特异性,能满足临床,能满足临床需要,应用广泛。需要,应用广泛。操作操作简单简单、
3、无需昂贵的仪器投入,价格、无需昂贵的仪器投入,价格便便宜宜。对环境几乎对环境几乎没有污染没有污染。ELISAELISA技术的应用技术的应用 检测抗原抗原的方法:双抗体夹心法 竞争法 检测抗体抗体的方法:双抗原夹心法 间接法 竞争法 捕获法实验目的实验目的 掌握掌握ELISAELISA法检测法检测“乙肝二对半乙肝二对半”的的原理、原理、操作操作步骤步骤及注意事项。及注意事项。掌握检测掌握检测“乙肝乙肝二对半二对半”的临床意义。的临床意义。什么是什么是“乙肝二对半乙肝二对半”?“乙肝两对半乙肝两对半”是指:是指:表面抗原(表面抗原(HBsAgHBsAg)、表面)、表面抗体(抗体(HBsAbHBsA
4、b)、)、e e抗原(抗原(HBeAg HBeAg)、)、e e抗体抗体(HBeAbHBeAb)、核心抗体()、核心抗体(HBcAbHBcAb)HBsAgHBsAg本身不具有传染性,只具有抗原性本身不具有传染性,只具有抗原性 保护性抗体:保护性抗体:HBsAbHBsAb 传染性指标:传染性指标:HBeAg HBeAg,HBcAgHBcAg HBeAbHBeAb,HBcAbHBcAb不是保护性抗体,而是反映不是保护性抗体,而是反映曾被曾被HBVHBV感染的重要指标。感染的重要指标。为什么不检测核心抗原(HBcAg)HBcAgHBcAg主要位于病毒颗粒中,只有少数游离。主要位于病毒颗粒中,只有少数
5、游离。机体免疫系统对机体免疫系统对HBcAgHBcAg很敏感,易产生高滴度的很敏感,易产生高滴度的HBcAb,HBcAb,与与HBcAg HBcAg 形成免疫复合物。形成免疫复合物。血清中,血清中,HBcAg HBcAg可丢失部分氨基酸。可丢失部分氨基酸。“乙肝二对半乙肝二对半”的检测原理的检测原理 HBsAgHBsAg:双抗体夹心法双抗体夹心法 HBsAbHBsAb:双抗原夹心法双抗原夹心法 HBeAgHBeAg:双抗体夹心法双抗体夹心法 HBeAbHBeAb:中和竞争法中和竞争法(血清中的(血清中的e e抗体与固相抗体与固相e e抗体竞争结合抗体竞争结合e e抗原)抗原)HBcAbHBcA
6、b:竞争抑制法竞争抑制法双抗原(体)夹心法测抗体(原)包被抗原包被抗原酶标抗原酶标抗原待测抗体待测抗体包被抗体包被抗体酶标抗体酶标抗体待测抗原待测抗原Anti-HIV,Anti-HBs双抗体夹心法双抗体夹心法双抗原夹心法双抗原夹心法HBsAg,HCV core Ag,HBeAg,HBV preS1,PreS2双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原+-E EE EE EE EE EE EE EE EE E竞争抑制法测抗体 包被抗原包被抗原待测抗体待测抗体*酶标酶标抗体抗体 Anti-HBcAnti-HBe中和竞争法测抗体包被抗体包被抗体中和中和抗原抗原待测抗体待测抗体酶标抗体酶标抗体Anti-HB
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