8章化妆品的检验课件.ppt

1、 8.化妆品的检验目录8.1 化妆品检验规则及稳定性试验化妆品检验规则及稳定性试验8.2 化妆品通用检验方法化妆品通用检验方法8.3 化妆品产品质量检验化妆品产品质量检验8.4 化妆品中有害物质含量分析化妆品中有害物质含量分析8.5 化妆品微生物检验方法化妆品微生物检验方法化妆品含义:指以涂抹、喷洒或其它类似方法，施于人体表面（表皮、毛发、指甲、口唇等），起到清洁、保养、美化或消除不良气味，并对使用部位具有缓和作用的物质。分类:护肤化妆品、美容化妆品、美发用化妆品、和专用化妆品等。质量特征：安全性（长期使用安全）、稳定性（长期的稳定）、有用性（保持皮肤正常的生理功能和容光焕发的效果）和使用性（

2、舒适），甚至还包括消费者的偏爱性。8.1 检验规则及稳定性试验一、检验规则 1基本术语 （1）常规检验项目。每批产品必检项目（理化、感官、卫生指标中细菌总数、重量指标和外观要求）。（2）非常规检验项目。指非逐批检验的项目，如卫生指标中除细菌总数以外的其它项目。（3）适当处理。指不破坏销售包装，从整批化妆品中剔除个别不合格品的挑拣过程。（4）样本。指每批抽样量的全体。（5）单位产品。指单件化妆品（瓶、支、袋、盒）。2检验分类 交收检验出厂前由生产厂的检验部门或收货方按产品标准逐批进行检验，交收检验项目为常规检验项目。型式检验全面检查，每年不得少于一次。有下列情形之一时，也应进行型式检验。当原料、

3、工艺、配方有重大改变，影响产品性能时；产品长期停产后（6个月以上）恢复生产时；出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时；国家质量监督机构提出进行型式检验要求时。型式检验的项目包括常规检验项目和非常规检验项目。3抽样 工艺条件、品种、生产日期相同的产品为一批。收货方也可按一次交货产品为一批。（1）交收检验抽样 包装外观检验项目的抽样按GB/T 2828.1-2003的二次抽样方案抽样。其中不合格（缺陷）分类分类检查水平（IL）、合格质量水平（AQL）见表。包装外观检验项目的内容 注意：该项目为破坏性试验。（2）型式检验抽样 型式检验中的常规检验项目以交收检验结果为依据；非常规检验项目可从任一批产品

4、中抽取23单位样品，按产品标准规定的方法检验。4判定规则 交收检验判定规则 当卫生指标不符合标准时，该批产品为不合格，不得出厂；当感官理化指标中任一项不符合标准时，允许复验，由供需双方共同抽样，若不合格，则该批产品不合格批，不得出厂；当质量（容量）指标不符合产品标准时，允许加倍复验，仍不合格时，该批产品判为不合格批。（2）型式检验判定规则 型式检验中常规检验项目的判定与交收检验判定规则相同。型式检验中的非常规检验项目中有一项不符合产品标准规定时，即判整批产品为不合格。（3）仲裁检验 当供需双方对产品质量发生争议时，由双方共同按本标准进行抽样检验，或委托上级质监站进行仲裁检验。5转移规则 （1）

5、除非另有规定，在检查开始时应使用正常检查。（2）从正常检查到加严检查。当正常检查时，若在连续5批中有2批经初次检查（不包括再次提交检查批）不合格，则从下一批转到加严检查。（3）从加严检查到正常检查。当进行加严检查时，若连续5批经初次检查（不包括再次提交检查批）合格，则从下一批检查转入正常检查。6检查的停止和恢复 加严检查开始后，若不合格批数（不包括再次提交检查批）累计到5批，则暂时停止产品交收检查。暂停检查后，若生产方确实采取了措施，使提交检查批达到或超过标准要求，则经主管部门同意后，可恢复检查。一般从加严检查开始。7检查后处置 质量（容量）不合格批和B类不合格批，允许生产厂处理后再次提交检查

6、。再次提交按加严抽样方案进行检查。C类不合格批，生产方经适当处理后再次提交检查，按加严抽样方案进行检查或由供需双方协商处理。1耐热试验 耐热试验是膏霜、乳液和液状化妆品重要的稳定性试验项目，如发乳、唇膏、润肤乳液、护发素、染发乳液、洗发膏、浴液、洗面奶、发用摩丝、雪花膏、香脂等产品均需进行耐热试验。基本原理：将电热恒温培养箱调节到（401），取两份样品，将其中一份置于电热恒温培养箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，判断产品的耐热性能。2耐寒试验 同耐热试验一样，耐寒试验也是膏霜、乳液和液状等类产品的重要的稳定性试验项目。基本原

7、理：先将电冰箱调节到（-5 -15）1，然后取两份样品，将其中一份置于电冰箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，以判断产品的耐寒性能。3离心试验 离心试验是检验乳液类化妆品货架寿命的试验，是加速分离试验的必要检验法，如洗面奶、润肤乳液、染发乳液等均需作离心试验。其方法是：将样品置于离心机中，以（20004000）r/min的转速试验30 min后，观察产品的分离、分层状况。4色泽稳定性试验 色泽稳定性试验是检验有颜色化妆品色泽是否稳定的试验。由于各类化妆品的组成、性状等各不相同，所以其检验方法也各不相同。如发乳的色泽稳定性试验采

8、用紫外线照射法，香水、花露水的色泽稳定性试验采用干燥箱加热法。8.2 化妆品通用检验方法1 pH值的测定 人体皮肤的pH值一般都在4.56.5，偏酸性。这是由于皮肤表面分有皮肤和汗液，其中含有乳酸、游离氨基酸、尿酸和脂肪酸等酸性物质。膏霜类和乳液类化妆品应有不同的pH值，pH值是化妆品一项重要的性能指标。称取试样一份（0.1 g），分数次加蒸馏水10份，并不断搅拌，加热至40，使其完全溶解，冷却至此（251）或室温，待用（含油量较高的产品可加热至（7080），冷却后去掉油块待用；粉状产品可沉淀过滤后待用）。pH计进行pH值测定。2 粘度的测定 流体受外力作用流动时，在其分子间呈现的阻力称为粘度

9、（或称粘性）。粘度是流体的一个重要的物理特性，是膏霜类和乳液类化妆品的重要质量指标之一。粘度一般用旋转式粘度计测定 3 浊度的测定 香水、头水类和化妆水类制品或由于静止陈化时间不够部分不溶解的沉淀物尚未析出完全，或由于香精中不溶物如浸胶和净油中的含蜡量度过高，都易使产品变混浊，混浊是这些化妆品的主要质量问题之一。浊度的测定目测法:试样在水浴或冷冻剂中的清晰度。4 相对密度的测定 相对密度是指一定体积的物料质量与同体积水的质量之比。它是液状化妆品的一项重要性能指标。相对密度的测定方法常用密度计法。5 色泽稳定度的测定 色泽是化妆品的一项重要性能指标，色泽的稳定性则是化妆品的主要质量问题之一。色泽

10、稳定度测定的方法主要是目测法比较试样加热一定温度后颜色的变化 6 香水、花露水中香精的测定 香精是赋予化妆品一定的香气，带给使用者优雅舒适感。几乎所有化妆品都使用香精，所以香精是化妆品的主要基质原料之一。化妆品中香精的测定常用的方法是乙醚萃取法。利用香精混溶于乙醚的原理，用乙醚将香精从试样中提取出来，除去醚后称重，以此得到香精的含量。8.3 化妆品产品质量检验 一、膏霜和乳液类化妆品的质量检验 膏霜和乳液类化妆品包括雪花膏、冷霜、奶液和香粉密、润肤霜、清洁霜等。这些产品主要是由水和水溶性物质、脂质（油脂和蜡）、乳化剂等三类物质组成的乳化体，乳化体的乳化类型主要是水包油型（O/W）和油包水型（W

11、/O），也有油包水水包油型（O/W/O）、水包油油包水型（W/O/W）等多重乳化体系。1润肤膏霜的质量检验 润肤膏霜有水包油型（O/W型）和油包水型（W/O型）两种类型，为适用于人体皮肤的具有一定稠度的乳化型膏霜，其感官指标及理化指标见表 雪花膏感官指标及理化指标（1）感官检验 色泽检验及膏体检验用目测法在室内无阳光直射处观察。香气凭嗅觉鉴定。（2）渗油率的检验 先将恒温箱调节至（401），在已称量的培养皿中称取样品约10 g（约占培养皿面积1/4），刮平，精密称量。再将培养皿斜放在烘箱内的15 角架上保持24 h后取出，放入干燥器内冷却后再称重，如有油渗出，则将渗油部分小心揩去，留下膏体部分

12、，然后将培养皿连同剩余的膏体部分进行称量计算样品渗油率（3）乳化体类型检验 对膏霜、乳液等乳化状化妆品，必须进行乳化体类型检验。检验方法有：染料法、溶解法、导电性测定等方法。1）染料法 将产品涂抹在表面皿上形成约1.6 mm厚、面积为6.5 m2的薄膜，在薄膜的不同部位，分别洒上少量油溶性染料和水溶性染料。用显微镜观察染料扩展情况。2）溶解法 取少量产品观察，如易与矿物油相混合为油包水型；如易与水相混合为水包油型。3）导电性测定法2润肤乳液质量检验 润肤乳液是具有流动性的水包油型化妆品。主要用于滋润人体皮肤。润肤液的感官及理化指标指标。（1）感官检验 色泽：取样品在非阳光直射条件下目测。香气：

13、用辨香纸蘸取试样，用嗅觉进行辨别。结构：取试样擦于皮肤上，在室内和非阳光直射条件下观察。（2）离心试验 在离心管中注入试样约2/3高度并装实，用软木塞塞好。然后，放入调节至（381）的电热恒温培养箱内，保温1 h后，立即移入离心机中，并将离心机调整到2000 r/min，30 min后观察现象。3洗面奶质量检验 洗面奶是乳液类化妆品，主要用于清洁面部皮肤，具有去除表皮污物、油脂等功能，同时有利于皮肤的柔软、润滑和生成保护层，尤其适用于干性皮肤的人使用。洗面奶的感官及理化指标 二、液体洗涤类化妆品 液体洗涤类化妆品主要包括香波、沐浴液和洁面产品等。对液体洗涤类化妆品的基本要求是必须具有去污能力、

14、起泡能力，并具有一定护理（护发、护肤）能力。液体洗涤类化妆品的代表产品是液体香波，本章仅对以表面活性剂为主体复配而成的、能清洁头发并保持其美观作用的发用香波。香波的感官及理化指标见下表 洗发香波感官、理化、卫生指标 1感官检验 （1）外观、色泽：取样品在非阳光直射条件下进行目测。（2）香气：用辨香纸蘸取样品，用嗅觉辨别。2表面活性剂类型的判断 摇动后观察泡沫，有泡沫，试样含有表面活性剂组分；于上述试样水溶液中加入（23）mL稀盐酸溶液，再次摇动，观察。如果泡沫消失，试样只含有肥皂而无其它类型的表面活性剂；如果泡沫依然保留，表明有其它类型的表面活性剂存在。如果泡沫继续保持，则表明有烷基（芳基）磺

15、酸盐离子型表面活性剂、阳离子型或非离子型表面活性剂，或表面活性剂的混合物存在。3泡沫力的测定 泡沫力的测定采用罗氏-米尔法。4表面活性剂含量的测定 乙醇溶解法 指甲是由上皮细胞角化后重叠堆积而成的一种半透明状的硬板，供保护手指尖用。指甲油是用来修饰和增加指甲美观的化妆用品，染指甲已成为近代美容不可缺少的一个重要部分。指甲油的感官及理化指标见表 指甲油感官及理化指标 三、指甲油的质量分析 1牢固度的检验 用指甲油笔刷蘸指甲油涂在马口铁皮上，涂一层后放置24 h，用绣花针划成横五条、竖五条，每条距离间隔lmm，指甲油无显著脱落现象为合格。2干燥速度的检验 在20，用指甲油笔刷蘸指甲油涂在马口铁皮上

16、，干燥时间小于15 min为合格。3抗水性的检验 取经过干燥速度检验的马口铁皮，放置24 h后，将马口铁皮浸入水中，油涂层表面无气泡和脱落现象为合格。4.不挥发物的测定 拿掉指甲油瓶中的刷子，盖好瓶盖称量。将（1.01.2）g指甲油倒进质量已恒定的高65 mm、直径45 mm的称量瓶中，再称量指甲油瓶，两次称量的质量差就是样品质量。打开称量瓶盖，用手转动称量瓶，使指甲油以膜状覆盖称量瓶的内壁。然后在105 烘箱中加热2h，冷却，称量，即为不挥发物与称量瓶质量。市售染发的染发剂大多是由合成染料制得，外观上多为乳状和膏状。按类型又可分为染发膏、染发香波、染发水等。按染料分子能否进入毛发的内部，染发

17、剂又可分为暂时性、半永久性及永久性染发剂。除染料外，在染发剂中还有表面活性剂、溶剂、分散剂、整理剂等。这类产品的检测项目主要有：外观、香气、pH值、染色能力、氧化剂浓度、耐热、耐寒等。1染色能力的测定 1）氧化型染发剂 按说明书使用方法取适量试样，搅拌均匀，将放置在玻璃平板上的头发用试样涂抹均匀。按规定的方法和时间停留后，用水漂洗干净，晾干后在非阳光直射的明亮处观察。2）非氧化型染发剂 按说明书中使用方法，将放置在玻璃平板上的头发用试样涂抹均匀达到饱和状态。涂抹时应使试样均匀覆盖所有的发丝，但又不至引起粘连。然后按规定的方法和时间停留后，用水漂洗干净，晾干后在非阳光直射的明亮处观察。如产品说明

18、书中未规定等候时间，应停留15min后观察。2氧化剂浓度的测定 原理：准确称取试样约1g于150mL三角烧瓶中，然后加10 mL蒸馏水和10 mL体积比为11的硫酸，摇匀，用0.1molL的高锰酸钾溶液滴定至显粉红色，30s不褪色为终点。气雾和喷雾类化妆品主要产品有发用摩丝和定型发胶。摩丝是以高分子聚合物为主要原料的发泡定型护发剂，用于头发整理定型，补充头发的水分和油分，修饰美化发型。发胶为胶状定发用品，是一种透明非流动性的凝胶体，在头发上形成胶膜，增加头发光泽。气雾和喷雾类化妆品主要检测项目有感官检验（外观、香气）、稳定性检验（耐热试验、耐寒试验）、通用检验（pH值测定）、喷出率、起喷次数、

19、泄漏试验、内压力、总固体、残留物等。1泄漏试验 检验气压式化妆品是否存在喷射剂外泄的问题。适用于发用摩丝和定型发胶的泄漏试验。预先将恒温水浴箱调节至50，然后放入产品，3 min内以每分钟冒出气泡不超过5个为合格。2内压力试验 检验气压式化妆品的瓶内压力是否超过规定压力。适用于发用摩丝和定型发胶的内压力试验。取试样一瓶，除去帽盖套，拔去喷头，装上金属接管和压力表（01.0 MPa，精度1.5），置于恒温至25 水浴箱中30 min，将压力表朝下压，读出0.8 MPa。3喷出率试验 检验定型发胶的喷出率。取试样一瓶称量后，按罐上标注的正确喷射方法，喷出剂液，喷毕称量，将包装罐打开倒出余液擦干净后

20、称量空罐。喷出率大于95为合格。4残留物试验参照 本试验是检验发用摩丝喷完后的残留物。按使用说明将已称量的产品内容物全部喷出，然后称量，再将包装罐打开，倒出残留物擦干净后再称量空罐。残留物小于5 为合格5起喷次数试验 适用于检验定型发胶的起喷次数。将泵式喷发胶按动，至开始喷出液体止，计算按动次数。小于5次为合格。化妆品粉块包括胭脂、眼影和粉饼等，一般由颜料、粉体、胶合剂和香料等混合后经压制而成的粉饼状。其感官、理化指标见表胭脂感官、理化指标 1涂擦性能 将试样盒打开，置于（501）的恒温箱中，保持24 h后取出，恢复室温后，用产品所附粉扑或粉刷在块面不断轻擦，随时吹去擦下的粉粒。擦拭100次，

21、观察油块大小。2疏水性 从粉饼表面将粉轻轻刮下，用80目筛子筛过，称取0.1 g过筛物于100 mL水中，观察30min，应无下沉。3跌落试验 粉盒置于50cm高度，粉盒底部朝下，水平地自由跌落。打开粉盒观察。依次逐份记录粉盒、镜子等的破碎、脱落情况、粉块碎裂情况。当出现破损不大于1/5时则为合格。指标主要：外观、气味、pH、游离氨含量、疏基乙酸铵含量等 1游离氨含量测定 用移液管吸取冷烫液10 mL于100 mL容量瓶中用水稀释至刻度，再用移液管吸取10 mL放入300 mL锥型瓶中，加50 mL水，准确加入25 mLc(1/2H2SO4)0.l molL的硫酸标准溶液。加热至沸（12）mi

22、n，冷却后加入23滴0.1 的溴甲酚绿-甲基红混合指示剂。用c(NaOH)0.l molL的氢氧化钠标准溶液滴定至溶液由红变绿为终点。2巯基乙酸铵含量的测定 精确吸取冷烫液2 mL，置锥型瓶中，加水60 mL，体积比为1 10的硫酸10 mL，l 的淀粉指示剂2 mL，以c(1/2I2)0.1 mol/L的碘标准溶液滴定至溶液呈稳定的蓝色即为终点。香水类化妆品包括香水、古龙水和花露水，其主要作用是散发香气，它们之间只是香精的香型和用量、酒精的浓度等不同而已，主要成分都是香精、酒精和水等 1色泽 取样于25 mL比色管内，在室温和非阳光直射下目测。2香气 先将等量的试样和规定试样分别放在相同的容

23、器内，然后按下列程序进行鉴定。用（0.51.0）cm宽，（1015）cm长的吸水纸作为评香纸，分别蘸取试样和标样约（l2）cm（两者须接近），用嗅觉来鉴定。除辨其当时的香气外，还要鉴别其在挥发过程中的全部香气应与规定相符，无异杂气味。3清晰度 原瓶在室温和非阳光直射下距观察者30cm处观察。香粉系人的面部护肤品，由粉体基质、护肤物和芳香物等组成。具有抵御风沙扑打，减弱高温刺激及紫外线伤害，遮蔽或弥补面部瑕疵，芳肌等作用。爽身粉系人的体部护肤卫生品，由粉体基质、吸汗剂等组成。浴后使用，具有吸汗、爽肤、芳肌等作用。痱子粉系人的体部护肤卫生品，由粉体基质、吸汗剂、杀菌剂等组成。具有吸汗杀菌、防痱、止

24、痱等作用。1感官检验 （1）粉体:取适量粉样，置于白色衬物上，在室内光亮处，用肉眼观察粉体。（2）色泽:取适量粉样，置于白色衬物上，在室内光亮处，用肉眼观察粉体。（3）香气:取适量粉样，涂抹在皮肤上，用鼻子嗅察。2细度测定 称取约5g粉体，置于120目筛内，用软毛刷刷落粉体，称取筛出物质量。测试两次，取平均值 8.4 化妆品中有害元素含量分析 测定砷的方法有斑点比色法、银盐比色法、原子荧光光谱法和原子吸收光谱法等。二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法 1.原理 经灰化或消解后的试样，在还原剂作用下五价砷还原为三价砷。三价砷与新生态氢生成砷化氢气体。通过用乙酸铅溶液浸泡的棉花除去硫化氢干扰，然后与溶于

25、三乙醇胺、氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用，生成棕红色的胶态银，可进行比色定量。双硫腙萃取分光光度法 原子吸收分光光度法 8.5 化妆品微生物检验方法 化妆品中，特别是一些高级的护肤膏等含有蛋白质、氨基酸、维生素以及各种植物的提取液等营养成分较高的物质，为霉菌、细菌等微生物的滋生、繁殖提供了良好的生长条件，影响化妆品的质量和并危害人体健康。我国药品微生物检验法规定，乳剂或外用液体每克（或每毫升）含杂菌数按品种不同控制在（5001000）个 在此，主要讨论化妆品微生物检验时样品的采集，细菌总数测定，粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的测定。8.5.1 化妆品微生物标准检验方法总则 检验方法总则

26、按国家标准（GB 7918.1-1987）执行，包括样品的采集及注意事项，供检样品的制备，不同类型的样品的检样制备的统一标准。1样品的采集及注意事项 （1）所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10 g或10 mL；包装量小的样品，取样量可酌减。（2）供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。（3）接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。（4）若只有一个样品，而同时需做多种分析，如细菌、毒理

27、、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其它分析。（5）如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。2供检样品的制备 （1）培养基和试剂 1）生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶解于1000 mL蒸馏水中，分装入加玻璃球的三角瓶中，每瓶90 mL，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。2）SCDLP液体培养基 制备方法：将上述成分混合后，加热溶解，调节pH为7.27.3，分装后，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25 左右使用。3）灭菌液体石蜡和吐温80。（3）不同类型样品制备 1）水溶性

28、的液体样品：取10 mL加到90 mL灭菌生理盐水中，如样品少于10 mL，仍按10倍稀释法进行。2）油性液体样品：取样品10 mL，先加5 mL灭菌液体石蜡混匀，再加10 mL灭菌吐温80，在（4044）水浴中振荡混合10 min，加入灭菌的生理盐水75 mL（在4044 水浴中预温），在（4044）水浴中乳化，制成（1 10）的悬浮液。3）亲水性半固体样品：称取10 g样品，加到已加有90 mL灭菌生理盐水并带玻璃球的经过灭菌的三角瓶中，充分振荡混匀，放入32 水浴静置15 min。用其上清液作为（1 10）的稀释液。4）疏水性半固体样品：称取10 g样品，放到经灭菌的研钵中，加10 mL

29、灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10 mL灭菌吐温80，研磨，等溶解后，加70 mL灭菌生理盐水，在（4044）水浴中充分混合，制成（1 10）的稀释液。如有均质器，上述水溶性膏霜、半固体样品、粉剂固体样品，可称取10 g加90 mL灭菌生理盐水，均质（12）min；疏水性膏霜及眉笔、口红笔等，称取10 g加90 mL SCDLP液体培养基或1 g样品加l mL灭菌液体石蜡、l mL灭菌吐温80、7 mL灭菌生理盐水，均质（35）min。8.5.2 细菌总数测定 细菌总数系指1 g或1 mL化妆品中所含的活菌数量。测定细菌总数可用来判断化妆品被细菌污染的程度，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据

30、。这里主要介绍标准平板计数法。1测定原理 化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性。因此测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37 培养48 h）生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的细菌总数。测定步骤 用灭菌吸管，吸取按1 10稀释的检样2 mL分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL，另取l mL注入到9 mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，使成1 100的稀释液，吸取2 mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1 1000、1 10000等，每种稀释度应换1支吸管。将熔化

31、并冷至（4550）的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15 mL，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37 培养箱内培养48 h。菌落计数方法 先用肉眼观察，对菌落数进行计数，然后再用放大510倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。8.5.3 粪大肠菌群的检验 粪大肠菌细菌来源于人和温血

32、动物的粪便。检出粪大肠菌群表明该化妆品已被粪便污染，有可能存在其它肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。1测定原理 检验方法是根据粪大肠菌群所具有的生物特征，如革兰氏阴性无芽孢杆菌在44 培养（2448）h能发酵乳糖产酸并产气，能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质。3培养基和试剂 （1）乳糖胆盐培养基 制备方法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀、分装试管（每支试管中加一个小倒管），在69 kPa压力下灭菌20 min。（2）双倍浓度乳糖胆盐培养基 上述成分不变，蒸馏水量不变，其它成分加倍。（3）伊红美兰（EMB

33、）琼脂 制备方法：先将琼脂加到900 mL蒸馏水中，加热溶解，然后加磷酸氢二钾、乳糖及蛋白胨混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000 mL，校正pH为7.27.4。分装于烧瓶内。在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min，备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂。冷却至60 左右，以无菌方式加入经灭菌的伊红美兰溶液，摇匀，倾注平皿备用。（4）蛋白胨水（作靛基质试验用）制备方法：将上述成分加热熔化，调pH为7.07.2，分装小试管，在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min。（5）靛基质试剂 柯凡克试剂：将5 g对二甲氨基苯甲醛溶解到75 mL戊醇中，然后缓缓加入浓盐酸25 mL。试验方法：接种细菌于

34、蛋白胨水中，于44 培养（2448）h。沿管壁加柯凡克试剂（0.3O.5）mL，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。（6）革兰氏染色法 染液制备：2）染色法 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染l min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用l min，水洗。滴加95 酒精脱色，约30 s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，10 s后水洗。滴加复染液，复染l min，水洗。待干，镜检。3）染色结果 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。如用1 10稀释石碳酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10 s。步骤

35、 （1）取10 mL 110稀释的样品，加到10 mL双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44 培养箱中培养（24480h。如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。（2）如产酸产气，则划线接种到伊红美兰琼脂平板上，在37 培养（1824）h，同时取该培养液（12）滴接种到蛋白胨水中，在44 培养24 h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长，大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为大肠菌群，均应注意挑选。（3）挑选上述可疑菌落，涂片做革兰氏染色镜检。（4）在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5 mL，观察靛基质反应，阳性者液

36、面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。检验结果 平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阳性短杆菌，靛基质试剂验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。8.5.4 绿脓杆菌的检验方法绿脓杆菌在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在。它对人体致病，常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。因此，在化妆品标准中规定不得检出绿脓杆菌。1检验原理 其检查方法是根据绿脓杆菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外，还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42 下生长等。可与类似菌相区别。8.5.5 金黄色葡萄球菌检验 金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄菌有重要意义。1检验原理 先增再分离方法。根据本菌特有的形态及培养特性，用Baird-Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征来鉴别。谢 谢