细菌学检验课件.ppt

1、此此ppt下载后可自行编辑下载后可自行编辑细菌学检验第一节第一节一、概述一、概述假单胞菌属假单胞菌属假单胞菌属一大群氧化分解葡萄糖、专性需氧氧化酶阳性（少数菌种阴性）、有鞭毛的革兰阴性杆菌。生化反应非常相似，代表菌种为铜绿假单胞菌。（一）分类根据伯杰细菌鉴定手册，按照rRNArRNA同源性，假单胞菌属分为5 5个群和未定rRNArRNA同源群的有关种。临床常见的多位于第群和第群。（二）临床意义（二）临床意义1 1、自然界分布广泛，可存在于医院各种环境中。2 2、在非发酵菌感染中占70-80%70-80%。3 3、是医院感染的主要病原菌（三）微生物学检验（三）微生物学检验1.检验程序（检验程序（

2、P135）2、鉴定、鉴定1 1）菌体形态2 2）培养温度3 3）氧的需求严格需氧4 4）营养要求5 5）色素6 6）耐受性强：理化因素和药物。假单胞菌（革兰染色）初步鉴定初步鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，氧化酶：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，氧化酶多数阳性。多数阳性。全面的生化反应全面的生化反应3 3、药敏试验：可采用、药敏试验：可采用K-BK-B法。选择的药物种类有法。选择的药物种类有1 1）-内酰胺类内酰胺类2 2）氨基糖苷类氨基糖苷类3 3）氟喹诺酮类氟喹诺酮类4 4）复方磺胺复方磺胺二、铜绿假单胞菌二、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，自然界分布广泛，喜潮湿；人体的体表

3、及与外界相通的腔道也有存在。是医院感染的重要病原菌。（一）临床意义（一）临床意义1、致病因子：细菌结构成分、毒素和酶类。2、在假单胞菌属细菌引起的临床感染中占70%。3、可引起机体各个系统的感染。4、眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜穿孔而失明。（二）微生物学检验（二）微生物学检验1 1、标本采集、标本采集1 1）临床标本2 2）院内感染检测多种环境标本2 2、标本直接检查、标本直接检查1 1）显微镜检查2 2）抗原检测3 3）核酸检测3、分离培养与鉴定、分离培养与鉴定1 1）形态学）形态学2 2）培养特性）培养特性1 1）专性需氧液体培养基有菌膜生长。2 2）温度：最适温度25-2

4、5-3030，4 4 不生长，42 42 生长3 3）产生多种水溶性色素（绿脓素、青脓素等）。4 4）培养时产生特殊气味，菌落表面有金属光泽5 5）血平板上可出现透明溶血现象。胶冻状菌落（MAC）麦康凯平板青青 脓脓 素素菌落形态菌落形态型：典型型。菌落扁平、大小不一，边缘不规则呈伞状型：大肠菌样型。菌落圆形，凸起，光滑，似大肠埃希菌菌落。型：粗糙型。菌落呈纽扣状，中央隆起，边缘扁平，表面粗糙有皱纹。型：粘液型。菌落隆起，表面光滑，常融合在一起，有粘性，可拉丝。型：侏儒型。生长缓慢，培养1818小时尚不见菌落生长4848小时后生长为细小菌落。不同培养基中常出现的生长情况不同培养基中常出现的生长

5、情况 液体培养基液体培养基：均匀浑浊生长，并形成菌膜。因产生多种水溶性色素，可使液体呈灰绿、蓝绿或黄绿色，液面下最明显。培养时间 延长色素扩散至全部液体培养基。普通琼脂平板普通琼脂平板：大小不一、边缘不整齐、扁平光滑、湿润、且常呈融合状态的绿色或黄绿色菌落，琼脂被染成绿色 血平板血平板：扁平、湿润有金属光泽，有生姜气味的灰绿色或黄绿色菌落菌落周围有透明溶血圈。SSSS、MACMAC：微小半透明菌落，48小时后菌落及周围常呈棕绿色。3 3、生化反应、生化反应1 1）氧化酶+、精氨酸水解+2 2）葡萄糖、木糖：O O型3)3)吲哚-4)4)明胶+/-+/-、枸橼酸盐+/-、硝酸盐还原+鉴定思路特征

6、明显者：溶血现象、氧化酶+、色素、特殊气味。特征不明显者：氧化酶+、精氨酸双水解酶+、氧化分解葡萄糖和木糖、4242可生长、枸橼酸盐+、特殊气味。与相似细菌的异同点与相似细菌的异同点试验试验氧化酶精氨酸水解氧化葡萄糖铜绿铜绿恶臭恶臭荧光荧光+荧光素4 4生长4242生长明胶液化气味绿脓素+-+-+/-+/-生姜气味腥臭味+-+-+-+无无-4 4、检验结果的分析与报告、检验结果的分析与报告1 1）感染多发生于抵抗力低下人群。2 2）无菌部位分离出此菌，特别是多次检出可确证。3 3）其它部位检出者，特别是儿童患者，应密切结合临床进行分析。4 4）具有多重耐药性。耐药机理有：产生多种-内酰胺酶外膜

7、蛋白的改变主动外排机制的增强生物膜的形成抗生素治疗过程中易发生耐药。第二节伯克霍尔德菌属一、洋葱伯克霍尔德菌二、马勒伯克霍尔德菌和伪马勒伯克霍尔德菌（鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌）1.1.潜在生物恐怖病原菌2.2.明显的流行病学资料3.3.潜伏期长4.4.不产生绿脓素和荧光素5.5.可选药物有限：四环素、头孢他啶、亚胺培南、复方新诺明第三节第三节窄食单胞菌窄食单胞菌（一）临床意义（一）临床意义（二）微生物特性（二）微生物特性形态构造：革兰阴性细长杆菌，有端鞭毛，无荚膜和芽胞。（三）微生物检验（三）微生物检验1 1、分离培养与鉴定、分离培养与鉴定营养要求：营养要求：无特殊要求，普通培养基

8、可生长。分离培养：分离培养：BAPBAP。经培养后形成圆形、中等大小、表面光滑、湿润边缘整齐、不溶血的菌落，但菌下的培养基常呈绿色。多数菌株产生黄色素嗜麦芽猫眼型菌落（中心透明）粘液型嗜麦芽（灰白两种）生化反应：生化反应：OXI-OXI-（但有些菌株在M MH H培养基上呈弱阳性）赖氨酸+、氧化麦芽糖比葡萄糖快。明胶+、七叶苷+与洋葱伯克霍尔德菌的异同点：与洋葱伯克霍尔德菌的异同点：试验试验嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌赖氨酸黄色素氧化酶甘露醇多粘菌素+S R S R 2、药敏试验、药敏试验 首选药物：首选药物：TMP/SMZ、环丙沙星、环丙沙星替卡西林替卡西

9、林/克拉维酸。克拉维酸。天然耐药：天然耐药：亚胺培南亚胺培南 药敏方法：药敏方法：稀释法或稀释法或E-test法法K-B法：复方新诺明、左氧氟沙星法：复方新诺明、左氧氟沙星米诺环素。米诺环素。第四节第四节不动杆菌属不动杆菌属不动杆菌属是一群不发酵糖类、氧化酶阴性硝酸盐还原试验阴性、无动力的革兰阴性杆菌。一、分类临床上现将不动杆菌属分为6 6种，既醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌、溶血不动杆菌、洛菲不动杆菌、琼氏不动杆菌和约翰逊不动杆菌。二、临床意义三三 微生物学检验微生物学检验1 1、形态、染色与构造：有些菌株有荚膜2 2、营养要求3 3、MACMAC生长、SSSS部分生长4 4、菌落特征5 5、

10、鉴定要点初步鉴定：菌体形态、染色特点、氧化酶动力、硝酸盐还原试验种间鉴别：生长的温度、溶血、枸橼酸盐葡萄糖的利用试验。6 6、药敏试验：K-BK-B法可用。鲍曼鲍曼L L型痰涂片型痰涂片鲍曼光滑型鲍曼链状排列（痰涂片）鲍曼脱色不足鲍曼粘液型菌落涂片鲍曼荚膜第十章第十章其他革兰阴性杆菌其他革兰阴性杆菌本章主要包括一些苛养菌和人畜共患病原菌苛养菌的定义苛养菌的定义:苛养菌是对营养要求高，培养条件苛刻,普通培养基上不生长或很难生长的一类细菌。体外培养时需添加生长因子或其它营养成分，提供特殊的生长环境，需要长时间才能检测到生长，故又称“难培养的细菌”。临床上常见的苛养菌：临床上常见的苛养菌：球菌：球菌

11、：肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。阴性杆菌：阴性杆菌：“HACEKHACEK”细菌群、军团菌属、布鲁菌属鲍特菌属等。“HACEKHACEK”细菌群由五个菌属组成H 嗜血杆菌属嗜血杆菌属A 凝聚杆菌属凝聚杆菌属C 心杆菌属心杆菌属E 艾肯菌属艾肯菌属K 金氏杆菌属金氏杆菌属苛养菌标本采集的方法与时机苛养菌标本采集的方法与时机1 1、一定要在抗生素治疗前采集标本。苛养菌对大多数抗生素敏感。2 2、尽量避免感染部位正常菌群对标本的污染因为快速生长细菌的覆盖会导致分离率大大降低3 3、及时将标本接种到适当的培养基是提高分离率的前提因为大多数苛养菌对干燥、寒冷的抵抗力较弱,标本离开机体后苛养菌存活

12、率十分低。第一节第一节嗜血杆菌属嗜血杆菌属嗜血杆菌属是一群革兰阴性小杆菌，因缺乏一些酶系统，因此培养时需加入新鲜血液，以提供所需的生长因子（X X、V V因子），故名嗜血杆菌。一、分类一、分类根据伯杰细菌分类手册，嗜血杆菌属隶属于巴斯德菌科。本菌属共包括1717个菌种，其中与临床有关的有9 9种，分别是流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、副嗜沫嗜血杆菌和迟缓嗜血杆菌。后三者现划归“凝聚杆菌属”。二、临床意义二、临床意义本属细菌中流感嗜血杆菌毒力最强其次是杜克雷嗜血杆菌和埃及嗜血杆菌它们可引起一些特征性的感染，而其它菌种毒力很低

13、，多为上呼吸道的正常菌群，很少致病，但儿童、老人及抵抗力低下的个体，是发生感染的危险人群，可引起各个系统的感染性疾病。三、微生物学检验三、微生物学检验（以流感嗜血杆菌为模式菌）（以流感嗜血杆菌为模式菌）（一）基本特性（一）基本特性1 1、形态、染色与构造：、形态、染色与构造：嗜血杆菌是一群无芽胞和鞭毛革兰阴性小杆菌，呈高度异质性。新分离菌株多呈双球形、球杆状或短链状，陈旧培养物中呈多形性（长杆状或丝状），产毒株在营养丰富的培养基上生长618小时出现小时出现荚膜，陈旧培养物中荚膜消失。2 2、培养特性：、培养特性：3 3、分型：、分型：生物型：根据对吲哚、脲酶和鸟氨酸反应的不同分为8 8个生物型

14、。血清型：根据荚膜多糖抗原分为6 6个血清型,b,b型毒力最强。4 4、抵抗力：、抵抗力：抵抗力较弱，对消毒剂和干燥敏感，人工培养易死亡。流感嗜血杆菌纯培养流感嗜血杆菌痰涂片（革兰染色）白细胞吞噬流感嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌，呈“铁轨”状（二）实验检查（二）实验检查1 1、标本采集：、标本采集：1 1）早期采集，立即送检。2 2）防止干燥。3 3）痰标本要做相应前处理。2 2、标本的直接检查：、标本的直接检查：直接显微镜检查：直接显微镜检查：革兰阴性小杆菌或多形态杆菌，结合临床症状，可做出初步诊断。抗原检测抗原检测荚膜肿胀试验等 核酸检测核酸检测3、分离培养与鉴定、分离培养与鉴定（1)1)分离培

15、养分离培养营养要求：高，生长中需要X X、V V因子。气体环境：生长时需要5%5%10%10%的COCO2 2环境。温度：3535培养基：兔血或马血最好羊血中含有水解V V因子的酶类 因此V V因子依赖的嗜血杆菌通常不能在含有完整红细胞的羊血琼脂上生长。如果要用羊血制作巧克力平板，应加入1.5mg/L1.5mg/L的NADNAD杂菌较多的标本应选用选择培养基（巧克力平板中加入303050mg/L的万古霉素或300mg/L杆菌肽，抑制G+菌生长）(2)(2)鉴定：鉴定：根据菌落特征、菌体形态、溶血情况卫星现象、X X、V V因子的需求试验定种。再做生化反应和荚膜肿胀试验定型。菌落特征菌落特征兔血

16、巧克力平板上为灰白色、中等大小、光滑、湿润的似露滴状菌落；兔血琼脂平板上菌落为细小露滴状，不溶血。羊血琼脂板上生长很差。卫星现象卫星现象卫星试验卫星试验原理：有溶血性的细菌（金葡菌等）在血平板生长时破坏红细胞，释放出X X、V V因子，另外金葡菌在生长过程中合成V V因子释放于培养基中，因此嗜血杆菌与金葡菌一起培养时，这些因子促进了嗜血杆菌的生长表现为靠近金葡菌的嗜血杆菌菌落较大，而远离者菌落较小，这一现象被称为“卫星现象”，这一试验也称为“卫星试验”。琼脂卫星试验（脑心琼脂、哥伦比亚琼脂等）：琼脂卫星试验（脑心琼脂、哥伦比亚琼脂等）：在不含血液的琼脂平板点种金葡菌所进行的卫星试验方法：方法：

17、密集划线接种待测菌，再点种金葡菌，培养后观察。流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌（兔血流感嗜血杆菌（兔血+X+X、V V因子）因子）流感粘液型菌落大菌落为奈瑟菌大菌落为奈瑟菌小菌落为嗜血杆菌小菌落为嗜血杆菌咽拭子培养（未加万古霉素）咽拭子培养（未加万古霉素）咽拭子培养（加万古霉素）咽拭子培养（加万古霉素）标本接种后点种金葡菌卫星现象琼脂卫星试验（脑心琼脂）X X、V V因子需求试验因子需求试验又称纸片法卫星试验又称纸片法卫星试验 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或0.50.5麦氏单位菌悬液涂抹接种。将X X、V V、X+VX+V因子三种纸片贴在接种细菌的平板上纸片间相距5cm5cm以上，（因为V V

18、因子分子量小，扩散距离远），否则会出现X X因子假阳性结果。培养后观察结果（X+V）因子结果阴性的几种可能原因待测菌死亡待测菌死亡培养基缺乏营养培养基缺乏营养孵育条件未满足孵育条件未满足纸片失效纸片失效X X、V V因子需求试验因子需求试验第二节第二节人兽共患微生物：布鲁菌属布鲁菌属既能感染动物又能感染人的微生物。包括病毒、细菌、螺旋体、立克次体。一、分类一、分类羊布鲁菌、牛布鲁菌、猪布鲁菌、绵羊布鲁菌狗布鲁菌和森林鼠(木鼠)布鲁菌。我国流行的主要是牛、羊、猪三种布鲁菌，羊最常见二、临床意义二、临床意义致病因素：侵袭力和内毒素 传染源：病兽。常见的为牛、羊、猪。易感人群：对人有极强的致病力。侵

19、袭力：强，可穿透完整的皮肤和粘膜进入宿主体内，且有很强的繁殖力和扩散能力。传播途径：皮肤直接接触、消化道。是导致布鲁菌病的病原体。主要症状：长期发热(波浪热)、多汗、关节痛及全身乏力和肌肉疼痛。三、微生物学检验三、微生物学检验（一）基本特性（一）基本特性1 1、形态结构与染色：、形态结构与染色：革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染，无鞭毛、无芽胞，光滑型菌株有微荚膜。常单个存在，很少成双或成短链。革兰染色常出现不规则结果，因为布鲁菌不能很好地被碱性复红染色，革兰染色着色弱，镜下呈“细沙状“。常用下列染色法。常用下列染色法。柯兹洛夫斯基染色法（柯氏染色）：柯兹洛夫斯基染色法（柯氏染色）：涂

20、片固定后，用0.5%0.5%的沙黄微加热2 2分钟，水洗；再用0.5%-1%0.5%-1%的孔雀绿染1 1分钟，水洗。待干后镜检。本菌为鲜红色，背景（其它细菌或细胞）为绿色绿色。对比非常好（为了有对比，常与大肠埃希菌混合涂片）。2 2、抗原构造：、抗原构造：本菌属抗原结构复杂，目前临床用于诊断的主要有A A抗原和M M抗原，两种抗原在各种布鲁菌种含量不同。羊布鲁菌：羊布鲁菌：牛布鲁菌：牛布鲁菌：猪布鲁菌：猪布鲁菌：A：M 约约1：20 A：M 约约20：1A：M 约约2：13、培养特性：、培养特性：专性需氧菌，营养要求较高，初次培养需要5%5%10%10%的CO2CO2环境最适温度35 35-

21、3737，最适PH6.7PH6.7。本菌生长缓慢，4 45 5天在血平板上长出较小无色、凸起的光滑或粗糙型菌落。生长中需要VB1VB1、烟酸和生物素，添加血液会增加检出，但不需要X X、V V因子。4、抵抗力、抵抗力自然界中抵抗力较强。自然界中抵抗力较强。（二）实验检查（二）实验检查1 1、标本采集2 2、标本直接检查3 3、分离培养与鉴定1)1)分离培养分离培养（1 1）培养基：血平板、马铃薯培养基、双相培养基、肝浸肉汤。（2）液体培养基：）液体培养基：培养培养24-4824-48小时，出现轻度混浊无菌膜；小时，出现轻度混浊无菌膜；7 7天后有菌膜形成天后有菌膜形成并形成粘性沉淀，不易摇散。

22、并形成粘性沉淀，不易摇散。（3 3）血平板：5-75-7天可形成细小、灰色不溶血菌落。（4 4）选择培养基：无色、半透明、圆形、表面光滑、边缘整齐中央稍凸起的菌落。有时出现黏液样或干燥的硬皮样菌落。（5 5）阴性报告：3030天后无生长者。2 2）鉴定：）鉴定：依据细菌形态学、生化反应、染料抑制试验、血清凝集试验。?细菌形态学（柯氏染色）初步报告生化反应：触酶+、氧化酶+/-+/-等。染料抑制试验（或生长试验）常用硫堇和复红，有商品供应的染料片剂方法类似于K-BK-B法药敏试验，药片周围出现抑菌圈为敏感（抑制），无抑制即生长（耐受）。也可将不同浓度、不同种类的染料加入培养基中，再接种细菌培养后

23、观察。4 4、抗体检测、抗体检测感染后两周可出现抗体，且随着病程的进展抗体效价不断升高。所以可利用多种免疫方法进行抗体的测定。第三节第三节 巴斯德菌属巴斯德菌属一、分类一、分类巴斯德菌属共有1010多种与人类疾病有关，但临床上最常见的多为多杀巴斯德菌。二、临床意义二、临床意义本菌属细菌广泛寄生于野生动物和家畜（猫、狗）的齿龈和鼻咽部，是引起动物感染的病原菌。人类感染多是通过被动物咬伤或抓伤而感染。可引起多系统感染及伤口感染。近年来，家养宠物增多，所以该病较为常见。三、微生物学检验三、微生物学检验1 1、形态结构与染色：革兰阴性小杆菌或球杆菌，常见两极浓染。无芽胞、无鞭毛、有荚膜，多单个存在，有

24、时成对或短链。2 2、培养特性：需氧 或兼性厌氧，最适温度3535，在含血培养基上生长良好；液体培养基呈混浊生长。肠道选择培养基上多不生长3 3、抗原构造：有两种抗原成分（菌体抗原和荚膜抗原），与本菌的毒力有关，也可用于分型。4 4、生化反应：氧化酶、触酶、吲哚皆阳性，脲酶阴性、发酵葡萄糖多杀巴斯德菌5、分离培养、分离培养BAPBAP：灰白色不溶血的小菌落，有荚膜的菌株呈粘液型液体：光滑型和粘液型菌株呈均匀混浊；粗糙型菌株形成细小颗粒状沉淀。肠道选择培养基：多不生长或生长很差不需要X X、V V因子阶段性复习题阶段性复习题1 1、铜绿假单胞菌的鉴定要点有哪些？2 2、怎样进行流感嗜血杆菌的鉴定

25、？3、怎样对不动杆菌进行初步认定？4、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌的异同点有哪些？第十一章第十一章弧弧菌菌科科弧菌科是一群兼性厌氧、菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性杆菌。大多氧化酶阳性、发酵葡萄糖、具有一端单一鞭毛，运动活泼，某些菌株生长需要一定量的NaCl.NaCl.伯杰细菌鉴定手册将本科细菌分为四个属，分别是弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。引起人类感染的主要是前三属的细菌，而发光杆菌属存在于海水中，对人不致病。第一节第一节弧弧 菌菌 属属弧菌属细菌广泛存在于自然界，以淡水和海水中最多。共有3636种，与人类感染相关的有1212种，其中的霍乱弧菌和副溶血弧菌最为重要分

26、别可引起霍乱和食物中毒。其它种类可引起人类腹泻和肠道外的感染。本属细菌的一些主要特点：本属细菌的一些主要特点：1、生化反应、生化反应OXI+OXI+（麦氏弧菌除外）、GLUGLU（F F）、O/129 SO/129 S2、嗜盐性、嗜盐性钠离子可刺激细菌生长，除霍乱弧菌和拟态弧菌外，其它所有弧菌绝对需要钠离子，某些细菌无盐不生长。3、生长特性、生长特性BAPBAP可出现各种溶血现象，肠道选择培养基上为糖不发酵菌落。4 4、选择培养基：TCBSTCBS琼脂和碱性蛋白胨琼脂。分解蔗糖的菌种在TCBSTCBS琼脂形成黄色菌落，不分解者为绿色菌落；某些弧菌在此培养基上不生长。一、霍乱弧菌一、霍乱弧菌（一

27、）临床意义（一）临床意义霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，人是其唯一易感者。霍乱发病急、传播快、死亡率高，属国际检疫传染病，被我国列为甲类传染病。霍乱弧菌目前有155155个血清群，其中的O O1 1群有两种生物型即古典型和埃尔托型。自18171817年以来，全世界发生了七次由O O1 1群霍乱弧菌引起的霍乱大流行。19921992年1010月在印度和孟加拉国等南亚国家发现了一个新的霍乱弧菌血清型，与当时的抗血清O O1 1O O138138皆不凝集，故命名为血清群O O139139。O O1 1和O O139139引起霍乱,其它血清型可引起人类的胃肠炎，不被O O1 1群血清凝集称非O

28、O1 1群霍乱弧菌。霍乱特征性粪便：米泔样（二）微生物学检验（二）微生物学检验1 1、标本采集和运送标本种类：粪便（米泔样）、呕吐物肠内容物、肛拭等。应在发病早期，抗菌药物应用之前采集最好就地接种，不能立即接种者应放臵于运送培养基中，密封后由专人快速送检2、形态特征：、形态特征：O139有荚膜有荚膜典型形态：革兰染色阴性，稍弯呈 弧形或逗点状。特殊排列：米泔样便涂片可见细菌头尾相连呈“鱼群样”排列。特殊的运动：悬滴法镜检可见细菌运动如穿梭样或流星样。霍霍 乱乱 弧弧 菌菌3 3、抗原成分、抗原成分霍乱弧菌有耐热（1002h1002h不被破坏）的菌体抗原（O O）和不耐热（1002h1002h即

29、被破坏）的鞭毛抗原（H H）后者的特异性低，是弧菌属的共同抗原，而前者是霍乱弧菌分群和分型的依据，具有群和型特异性。根据O O抗原的不同，现有155155个血清型，其中O1O1群霍乱弧菌的O O抗原由A A、B B、C C三种抗原因子组成，根据其不同组合可分成三个血清型。霍乱弧菌的诊断血清霍乱弧菌的诊断血清O1O1群多价血清、O139O139血清因子血清A A、因子血清B B、因子血清C CO1O1O139O139分型血清霍乱弧菌霍乱弧菌O1O1群血清型群血清型型别型别O抗原成分抗原成分小川型小川型A、B稻叶型稻叶型A、C彦岛型彦岛型A B CA A为群特异性抗原，而B B、C C为型特异性抗

30、原。4.4.标本直接检查1)1)涂片染色镜检：鱼群样排列2 2）动力和制动试验：阳性可推定。3 3）快速诊断：荧光抗体染色、O1O1群单克隆抗体凝集试验。4 4）霍乱毒素的测定ELSIA法和胶乳凝集试验有很高的灵敏度和特异性，但在我国很少应用法和胶乳凝集试验有很高的灵敏度和特异性，但在我国很少应用5、培养特性、培养特性 营养要求营养要求不高，普通琼脂生长良好。0 06%NaCl6%NaCl培养基上可生长 环境要求环境要求需氧或兼性厌氧，16164444可生长。具怕酸耐碱性具怕酸耐碱性PH 6.8PH 6.810.210.2可生长，初次分离常选用PH8.5PH8.5的碱性胨水,进行选择性增菌培养

31、。在其表面可形成菌膜。分离培养基分离培养基TCBSTCBS（黄色菌落）、含亚碲酸钾的培养基（中心灰褐色的菌落）溶血现象溶血现象埃尔托生物型因产溶血素，BAPBAP上出现透明溶血环。增菌培养：碱性胨水中6 68h8h，液体表面形成大量菌膜。分离培养：取液体培养基上的菌膜，接种于固体培养基TCBSTCBS、4 4号琼脂或庆大霉素琼脂平板上。TCBSTCBS（指示剂为溴麝香草酚蓝）上形成的菌落较大，因分解蔗糖产酸而呈黄色。用于分离致病性弧菌用于分离致病性弧菌4 4号琼脂或庆大霉素琼脂平板（均含亚碲酸钾）上，因细菌可将碲离子还原成元素碲，所以菌落呈灰褐色。强选择培养基强选择培养基，专供专供 霍乱弧菌分

32、离。霍乱弧菌分离。TCBSTCBS培养基（霍乱弧菌）培养基（霍乱弧菌）6、鉴定、鉴定动力和制动试验：取玻片两张，一张用来观察动力另一张用于观察制动试验。血清凝集试验：本试验主要用于霍乱弧菌的血清型鉴定（两个生物型相同），所用诊断血清为多价O1O1、B B因子血清和C C因子血清，一般用玻片法。+-+-小川型+-+-+稻叶型+彦岛型两种生物型的鉴别两种生物型的鉴别试验试验古典型古典型埃尔托型埃尔托型羊红细胞溶血鸡红细胞凝集V-PV-P试验多粘菌素B B组噬菌体裂解D+S R+组噬菌体裂解+霍乱弧菌的鉴定试验霍乱弧菌的鉴定试验霍乱红试验：霍乱弧菌具有色氨酸酶和还原硝酸盐为亚硝酸盐的能力将待测菌接种

33、于含硝酸盐的蛋白胨水中，培养后所产生 的两种产物结合成亚硝酸盐吲哚，滴加浓硫酸后呈现蔷薇色。这是弧菌属细菌所共有 的性质。粘丝试验：弧菌属的推测鉴定的有用方法将0.5%0.5%的去氧胆酸钠与霍乱弧菌混匀成浓的菌悬液，1 1分钟后悬液由混变清，并变得粘稠，用接种环挑取时有粘丝形成。这也是弧菌属细菌所共有的性质（副溶血等除外）O/129O/129敏感试验：10ug10ug、150ug,150ug,纸片周围有任何大小的抑菌圈即为敏感。O1O1群和其它非O1O1群霍乱弧菌均敏感，但已有耐药菌株出现。O139O139群耐药。耐盐性试验：在含0 06%NaCl6%NaCl培养基上可生长。粘丝试验鸡红细胞凝

34、集试验二、副溶血弧菌二、副溶血弧菌（一）临床意义副溶血弧菌具有嗜盐性，所以又称嗜盐弧菌。它存在于海水、海底沉淀物、鱼虾贝类及盐渍加工的海产品中。主要引起食物中毒和急性腹泻，也可引起伤口感染和败血症。副溶血弧菌的主要致病因素是产生耐热溶血素，它具有 溶血毒性：溶血毒性：人和兔红细胞溶血性较高，对马红细胞不溶血。细胞毒性细胞毒性 心脏毒性心脏毒性 肠毒性肠毒性（二）微生物学检验（二）微生物学检验1 1、形态构造：革兰阴性杆菌，有极单鞭毛无芽胞、荚膜。2、分离培养、分离培养气体环境：兼性厌氧，但有氧生长更好，无氧生长很差。营养要求：不高，但须加入适量的氯化钠。无盐培养基不长，氯化钠高于8%8%不长。

35、最适浓度为3.5%3.5%温度与PHPH：最适温度30-30-3737；最适PH7.7-8.0PH7.7-8.0TCBSTCBS：蓝绿色菌落（不发酵蔗糖）。普通羊血BAPBAP：不溶血或-溶血。神乃川现象：我妻培养基上产生?溶血现象。培养基中含7%7%的氯化钠、O O型人血或兔血、甘露醇。嗜盐菌选择平板：菌落大、无粘性。SSSS：蜡滴状的菌落，有辛辣味，久之不易刮下。副溶血弧菌（TCBS）3、鉴定：鉴定：1 1）基本反应：氧化酶试验+、葡萄糖+、乳糖-O/129O/129（150ug150ug）S S；2 2）NaClNaCl生长试验O/129O/129（10ug10ug）R R不含NaClN

36、aCl和10 NaCl10 NaCl培养基中不长；3%NaCl3%NaCl和7%NaCl7%NaCl蛋白胨水中生长。3 3）氨基酸代谢；赖+、鸟+、精双-4 4）神乃川现象：5 5）毒素测定：第二节第二节气单胞菌属和邻单胞菌属气单胞菌属和邻单胞菌属气单胞菌属和邻单胞菌属是氧化酶阳性，具有端鞭毛的革兰阴性杆菌。一、气单胞菌属（一）分类伯杰细菌鉴定手册（19841984）将气单胞菌属分为四个种，近年来根据DNADNA杂交的结果,有几个新的种名被提出，如威隆气单胞菌等，但有很多基因种未命名,目前有2323个种和1212个亚种。（二）临床意义（二）临床意义气单胞菌是水中的常居菌，污水中密度较高，其中杀

37、鲑气单胞菌为嗜低温菌，其它种均为嗜中温菌。临床上引起的感染有：1 1、肠道内感染：感染常见于5 5岁以下儿童和成人，有明显的季节性，是夏季腹泻的常见病原菌之一。其主要致病物质为溶血毒素和细胞毒素。2 2、肠道外感染：气单胞菌可引起多组织和部位感染，但以皮肤和软组织感染多见，多数患者有与水或水生生物接触史，嗜水气单胞菌和威隆气单胞菌较多见。（三）微生物特性（三）微生物特性1、形态特征：、形态特征：革兰阴性直杆菌，有时呈球杆状有鞭毛。2、营养要求：、营养要求：普通培养基可生长。3、温度要求：、温度要求：嗜冷菌在3535以下生长，3737不 生长；嗜中温菌群在10104242之间生长。4、TCBS和

38、：和：不生长，可与弧菌属鉴别。5、基本生化反应：、基本生化反应：氧化酶和触酶+、硝酸盐还原+、葡萄糖F F、O/129(RO/129(R)（四）微生物检验（四）微生物检验1、检验程序、检验程序2、标本采集、标本采集根据不同疾病可采取粪便、血液脓液、脑脊液、尿液标本。3、分离培养与鉴定、分离培养与鉴定1 1）分离培养：）分离培养：增菌 培养：碱性胨水，液体培养基中浑浊生长。分离培养基：MAC MAC：豚鼠气单胞菌发酵乳糖，应与肠杆菌科细菌鉴别。其它菌种不发酵乳糖。BAPBAP（20ug/ml20ug/ml氨苄西林）：嗜水气单胞菌和威隆气单胞菌菌落有溶血现象。菌落灰白色，光滑、湿润凸起。）生化鉴定

39、：）生化鉴定：科、属间的鉴别：科、属间的鉴别：氧化酶试验、葡萄糖发酵试验、O/129O/129敏感试验（R R）、肌醇产酸、三种氨基酸嗜盐性、TCBSTCBS上是否生长。种的鉴定：种的鉴定：主要鉴别三个常见菌种，嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和威隆气单胞菌。主要依据V-PV-P、阿拉伯糖、氨基酸二、邻单胞菌属二、邻单胞菌属邻单胞菌属只有一个种，既类志贺邻单胞菌。主要引起胃肠炎，好发于夏季，临床症状可以是短时间的水样泻或痢疾样腹泻。另外，还可引起抵抗力低下人群的肠道外感染，如菌血症、脑膜炎、伤口感染等。（一）生物学特性（一）生物学特性1、形态结构与染色：、形态结构与染色：革兰阴性直杆菌，可成双或短链

40、排列，有鞭毛。2、培养特性：、培养特性：1 1）最适温度3535，但8 84545可生长。2 2）BAPBAP上生长良好，不溶血，氨苄西林可抑制其生长。3 3）MACMAC、SSSS为乳糖多不发酵菌落，某些迟缓发酵乳糖，时间延长出现阳性。3、生化反应：、生化反应：赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解三者阳性和肌醇阳性为本菌主要鉴定要点。（二）微生物检验（二）微生物检验1、标本采集与检验程序：、标本采集与检验程序：同气单胞菌属。2 2、与相似细菌的鉴别、与相似细菌的鉴别（1）与志贺菌属细菌的鉴别：）与志贺菌属细菌的鉴别：试验试验类志贺邻单胞菌类志贺邻单胞菌志贺菌志贺菌OXI +MOT +（2）与气单胞菌属细菌的鉴别：与气单胞菌属细菌的鉴别：试验试验肌醇肌醇类志贺邻单胞菌类志贺邻单胞菌气单胞菌属细菌气单胞菌属细菌+O/129 S R（3）与弧菌属细菌的鉴别：）与弧菌属细菌的鉴别：试验试验无盐蛋白胨水无盐蛋白胨水类志贺邻单胞菌类志贺邻单胞菌生长生长弧菌属弧菌属大多不生长大多不生长TCBS 不生长不生长6%NaCl培养基培养基不生长不生长生长生长生长生长此此ppt下载后可自行编辑下载后可自行编辑谢谢 谢谢 大大 家家