流式细胞仪检测凋亡和细胞周期等应用课件.ppt

1、什么是流式细胞仪流式细胞仪实物BD FACSVantageBD-Calibur 4.4.应用范围应用范围二、流式细胞仪的工作原理和基本结构二、流式细胞仪的工作原理和基本结构液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。基本结构基本结构三、流式细胞仪可检测到的细胞参数颗粒度颗粒度细胞大小细胞大小血液涂片血液涂片外周全血细胞散射光双参数点图外周全血细胞散射光双参数点图 荧光染料被激发而发射的光信号。荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色定量染色 荧光信号大小荧光

2、信号大小 被标记组分含量的定量被标记组分含量的定量 多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光光信号分离，导向光信号分离，导向各探测通道接收并转化为电信号。各探测通道接收并转化为电信号。光信号收集光信号收集三三 数据处理及数据处理及流式报告FSC SSC FSC SSC FL1 FL1 FL2 FL2 FL3FL3对数对数 线性线性 线性线性 线线性性 对数对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）散点图 密度图二维等高图直方图图 报告中常见的几种流

3、式细胞图R1File:4Acquisition Date:06-Mar-03QuadEvents%Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析图中100101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞 五、流式细胞术的应用（Propidium iodidePropidium iodide碘化丙啶），碘化丙啶

4、），图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图 DNADNA细胞周期分析细胞周期分析细胞周期细胞周期 200 400 600 8001000DNADNA含量含量细细胞胞数数量量2 2倍体倍体异倍体异倍体4 4倍体倍体肿瘤组织中的各种肿瘤组织中的各种DNADNA倍体倍体含量与凋亡关系含量与凋亡关系1.1.肿瘤诊断肿瘤诊断2 2倍体倍体异倍体异倍体4 4倍体倍体肿瘤组织中的各种肿瘤组织中的各种DNADNA倍体倍体2.2.凋亡研究凋亡研究Annexin V AssayAnnexin V AssayR1File:4Acquis

5、ition Date:06-Mar-03QuadEvents%Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死Date acquired:14-Jan-03File:7Gy 4hr.001Source:dongboDIPLOID:100.00%Dip G0-G1:73.12%at 48.16 Dip G2-M:9.59%at 96.33 Dip S:17.29%G2/G1:2.00 Dip

6、%CV:6.04Apoptosis:13.66%Mean:27.48 R1图图 FCM FCM测试细胞周测试细胞周 期分布和凋亡期分布和凋亡根据凋亡细胞的特点来检测根据凋亡细胞的特点来检测 三）三）R1M1M1流式细胞术检测细胞表型 四）四）白血病的免疫分型白血病的免疫分型 五）五）细胞内蛋白的分析：细胞内蛋白的分析：荧光信号荧光信号荧光样本制备荧光样本制备双色直接染色双色直接染色 端粒（荧光蛋白）端粒（荧光蛋白）FCM检测胞内钙离子、膜电位和线粒体功能M1阴性界限划分完全是根据阴性对照！如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平

7、、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。六六.分选：分选：488 nm laser488 nm laser+-Fluorescence Activated Fluorescence Activated Cell SortingCell SortingCharged PlatesCharged PlatesSingle cells sortedSingle cells sortedinto test tubesinto test tubesFALS SensorFALS SensorFluorescence detectorFluorescence detector