植物组织培养 绪论课件.ppt
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1、第一章第一章 绪论绪论本章主要内容:本章主要内容:第一节第一节 植物组织培养的含义、类型与特植物组织培养的含义、类型与特点点第二节第二节 植物组织培养的基本理论植物组织培养的基本理论第三节第三节 植物组织培养的发展与应用植物组织培养的发展与应用教学目标:教学目标:掌握组织培养的概念和类型及理论依据;掌握组织培养的概念和类型及理论依据;掌握组织培养的特点;掌握组织培养的特点;了解组织培养发展史及在专业学习中的地位,树了解组织培养发展史及在专业学习中的地位,树立学习本课程的信心;立学习本课程的信心;初步掌握组织培养在实践上的应用。初步掌握组织培养在实践上的应用。重点难点:组织培养的概念、类型及理论
2、依据;重点难点:组织培养的概念、类型及理论依据;组织培养在社会实践中的应用。组织培养在社会实践中的应用。1-1 植物组织培养的含义、类型与特点植物组织培养的含义、类型与特点一、一、植物组织培养(tissue culture)的含义在无菌条件下,将离体植物的器官、组织、细胞或原生质体在人工配制的培养基上,并给予适当的培养条件使其长成完整植株或生产次生代谢物质 的过程和技术。也称离体培养(Invitro culture)。二、此定义内涵:二、此定义内涵:1 1、无菌条件:外植体、培养基、培养容器、接种、无菌条件:外植体、培养基、培养容器、接种工具、操作环境、培养环境等。工具、操作环境、培养环境等。
3、2 2、外植体:、外植体:从健康植株的特定部位或组织,如根、从健康植株的特定部位或组织,如根、茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等,选择茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等,选择用于组织培养的起始材料,称之为外植体。包括用于组织培养的起始材料,称之为外植体。包括营养器官、生殖器官、组织、细胞等。营养器官、生殖器官、组织、细胞等。关键条件,组培成功的保障。花(花(flower)叶(叶(leaf)茎(茎(stem)根(根(root)果实(果实(fruit)种子(种子(seed)3 3、培养基:、培养基:是植物组织培养的重要基质,是植物组织培养的重要基质,它提供植物生长所需的营养物质。它提供植物生长
4、所需的营养物质。人工配人工配制,成分确定。制,成分确定。4 4、组培的理论基础:植物细胞的全能性。、组培的理论基础:植物细胞的全能性。5 5、激素、激素 :调控培养物的状态和发育方向,:调控培养物的状态和发育方向,实现不同的实验目的。实现不同的实验目的。6 6、封闭培养、封闭培养 :通过封口材料实现气体交换。:通过封口材料实现气体交换。7 7、培养条件:人为控制。、培养条件:人为控制。三、植物组织培养的四要素三、植物组织培养的四要素(1)无菌)无菌(2)培养材料:)培养材料:器官:根、茎、叶、花、果实器官:根、茎、叶、花、果实 组织:花药组织、胚乳、皮层等组织:花药组织、胚乳、皮层等 细胞:体
5、细胞(细胞:体细胞(2n)、生殖细胞()、生殖细胞(n)原生质体原生质体(3)培养基)培养基(4)培养条件)培养条件:温度、光照、湿度:温度、光照、湿度 等等四、与组培有关的术语四、与组培有关的术语1、植物细胞全能性:植物细胞具有该植物、植物细胞全能性:植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。育成完整植物体的潜在能力。原理:植物体的每一个细胞都包含有该物种原理:植物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因,从理论上讲,植物个体所必需
6、的全部基因,从理论上讲,植物体的每一个活细胞都应该具有全能性。体的每一个活细胞都应该具有全能性。2、外植体:从健康植株的特定部位或组织,如、外植体:从健康植株的特定部位或组织,如根、茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等,根、茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等,选择用于组织培养的起始材料,称之为外植体。选择用于组织培养的起始材料,称之为外植体。供离体培养用的植物器官统称外植体。供离体培养用的植物器官统称外植体。3、愈伤组织:在人工培养基上由外植体长出来、愈伤组织:在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。的一团无序生长的薄壁细胞。4、分化:具有分裂能力的分生细胞停止分裂,、分化:具
7、有分裂能力的分生细胞停止分裂,形成具有各种特殊构造和机能的细胞组织和形成具有各种特殊构造和机能的细胞组织和器官的发育过程。器官的发育过程。5、脱分化(去分化)、脱分化(去分化):已经分化的细胞在一已经分化的细胞在一定因素的作用下,改变原来的发展方向,重定因素的作用下,改变原来的发展方向,重新恢复分裂能力的过程。新恢复分裂能力的过程。6、再分化:愈伤组织在合适的条件下,重新、再分化:愈伤组织在合适的条件下,重新分化形成具有各种特殊功能或结构的器官和分化形成具有各种特殊功能或结构的器官和组织的过程。组织的过程。分化分化脱分化再分化7、胚状体:非合子细胞形成的胚状结构,如兰花、胚状体:非合子细胞形成
8、的胚状结构,如兰花的原球茎。的原球茎。8、胚胎发生:、胚胎发生:培养物培养物通过与正常的受精卵发育相通过与正常的受精卵发育相似方式似方式形成胚状体的过程形成胚状体的过程(经过原胚、球形胚、(经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚心形胚、鱼雷胚和子叶胚5 5个时期)个时期)。五、植物组织培养的类型(一)原生质体培养原生质体培养细胞培养细胞培养组织培养组织培养器官培养器官培养胚胎培养胚胎培养植株培养植株培养培养对象培养对象1、植株培养:对完整植株材料的无菌培养,如幼苗及较大植株的培养。植株培养2、胚胎培养:从果实或子房中分离出未成熟、胚胎培养:从果实或子房中分离出未成熟或成熟的胚的无菌培养。或成
9、熟的胚的无菌培养。胚胎培养胚胎培养的人工种子白菜甘蓝白菜 甘蓝白蓝 3、器官培养:对植物根、茎、叶、花、果实、器官培养:对植物根、茎、叶、花、果实的无菌培养。(常用)的无菌培养。(常用)实例:非洲紫罗兰的组织培养实例:非洲紫罗兰的组织培养 4、组织培养:对植物体所有组织如分生组织、组织培养:对植物体所有组织如分生组织、胚乳组织、薄壁组织、花药组织、愈伤组织胚乳组织、薄壁组织、花药组织、愈伤组织的培养。的培养。愈伤组织培养5、细胞培养:对植物器官或愈伤组织上分离、细胞培养:对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞、花粉单细胞或很小的细胞团的出的单细胞、花粉单细胞或很小的细胞团的无菌培养,以获得无性繁
10、殖系。无菌培养,以获得无性繁殖系。细胞培养6、原生质体培养:对用酶、物理等方法除去、原生质体培养:对用酶、物理等方法除去植物细胞壁的、裸露的、有活性的原生质体植物细胞壁的、裸露的、有活性的原生质体团的无菌培养。团的无菌培养。菊花原生质体培养植物组织培养的类型(二)培养过程初代培养继代培养初代培养:将外植体进行的第一次培养。初代培养:将外植体进行的第一次培养。继代培养:外植体或培养物培养了一段时间后,为了继代培养:外植体或培养物培养了一段时间后,为了防止培养的细胞老化,或培养基养分利用完而造成营防止培养的细胞老化,或培养基养分利用完而造成营养不良及代谢物过多积累而产生毒害物质的影响,要养不良及代
11、谢物过多积累而产生毒害物质的影响,要及时将其转接到新鲜培养基的过程。转接培养,转接及时将其转接到新鲜培养基的过程。转接培养,转接一次称为一代,依次类推。一次称为一代,依次类推。继代培养的目的:快繁继代培养的目的:快繁初代培养的目的:获得无菌材料初代培养的目的:获得无菌材料继代培养继代培养初代培养继代培养继代培养初代培养和继代培养不断地继代培养植物组织培养的类型(三)培养基的物理状态固体培养液体培养双相培养固体培养固体培养:加入琼脂等凝固剂使培养基成固体状:加入琼脂等凝固剂使培养基成固体状态的培养。态的培养。优点优点:是最常用的方法。该方法简单,易行,能:是最常用的方法。该方法简单,易行,能较好
12、地固定培养物较好地固定培养物。缺点缺点:但养分分布不均,营养成分不能得到充分:但养分分布不均,营养成分不能得到充分利用,生长速度不均衡,并常有褐化中毒现象发利用,生长速度不均衡,并常有褐化中毒现象发生。生。产生的有害物质不能及时清除。产生的有害物质不能及时清除。固体培养固体培养 固体培养固体培养液体培养:液体培养:在培养基中不加入任何的凝固剂使培在培养基中不加入任何的凝固剂使培养基呈流体状态的培养,由于液体中氧气含量较养基呈流体状态的培养,由于液体中氧气含量较少,常用振动培养的方法以确保氧气的供给。少,常用振动培养的方法以确保氧气的供给。往复式摇床或旋转式摇床进行培养,速度一般为往复式摇床或旋
13、转式摇床进行培养,速度一般为50-200r50-200rminmin,这种定期浸没的方法,既能使培,这种定期浸没的方法,既能使培养基均一,又能保证氧气的供给。养基均一,又能保证氧气的供给。缺点:缺点:不能较好地固定培养物,不能较好地固定培养物,优点:优点:营养成分得到充分利用,产生的有害物质营养成分得到充分利用,产生的有害物质能及时清除能及时清除液体培养:在培养基中不加入任何的凝固剂使培液体培养:在培养基中不加入任何的凝固剂使培养基呈流体状态的培养,由于液体中氧气含量较养基呈流体状态的培养,由于液体中氧气含量较少,常用振动培养的方法以确保氧气的供给。少,常用振动培养的方法以确保氧气的供给。往复
14、式摇床或旋转式摇床进行培养,速度一般为往复式摇床或旋转式摇床进行培养,速度一般为50-200r50-200rminmin,这种定期浸没的方法,既能使培,这种定期浸没的方法,既能使培养基均一,又能保证氧气的供给。养基均一,又能保证氧气的供给。缺点:不能较好地固定培养物,缺点:不能较好地固定培养物,优点:营养成分得到充分利用,产生的有害物质优点:营养成分得到充分利用,产生的有害物质能及时清除能及时清除液体培养液体培养摇床摇床双相培养:固体、液体混合培养,协调了固体、液体培养的优缺点六、植物组织培养的技术特点六、植物组织培养的技术特点(优越性)(优越性)1、试验材料来源单一,无性系遗传特性一、试验材
15、料来源单一,无性系遗传特性一致;致;2、成本低,效率高;、成本低,效率高;3、环境条件可控,误差小;、环境条件可控,误差小;4、生长快,周期短,可重复性强;、生长快,周期短,可重复性强;5、可连续运行、周年试验或生产,利于自、可连续运行、周年试验或生产,利于自动化控制。动化控制。1-2 1-2 植物组织培养的基本理论植物组织培养的基本理论一、植物细胞全能性一、植物细胞全能性1、定义、定义:植物细胞具有该植物体全部遗传的植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发育成完可能性,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。整植物体的潜在能力。潜在全能性的原因潜在全能性的原因:基因表达的
16、选择性:基因表达的选择性。科学研究表明,处于离体状态的植物活细科学研究表明,处于离体状态的植物活细胞,在一定的营养物质、激素和其他外界胞,在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下,就可能表现出全能性,发条件的作用下,就可能表现出全能性,发育成完整的植株。人工条件下实现的这一育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程,就是植物组织培养。过程,就是植物组织培养。植物组织培养植物组织培养再分化再分化脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织外植体外植体试管苗试管苗植株植株3、实现全能性的条件3.1离体条件3.2给予适当的条件,如激素等。二、植物的再生性二、植物的再生性(一)再生性(细胞全能性的实现的过程)(一)
17、再生性(细胞全能性的实现的过程)外植体分生细胞愈伤组织根、芽(完整植株)脱分化多次分裂再分化脱分化是全能性表达的前提,再分化是全能性最终体现。细胞全能性的实现可望不可及植物全能性植物全能性的表达的表达离体的植物器官、离体的植物器官、组织、细胞组织、细胞 游离单细胞游离单细胞或原生质体或原生质体胚状体胚状体根、芽根、芽 愈伤组织愈伤组织 人工种子人工种子再生植株再生植株 脱脱分分化化 愈伤组织形成愈伤组织形成诱导期诱导期分裂期分裂期分化期分化期(二)愈伤组织的形成和形态发生1、形成过程、形成过程启动期(诱导期):细胞准备进行分裂的时期。启动期(诱导期):细胞准备进行分裂的时期。是愈伤组织形成的起
18、点。是愈伤组织形成的起点。长短因不同植物而不同,如与植物种类、外植体长短因不同植物而不同,如与植物种类、外植体的生理状态、外部条件有关。的生理状态、外部条件有关。分裂期:分裂期:外植体细胞经过诱导后脱分化,不外植体细胞经过诱导后脱分化,不断分裂、增生子细胞的过程。细胞数量大量增断分裂、增生子细胞的过程。细胞数量大量增加,分裂速度大于生长速度;加,分裂速度大于生长速度;此时期特点:细胞分裂快,结构疏松,缺少有此时期特点:细胞分裂快,结构疏松,缺少有组织的结构,颜色浅,生长旺盛的愈伤组织呈组织的结构,颜色浅,生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或浅绿色或呈透明状。乳白色、白色或浅绿色或呈透明状。细胞体
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