微生物学检验葡萄球菌属课件.ppt

1、球球 菌菌种类种类:革兰阳性革兰阳性 葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎链球菌）、肠球菌属、微球菌属等链球菌）、肠球菌属、微球菌属等革兰阴性革兰阴性 奈瑟菌属、布兰汉菌属奈瑟菌属、布兰汉菌属形态染色形态染色革兰阳性球菌、葡萄串状排列革兰阳性球菌、葡萄串状排列无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜葡萄球菌革兰染色镜下图葡萄球菌革兰染色镜下图染色性：染色性：形态：形态：排列：排列：培养特性培养特性 生长条件生长条件需氧、兼性厌氧需氧、兼性厌氧营养要求不高，普通培养基上生长良好营养要求不高，普通培养基上生长良好耐盐，耐盐，1015NaCl上能生

2、长上能生长培养特性培养特性 生长现象生长现象液体培养基：均匀混浊、少许沉淀液体培养基：均匀混浊、少许沉淀固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸起、边缘整齐、光滑、湿润的起、边缘整齐、光滑、湿润的S型菌落型菌落常用培养基及菌落特征常用培养基及菌落特征血平板（营养培养基）血平板（营养培养基）：中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、透明溶血环（致病葡萄球菌）透明溶血环（致病葡萄球菌）高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）：淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养

3、基）卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）：菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）生化反应生化反应触酶试验：触酶试验：+葡萄糖氧化发酵试验：发酵葡萄糖氧化发酵试验：发酵+甘露醇分解试验：甘露醇分解试验：+（致病菌株）（致病菌株）抗原构造抗原构造葡萄球菌葡萄球菌A蛋白（蛋白（SPA）存在于金黄色葡萄球菌细胞壁存在于金黄色葡萄球菌细胞壁可与人和其它哺乳动物可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性段非特异性结合，应用于协同凝集试验结合，应用于协同凝集试验抵抗吞噬细胞的吞噬抵抗吞噬细胞的吞噬多糖抗原多糖抗原具有型的特异性具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊有助于金葡菌

4、感染的诊断断分类和分型分类和分型 葡萄球菌包括葡萄球菌包括32种及亚种种及亚种根据产生色素的不同分类根据产生色素的不同分类根据产生凝固酶与否进行分类根据产生凝固酶与否进行分类按噬菌体分型法分类按噬菌体分型法分类葡萄球菌传统分类葡萄球菌传统分类金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌表皮表皮葡萄球菌葡萄球菌腐生腐生葡萄球菌葡萄球菌产生溶血毒素产生溶血毒素+产生凝固酶产生凝固酶+产生耐热产生耐热DNA酶酶+产生产生SPA+新生霉素敏感性新生霉素敏感性SSR致病性致病性强强弱弱无无金葡菌噬菌体分型金葡菌噬菌体分型分型：分五个群，共分型：分五个群，共22型型意义：追踪传染源意义：追踪传染源抵抗力抵抗力是抵抗力最强

5、的无芽孢细菌是抵抗力最强的无芽孢细菌耐干燥耐干燥对龙胆紫敏感对龙胆紫敏感易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（球菌（MRSA）已成为医院感染最常见）已成为医院感染最常见的致病菌的致病菌致病物质致病物质凝固酶凝固酶葡萄球菌溶素葡萄球菌溶素杀白细胞素杀白细胞素肠毒素肠毒素剥脱毒素剥脱毒素毒性休克综合征毒素毒性休克综合征毒素1凝固酶凝固酶游离凝固酶：游离凝固酶：采用试管法检测采用试管法检测结合凝固酶：结合凝固酶：采用玻片法检测采用玻片法检测金葡菌凝固酶试验均为阳性金葡菌凝固酶试验均为阳性凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志游离凝固酶游离

6、凝固酶协同因子协同因子凝血酶凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白血浆凝固血浆凝固结合凝固酶（位于菌体表面）结合凝固酶（位于菌体表面）纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白细菌凝集细菌凝集所致疾病所致疾病侵袭性疾病侵袭性疾病化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、脑膜炎、败血症等脑膜炎、败血症等毒素性疾病：毒素性疾病：食物中毒、假膜性肠炎等食物中毒、假膜性肠炎等免疫性免疫性有一定天然免疫力有一定天然免疫力病后获得的免疫力作用不强、不持久病后获得的免疫力作用不强、不持久微生物学检验微生物学检验细菌鉴定的基本程序细菌鉴定的基本程序标本标本直接涂片直接涂片革兰染色镜

7、检革兰染色镜检分离培养分离培养取可疑菌落取可疑菌落鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验结果报告结果报告标本采集标本采集根据病种不同，采集不同标本根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便液、痰液、脑脊液、粪便检验程序检验程序脓、穿刺液、尿液、痰脓、穿刺液、尿液、痰脑脊液脑脊液血液血液粪便、呕吐物粪便、呕吐物增菌培养增菌培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养直接涂片染色直接涂片染色鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验菌落涂片染色菌落涂片染色血浆凝固酶血浆凝固酶耐热核酸酶耐热核酸酶药敏试验药敏试验其它试验其它

8、试验报告报告金葡菌脓标本检验程序金葡菌脓标本检验程序脓标本脓标本分离培养分离培养(血平板血平板)直接涂片染色直接涂片染色鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验报告报告血浆凝固酶血浆凝固酶耐热核酸酶耐热核酸酶药敏试验药敏试验其它试验其它试验涂片染色涂片染色检验方法检验方法直接镜检直接镜检方法方法:取标本直接涂片取标本直接涂片,革兰染色后镜检革兰染色后镜检初步报告初步报告:“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑似葡萄球菌似葡萄球菌”“查见革兰阳性球菌查见革兰阳性球菌”检验方法检验方法分离培养分离培养脓、痰、脑脊液标本脓、痰、脑脊液标本接种血平板接种血平板菌落特征：光滑型、

9、中等大小、脂溶性菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血环（色素、透明溶血环（-溶血环）溶血环）检验方法检验方法分离培养分离培养粪便标本粪便标本高盐甘露醇平板高盐甘露醇平板菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色菌落菌落检验方法检验方法分离培养分离培养血标本血标本增菌（葡萄糖肉汤）增菌（葡萄糖肉汤）分分离培养（血平板）离培养（血平板）生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血金葡菌的鉴定依据金葡菌的鉴定依据血平板上金黄色色素、血平板上金黄色色素、-溶血环溶血环血浆凝固酶血浆凝固酶 +发酵甘露醇发酵甘露醇 +耐热核酸酶耐热核酸酶 +凝固酶

10、阴性葡萄球菌（凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）条件致病菌条件致病菌医院内感染的重要病原菌医院内感染的重要病原菌对多种抗生素耐药对多种抗生素耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）是院内感染的重要病原菌之）是院内感染的重要病原菌之一，一，MRSA、MRCNS对多种抗生素耐药，对多种抗生素耐药，MRSA不仅对青霉素类、头孢菌素类等不仅对青霉素类、头孢菌素类等内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、内酰胺类抗菌药物耐药，同时也对四环素、红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素等红霉素、氯霉素、克林霉素及庆大霉素

11、等常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐常用抗菌药物耐药，对利褔平和磺胺的耐药率也达药率也达30，但通常对万古霉素敏感。，但通常对万古霉素敏感。MRSA、MRCNS常常引起院内感染与播散，常常引起院内感染与播散，且难于治疗和控制，病死率高。且难于治疗和控制，病死率高。有资料表明两者的耐药谱及机理都有许有资料表明两者的耐药谱及机理都有许多相似的地方，其传播方式是患者多相似的地方，其传播方式是患者医护人员医护人员患者之间的传播，特别是患者之间的传播，特别是医护人员手的传播，这些带菌者是有可医护人员手的传播，这些带菌者是有可能成为传染源，推测病房医护人员能成为传染源，推测病房医护人员MRSA,MRCN

12、S带菌可能是由于长期工带菌可能是由于长期工作在病房，接触患者较多所致。作在病房，接触患者较多所致。鉴定试验鉴定试验：血浆凝固酶试验：血浆凝固酶试验玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便快速快速试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏生理盐水生理盐水待检细菌待检细菌新鲜兔血浆新鲜兔血浆协同凝集试验协同凝集试验金葡菌金葡菌SPASPA 细胞膜细胞膜细胞质细胞质细胞壁细胞壁链球菌属链球菌属分布：自然界、人和动物肠道、健康人分布：自然界、人和动物肠道、健康人鼻咽部鼻咽部所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性炎症、猩

13、红热、风湿热等疾病。炎症、猩红热、风湿热等疾病。生物学性状生物学性状形态染色形态染色培养特点培养特点生化反应生化反应抗原构造抗原构造分类分类抵抗力抵抗力形态染色形态染色革兰阳性球菌，链状排列，无鞭毛，无革兰阳性球菌，链状排列，无鞭毛，无芽孢，可形成荚膜芽孢，可形成荚膜 在液体培养基中易形成长链在液体培养基中易形成长链 致病性强的菌株多为长链致病性强的菌株多为长链 在脓汁标本中多为短链在脓汁标本中多为短链链球菌电镜图链球菌电镜图链球菌革兰染色链球菌革兰染色培养特点生长条件培养特点生长条件营养要求高，在含血液、血清培养基上营养要求高，在含血液、血清培养基上生长良好生长良好需氧、兼性厌氧需氧、兼性厌

14、氧D群链球菌可在群链球菌可在10、45 生长生长培养特点生长现象培养特点生长现象液体培养基：呈沉淀生长现象液体培养基：呈沉淀生长现象血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、血平板：灰白色、细小、圆形、光滑的、有不同溶血现象的菌落有不同溶血现象的菌落分类分类菌落特征菌落特征甲型（甲型（）溶血性链）溶血性链球菌球菌灰色、针尖状菌落、周围有草绿灰色、针尖状菌落、周围有草绿色溶血环（色溶血环（溶血）溶血）乙型（乙型（）溶血性链）溶血性链球菌球菌灰白色、细小菌落、周围有宽大灰白色、细小菌落、周围有宽大透明溶血环（透明溶血环（溶血溶血）丙型（丙型（）链球菌）链球菌灰白色小菌落、无溶血环灰白色小菌落、无溶血环链

15、球菌在血平板上菌落特征链球菌在血平板上菌落特征甲链甲链乙链乙链丙链丙链分类分类根据溶血现象分类根据溶血现象分类甲型链球菌：属条件致病菌甲型链球菌：属条件致病菌乙型溶血性链球菌：致病力强乙型溶血性链球菌：致病力强丙型链球菌：无致病力丙型链球菌：无致病力分类分类根据抗原构造分类根据抗原构造分类群特异性抗原（群特异性抗原（C抗原）：细胞壁多糖抗抗原）：细胞壁多糖抗原，可将链球菌分为原，可将链球菌分为20群（群（A、B、C、D、E、D、E等），等），引起人类感染的链引起人类感染的链球菌球菌90为为A群。群。型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋白抗原，有白抗原，有M、T、

16、R、S四种，根据四种，根据M抗原不同，可将抗原不同，可将A群分为群分为100型。型。生化反应生化反应触酶试验（）触酶试验（）A群链球菌：杆菌肽敏感试验（群链球菌：杆菌肽敏感试验（+）B群链球菌：群链球菌：CAMP试验（试验（+）、马尿酸）、马尿酸钠水解试验（钠水解试验（+）D群链球菌：胆汁七叶苷试验（群链球菌：胆汁七叶苷试验（+）肺炎链球菌生物学特性肺炎链球菌生物学特性形态染色形态染色：革兰阳性球菌，矛尖状，成双：革兰阳性球菌，矛尖状，成双排列，在人和动物体内形成荚膜排列，在人和动物体内形成荚膜血平板上菌落特征：菌落细小、周围有草血平板上菌落特征：菌落细小、周围有草绿色溶血环，绿色溶血环，48

17、小时后，由于菌落自溶，小时后，由于菌落自溶，呈现呈现“脐窝状脐窝状”生化反应：生化反应：Optochin敏感试验（敏感试验（+）胆汁溶菌试验（胆汁溶菌试验（+）菊糖分解试验（菊糖分解试验（+）动物试验：小白鼠毒力试验（动物试验：小白鼠毒力试验（+）临床意义临床意义A群链球菌群链球菌致病物质致病物质:致热外毒素：致热、细胞毒作用、使皮肤致热外毒素：致热、细胞毒作用、使皮肤产生红疹、抗原性强产生红疹、抗原性强溶血素：溶解红细胞、破坏血小板和白细溶血素：溶解红细胞、破坏血小板和白细胞，分为溶血素胞，分为溶血素O和溶血素和溶血素S两种两种侵袭性酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶，侵袭性酶：透明质酸酶、链激

18、酶、链道酶，有利于细菌在体内扩散有利于细菌在体内扩散M蛋白：具有抗吞噬作用；与肾小球基底蛋白：具有抗吞噬作用；与肾小球基底膜有共同抗原成分，与超敏反应有关膜有共同抗原成分，与超敏反应有关链球菌溶素链球菌溶素O对氧敏感、对氧敏感、抗原性强，刺激机体产生抗抗原性强，刺激机体产生抗O抗体，抗体，抗抗O试验可用于风湿热等链球菌感染所试验可用于风湿热等链球菌感染所致超敏反应性疾病的辅助诊断致超敏反应性疾病的辅助诊断临床意义临床意义A群链球菌群链球菌所致疾病所致疾病化脓性感染：扁桃体炎、丹毒、蜂窝织化脓性感染：扁桃体炎、丹毒、蜂窝织炎、淋巴管炎、败血症等炎、淋巴管炎、败血症等猩红热猩红热风湿热、链球菌感染

19、后肾小球肾炎风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎临床意义其他链球菌临床意义其他链球菌B群链球菌：条件致病菌，是新生儿败血群链球菌：条件致病菌，是新生儿败血症和脑膜炎主要致病菌症和脑膜炎主要致病菌肺炎链球菌：引起大叶性肺炎等疾病肺炎链球菌：引起大叶性肺炎等疾病甲型链球菌：条件致病菌，在一定条件甲型链球菌：条件致病菌，在一定条件下引起亚急性细菌性心内膜炎。下引起亚急性细菌性心内膜炎。变异链球菌：与龋齿有密切关系变异链球菌：与龋齿有密切关系链球菌常规检验链球菌常规检验标本采集标本采集根据临床标本不同采集不同标本根据临床标本不同采集不同标本细菌鉴定的基本程序细菌鉴定的基本程序标本标本直接涂片直接涂片革兰染色

20、镜检革兰染色镜检分离培养分离培养取可疑菌落取可疑菌落鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验结果报告结果报告脓、痰、咽拭脓、痰、咽拭脑脊液脑脊液血液血液增菌培养增菌培养分离培养分离培养直接涂片染色直接涂片染色观察菌落及溶血现象观察菌落及溶血现象触酶试验（）触酶试验（）Optochin敏感试验敏感试验 肺炎肺炎链球菌链球菌草绿色草绿色链球菌链球菌杆菌肽杆菌肽 胆汁胆汁七叶苷七叶苷 A群群链球菌链球菌 D群群链球菌链球菌肠球菌肠球菌6.5NaCl血清学血清学 分类分类检验方法检验方法直接镜检直接镜检方法方法:取标本直接涂片取标本直接涂片,革兰染色后镜检革兰染色后镜检初步报告初步报告:“查见革兰阳性球菌

21、查见革兰阳性球菌”“查见革兰阳性矛尖状双球菌，有荚膜，查见革兰阳性矛尖状双球菌，有荚膜，疑似肺炎链球菌疑似肺炎链球菌”荚膜肿胀试验可确诊，荚膜肿胀试验可确诊，“找到肺炎链球找到肺炎链球菌菌”检验方法检验方法分离培养分离培养脓、痰、脑脊液标本脓、痰、脑脊液标本接种血平板，进行分接种血平板，进行分离培养离培养菌落特征：菌落特征：甲型链球菌甲型链球菌：针尖样菌落、周围有草绿色溶血：针尖样菌落、周围有草绿色溶血环；环；乙型链球菌乙型链球菌：灰白色小菌落、周围有透明溶血：灰白色小菌落、周围有透明溶血环；环；丙型链球菌丙型链球菌：灰白色菌落、无溶血环：灰白色菌落、无溶血环 肺炎链球菌肺炎链球菌：灰白色扁瓶

22、小菌落、周围有草绿：灰白色扁瓶小菌落、周围有草绿色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落色溶血环，培养较久形成脐窝样菌落检验方法检验方法增菌培养增菌培养增菌培养基：葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤增菌培养基：葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤血液与培养基比例：血液与培养基比例：1：10，即，即5ml标本，标本，50ml增菌液。增菌液。拮抗剂：硫酸镁（拮抗多种抗生素）、对氨拮抗剂：硫酸镁（拮抗多种抗生素）、对氨基苯甲酸（拮抗磺胺）等基苯甲酸（拮抗磺胺）等培养时间：培养时间：常规培养：常规培养：1824小时至小时至1周；周；亚急性细菌性心内膜炎：观察亚急性细菌性心内膜炎：观察7天至天至1月月链球菌鉴定链球菌鉴定细菌形态及染色性

23、细菌形态及染色性菌落特征菌落特征鉴定试验鉴定试验 杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验 CAMP试验试验 胆汁七叶苷试验胆汁七叶苷试验 Optochin敏感试验敏感试验 血清学分群快速胶乳凝集试验血清学分群快速胶乳凝集试验肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别菌菌名名形态形态菌落菌落胆汁胆汁溶菌溶菌Optochin菊糖菊糖分解分解小白小白鼠鼠 毒毒力力肺肺链链矛尖状、成矛尖状、成双排列、有双排列、有荚膜荚膜脐窝状、草绿脐窝状、草绿色溶血环色溶血环+/+甲甲链链圆形、短链、圆形、短链、无荚膜无荚膜针尖状、草绿针尖状、草绿色溶血环色溶血环乙型溶血性链球菌的鉴定乙型溶血性链球菌的鉴定-溶血

24、环溶血环包括包括A、B、C、D、F、G群群C群可采用血清学鉴定群可采用血清学鉴定其它群采用生化反应或其他鉴定试验其它群采用生化反应或其他鉴定试验非非-溶血性链球菌鉴定溶血性链球菌鉴定 包括包括肺炎链球菌肺炎链球菌牛链球菌牛链球菌无乳链球菌无乳链球菌草绿色链球菌草绿色链球菌营养变异链球菌营养变异链球菌草绿色链球菌鉴定草绿色链球菌鉴定溶血或不溶血，胆汁七叶苷阴性，包括溶血或不溶血，胆汁七叶苷阴性，包括变异链球菌群变异链球菌群唾液链球菌群唾液链球菌群血液链球菌群血液链球菌群咽峡炎链球菌群咽峡炎链球菌群鉴定依据鉴定依据A群链球菌群链球菌杆菌肽敏感试验（杆菌肽敏感试验（+）B 群链球菌群链球菌CAMP试

25、验（试验（+）、马尿酸钠）、马尿酸钠水解试验（水解试验（+）D群链球菌群链球菌胆汁七叶苷（胆汁七叶苷（+）、）、6.5氯氯化钠生长（）化钠生长（）肺炎链球菌肺炎链球菌Optochin敏感试验（敏感试验（+）、）、胆汁溶菌试验（胆汁溶菌试验（+）、形态和菌落特征典型）、形态和菌落特征典型甲型链球菌甲型链球菌 Optochin敏感试验（）、敏感试验（）、胆汁溶菌试验（）胆汁溶菌试验（）肠球菌肠球菌革兰阳性球菌，短链排列革兰阳性球菌，短链排列营养要求高营养要求高在在10、45、pH9.6条件下均可生长条件下均可生长血平板上溶血现象不定血平板上溶血现象不定触酶试验（触酶试验（-）胆汁七叶苷试验（胆汁七叶苷试验（+）6.5NaCl生长试验（生长试验（+）PYR试验（试验（+）血清学分类属血清学分类属D群群肠球菌临床意义肠球菌临床意义引起的医院感染仅次于葡萄球菌引起的医院感染仅次于葡萄球菌肠球菌感染以粪肠球菌为主肠球菌感染以粪肠球菌为主以尿路感染多见以尿路感染多见有不同程度耐药有不同程度耐药肺炎链球菌电镜图肺炎链球菌电镜图肺炎链球菌光镜图肺炎链球菌光镜图肺炎链球菌肺炎链球菌Grams染色镜检图染色镜检图