实验植物组织培养课件.ppt
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- 实验 植物 组织培养 课件
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1、对照对照NaCl冰水冰水 一、一、配制培养基配制培养基二、无菌操作二、无菌操作三、无菌培养三、无菌培养四、观察记录四、观察记录 上交实验报告时间:上交实验报告时间:第第16周周 下周(第下周(第11周)周)本周(第本周(第10周)周)第第12、13、14、15周每周进行观察周每周进行观察 (1)深刻理解植物组织培养的基本概念)深刻理解植物组织培养的基本概念和理论依据。和理论依据。(2)训练利用实验室的条件来合理设计)训练利用实验室的条件来合理设计和完成实验的基本技能。和完成实验的基本技能。植物组织培养就是将植物组织培养就是将植物离体的生活部分植物离体的生活部分(如(如器官、组织、细胞甚至原生质
2、体等)通过器官、组织、细胞甚至原生质体等)通过无菌操作无菌操作接种在适宜的培养基上接种在适宜的培养基上,在人工控制的条件(如温,在人工控制的条件(如温度、光照、湿度等)下进行培养的技术。度、光照、湿度等)下进行培养的技术。理论依据理论依据:植物细胞的全能性。:植物细胞的全能性。植物体的每一个细胞都携带着一套完整的基因植物体的每一个细胞都携带着一套完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力。组,并具有发育成完整植株的潜在能力。外植体外植体接种接种完整植株完整植株脱分化脱分化再分化再分化外植体外植体愈伤组织愈伤组织芽、根芽、根依据一依据一分化分化接种接种脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织外
3、植体外植体再分化再分化冲洗冲洗表面消毒表面消毒 培养基中培养基中植物生长物质的种类和浓度植物生长物质的种类和浓度在脱分在脱分化和再分化中起重要作用,尤其是化和再分化中起重要作用,尤其是生长素和细胞生长素和细胞分裂素类的比例分裂素类的比例。依据二依据二生长素类生长素类/细胞分裂素类细胞分裂素类高高 诱导根的分化诱导根的分化中中 愈伤组织生长不分化愈伤组织生长不分化低低 诱导芽的分化诱导芽的分化MS培养基的大量元素;培养基的大量元素;MS培养基的微量元素;培养基的微量元素;MS培养基的铁盐;培养基的铁盐;有机附加成分;有机附加成分;NAA、6-BA;蔗糖、冷凝脂;蔗糖、冷凝脂;0.1mol/LNa
4、OH和和0.1mol/LHCl。条件一:条件一:A 无机营养无机营养(包括植物必需的大量和微量元素,包括植物必需的大量和微量元素,均均以盐的形式加入以盐的形式加入)B 碳源碳源(一般为蔗糖,浓度一般为蔗糖,浓度30g/L左右左右),作用是,作用是提供营养提供营养和和维持渗透平衡。维持渗透平衡。C有机附加物有机附加物(主要有氨基酸、水解酪蛋白;主要有氨基酸、水解酪蛋白;VB1、VB6、烟酸(烟酸(VB3)和肌醇,等)和肌醇,等)D 植物生长物质植物生长物质(生长素类和细胞分裂素类等生长素类和细胞分裂素类等)培培养养基基的的成成分分肌醇肌醇:有助于活性物质发挥作用,提高:有助于活性物质发挥作用,提
5、高VB1的效果。的效果。分子量较大和其他在一起不好溶解。单独配制。分子量较大和其他在一起不好溶解。单独配制。氨基酸:有机氮源氨基酸:有机氮源有机物质:有机物质:提供必须的微量营养成分、生理活性物提供必须的微量营养成分、生理活性物质。质。条件二:条件二:实验仪器及设备实验仪器及设备烧杯、移液器、量筒烧杯、移液器、量筒、精密电子天平、精密电子天平、三角瓶三角瓶、pH试纸、封口膜等;试纸、封口膜等;高压灭菌锅;高压灭菌锅;无菌操作间、超净工作台;无菌操作间、超净工作台;能够控制光照和温度条件的培养室。能够控制光照和温度条件的培养室。诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织诱导菊花
6、无菌苗茎段形成芽诱导菊花无菌苗茎段形成芽具体做法具体做法全班分为成小组,根据设计要求结合实验原理、全班分为成小组,根据设计要求结合实验原理、设计依据及设计依据及已提供的已提供的实验条件,在实验条件,在查阅资料的基础查阅资料的基础上上,合理设计实验(主要对培养基进行设计)。,合理设计实验(主要对培养基进行设计)。设计出初步方案后,每组推选一名代表向全班设计出初步方案后,每组推选一名代表向全班汇报设计的原理、汇报设计的原理、方案方案和和预期的结果预期的结果;再经全班讨;再经全班讨论确定最后的设计方案。论确定最后的设计方案。全班分成全班分成6个小组,按照要求经个小组,按照要求经查阅资料、代表汇报和全
7、班查阅资料、代表汇报和全班讨论讨论,最后确定设计的培养基如下(,最后确定设计的培养基如下(MS为基本培养基):为基本培养基):诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织(1)MS+6-BA 0.2+NAA 0 (6-BA占优势占优势)(2)MS+6-BA 0.2+NAA 0.15(NAA增加浓度)增加浓度)(3)MS+6-BA 0.2+NAA 0.2 (二者比例适中)(二者比例适中)诱导菊花无菌苗茎段形成芽诱导菊花无菌苗茎段形成芽(4)MS+6-BA 0 +NAA 1.0 (NAA占优势)占优势)(5)MS+6-BA 0.5+NAA 1.0 (6-BA增加浓度)增加浓度)(6
8、)MS+6-BA 1.5+NAA 1.0 (6-BA占优势)占优势)根据设计的培养基,利用提供的实验条件,我们将按照下根据设计的培养基,利用提供的实验条件,我们将按照下列步骤完成实验。列步骤完成实验。接种接种脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织外植体外植体再分化再分化冲洗冲洗表面消毒表面消毒怀菊花怀菊花无菌体系无菌体系无菌苗无菌苗叶片诱导产生愈伤叶片诱导产生愈伤带芽茎段诱导产生芽带芽茎段诱导产生芽 一、一、配制培养基配制培养基二、无菌操作二、无菌操作三、无菌培养三、无菌培养四、观察记录四、观察记录 一、配制培养基一、配制培养基 1.配制母液配制母液MS培养基的大量元素母液(培养基的大量元素
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