实验2:分离以尿素为氮源微生物-附件课件.ppt
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- 关 键 词:
- 实验 分离 尿素 微生物 附件 课件
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1、实验实验2 2 分离分离以尿素为氮源的以尿素为氮源的微生物微生物思考:采用什么方法从土壤中分离出以尿素为采用什么方法从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物?氮源的微生物?如何判断分离出的细菌确实能将尿素分如何判断分离出的细菌确实能将尿素分解?解?一一.实验原理实验原理 尿素尿素 NH3 中性中性 碱性碱性 酚红颜色:酚红颜色:(酸性)黄色黄色 红色红色(变色范围变色范围 pH6.4-8.2)pH6.4-8.2)二二.实验目的实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有有脲酶脲酶)通过指示剂(酚红)颜色的变化检知培养基通过指示剂(酚红)颜色的变化检知培养基p
2、HpH的变化的变化(脲酶催化的化学反应脲酶催化的化学反应)以尿素为氮源的微生物培养一段时间后,由于细菌以尿素为氮源的微生物培养一段时间后,由于细菌产生的脲酶向周围扩散,将培养基中尿素的分解,产生产生的脲酶向周围扩散,将培养基中尿素的分解,产生的的NHNH3 3使培养基的使培养基的pHpH由原来的中性变为碱性,于是培养由原来的中性变为碱性,于是培养基中的酚红变成红色,菌落的周围会产生红色环带,红基中的酚红变成红色,菌落的周围会产生红色环带,红色环带愈大,表明这种菌利用色环带愈大,表明这种菌利用尿素尿素的能力愈强。的能力愈强。三三.实验步骤实验步骤.倒平板倒平板.制备一定浓度梯度的细菌悬液制备一定
3、浓度梯度的细菌悬液g土壤土壤ml无菌水,振荡,为无菌水,振荡,为-2稀释液,依次制备稀释液,依次制备-3、-4、-5的土壤稀释液。的土壤稀释液。.稀释涂布分离法分离细菌稀释涂布分离法分离细菌.制备无菌的全营养固体培养基和尿素固体培养基制备无菌的全营养固体培养基和尿素固体培养基.培养观察培养观察(倒置,(倒置,37 24-48h)(无菌,(无菌,0.1ml,玻璃刮刀),玻璃刮刀)1、配制培养基、配制培养基 尿素培养基尿素培养基 葡萄糖葡萄糖 0.025g0.025g NaClNaCl 0.12g 0.12g K K2 2HPO4 0.12g HPO4 0.12g 琼脂糖琼脂糖 0.5g0.5g
4、酚红酚红 0.25g0.25g 尿素尿素 10ml10ml LBLB培养基培养基 蛋白胨:蛋白胨:0.25g0.25g 酵母提取液:酵母提取液:0.12g0.12g NaClNaCl:0.25g0.25g 琼脂糖琼脂糖:0.5g 0.5g 对照组对照组选择培养基选择培养基实验组实验组为什么用琼脂糖代替琼脂?怎么获得无菌的尿素为什么用琼脂糖代替琼脂?怎么获得无菌的尿素溶液?溶液?琼脂和琼脂糖琼脂和琼脂糖 琼脂是一种未被纯化的混合物,主要成分为琼脂是一种未被纯化的混合物,主要成分为琼脂琼脂糖糖和和琼脂果胶琼脂果胶,还含有少量的,还含有少量的含氮含氮化合物,及其它化合物,及其它有机杂质和不溶性杂质。
5、琼脂作为微生物固体培养有机杂质和不溶性杂质。琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成成分,其优点是:基不可缺少的组成成分,其优点是:其主要成分不能被微生物利用;其主要成分不能被微生物利用;可使培养基可使培养基固化固化;不影响不影响培养基中其他营养物质被细菌吸收。培养基中其他营养物质被细菌吸收。实验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的实验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂,其目的是:固化剂,其目的是:尽可能使培养基中只含尿尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物,以防止琼脂中的含氮化合素一种含氮化合物,以防止琼脂中的含氮化合物被以非尿素为氮源的细菌利用物被以非尿素为氮源的细菌利用,有利于对这
6、,有利于对这类细菌的筛选。类细菌的筛选。思考?思考?选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离2、倒平板、倒平板制备空白平板制备
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