实验2分离以尿素为氮源的微生物课件.ppt

1、实验分离以尿素为氮源的微生物实验分离以尿素为氮源的微生物脲，又称尿素，脲，又称尿素，CNH2NH2O 是蛋白质的降解产物，会污染环境，是蛋白质的降解产物，会污染环境，但可以被含脲酶的微生物分解。但可以被含脲酶的微生物分解。实验原理：含有脲酶的细菌可以从尿素中得到源，而其含有脲酶的细菌可以从尿素中得到源，而其他细菌不能得到源，因此可以用以尿素为唯一他细菌不能得到源，因此可以用以尿素为唯一源的培养基选择出这些微生物。源的培养基选择出这些微生物。尿素在脲酶的降解下产生，使培养基的变尿素在脲酶的降解下产生，使培养基的变为碱性，酚红遇碱由红黄色变成红色，因此为碱性，酚红遇碱由红黄色变成红色，因此可以用酚

2、红鉴定。可以用酚红鉴定。(NH2)2C=O+H2O 2NH3+CO2脲酶脲酶选择培养基选择培养基全营养培养基全营养培养基尿素为唯一氮尿素为唯一氮源的培养基源的培养基土壤稀释液土壤稀释液（多种微生物）（多种微生物）结果如何？结果如何？设备及用品：设备及用品：实验材料：实验材料：()全营养固体培养基：蛋白胨、酵母提取物、琼脂糖、全营养固体培养基：蛋白胨、酵母提取物、琼脂糖、加水。加水。()尿素固体培养基：葡萄糖、尿素固体培养基：葡萄糖、酚红、琼脂糖、加水。、酚红、琼脂糖、加水。灭菌冷却到灭菌冷却到时加入经玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿时加入经玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素溶液（内含脲）。素溶液（内含

3、脲）。）土样。）土样。.酚红的作用是什么？酚红的作用是什么？.凝固剂为什么使用琼脂糖，而不是琼脂？凝固剂为什么使用琼脂糖，而不是琼脂？.能否连同尿素一起进行灭菌？如何操作？能否连同尿素一起进行灭菌？如何操作？琼脂是未被纯化的混合物，琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物内含一定量的含氮化合物实验步骤：观察观察注意：尿素经过玻璃漏斗过注意：尿素经过玻璃漏斗过滤后加入滤后加入培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌倒平板倒平板接种接种全营养固体培养基（对照组）全营养固体培养基（对照组）尿素固体培养基（实验组）尿素固体培养基（实验组）玻璃刮刀、玻璃刮刀、涂布分离涂布分离培养培养对照组：对照组：实

4、验组：实验组：制备细菌悬液制备细菌悬液倒置，倒置，恒温培养箱，左右恒温培养箱，左右菌落数量和种类多而杂菌落数量和种类多而杂菌落少、单一，菌落周围出现菌落少、单一，菌落周围出现红色区域红色区域 制备细菌悬液：制备细菌悬液：的无菌水的无菌水的无菌水的无菌水土壤土壤4.5ml无菌水无菌水0.5ml0.5ml0.5ml土样土样无菌水无菌水微量移液器的使用培养基上培养基上、稀、稀释液涂布结果释液涂布结果尿素培养基上尿素培养基上、稀释液涂布结果稀释液涂布结果恒温培养恒温培养例如例如 若某同学将毫升的菌液稀释成倍，若某同学将毫升的菌液稀释成倍，涂布分离后，个平板的菌数依次为：个，涂布分离后，个平板的菌数依次

5、为：个，个，个。请问，你能算出该试管中的细菌数大个，个。请问，你能算出该试管中的细菌数大约是多少吗？约是多少吗？例：根据分离以尿素为氮源的微生物实验，回答下列问例：根据分离以尿素为氮源的微生物实验，回答下列问题：题：写出脲酶降解尿素的反应式；写出脲酶降解尿素的反应式；该实验分离细菌时用浓度为和土壤稀释接种，更容易该实验分离细菌时用浓度为和土壤稀释接种，更容易形成单菌落的形成单菌落的.同学筛选出的菌落为个，其他同学只选择出个，并且同学筛选出的菌落为个，其他同学只选择出个，并且他在设计实验时并没有设置对照。你认为同学结果产生他在设计实验时并没有设置对照。你认为同学结果产生的原因可能有哪些的原因可能

6、有哪些 如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素：如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素：涂布平板的所有操作怎样保证无菌？涂布平板的所有操作怎样保证无菌？()脲酶土壤稀释土壤稀释可能是土样不同，也可能是可能是土样不同，也可能是培养基污染或操作失误培养基污染或操作失误一是由其他同学用与同学一样的土壤进行实验，如果与同学一致则证明无误。如一是由其他同学用与同学一样的土壤进行实验，如果与同学一致则证明无误。如果不同，则证明同学存在操作或培养基配制配制有问题。果不同，则证明同学存在操作或培养基配制配制有问题。二是将同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，二是将同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。从操作的各个细节保证从操作的各个细节保证“无菌无菌”，都应在火焰旁进行。，都应在火焰旁进行。颜色：颜色：预期：预期：酚红由酚红由黄黄变变红红。说明有分解尿素的细菌存在，且随着。说明有分解尿素的细菌存在，且随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。中性中性碱性碱性细菌细菌黄色黄色 红色红色酚红：酸碱指示剂，酚红：酸碱指示剂，变色范围变色范围：pH6.48.2