动物组织基因组DNA的提取概要课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《动物组织基因组DNA的提取概要课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 动物 组织 基因组 DNA 提取 概要 课件
- 资源描述:
-
1、实验三动物组织基因组DNA的提取王翠芳2017-3-29实验目的实验目的1.实验原理(核酸分离纯化)实验原理(核酸分离纯化)2.实验仪器、试剂和耗材实验仪器、试剂和耗材3.实验步骤实验步骤4.实验结果与讨论实验结果与讨论5.动物组织基因组DNA的提取一、实验目的n从小鼠尾巴中提取纯的基因组从小鼠尾巴中提取纯的基因组DNA;n掌握基因组掌握基因组DNA抽提的办法,抽提的办法,理解核酸分离纯化的基本原理;理解核酸分离纯化的基本原理;二、实验原理nDNA:主要存在于细胞核的染色体中。核外也主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量有少量DNA,如线粒体,如线粒体DNA(mtDNA)、叶)、叶绿体绿体D
2、NA(cpDNA),质粒),质粒DNA。nRNA:存在于细胞质中,如存在于细胞质中,如mRNA,rRNA,tRNA等。等。1 1、核酸的分类、核酸的分类二、实验原理n分离纯化核酸总的原则:分离纯化核酸总的原则:应保证核酸一级结构的完整性;应保证核酸一级结构的完整性;排除其它分子的污染;排除其它分子的污染;n核酸纯化应达到的要求:核酸纯化应达到的要求:核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;溶剂和过高浓度的金属离子;其它生物大分子的污染应降到最低程度;其它生物大分子的污染应降到最低程度;排除其它核酸分子的污染;排除其它核酸分子的污染;
3、2 2、核酸制备的一般原则、核酸制备的一般原则二、实验原理n核酸制备时应注意的事项:核酸制备时应注意的事项:尽量简化操作步骤,缩短提取过程;尽量简化操作步骤,缩短提取过程;减少化学因素对核酸的讲解;减少化学因素对核酸的讲解;减少物理因素的核酸的讲解:机械剪切力和减少物理因素的核酸的讲解:机械剪切力和高温;高温;防止核酸的生物讲解;防止核酸的生物讲解;2 2、核酸制备的一般原则、核酸制备的一般原则二、实验原理降低温度,改变降低温度,改变pH值,及盐的浓度,都利于对值,及盐的浓度,都利于对核酸酶活性的抑制,但均不如用核酸酶抑制剂更核酸酶活性的抑制,但均不如用核酸酶抑制剂更有利,几个条件并用更好。有
4、利,几个条件并用更好。DNA,抑制,抑制Dnase活力很容易,但活力很容易,但防止机械拉防止机械拉力张力更重要力张力更重要;RNA,因分子较小,不易被机械张力拉断,但,因分子较小,不易被机械张力拉断,但抑制抑制Rnase活力较难,故在活力较难,故在RNA提取中设法抑制提取中设法抑制Rnase更重要更重要。3 3、核酸酶的抑制和抑制剂、核酸酶的抑制和抑制剂二、实验原理nDnase抑制:抑制:加入少量金属离子螯合剂,如加入少量金属离子螯合剂,如0.01 mol/L EDTA或柠檬酸钠,或柠檬酸钠,Dnase基本可以全部失活;基本可以全部失活;去垢剂、蛋白变性剂及去垢剂、蛋白变性剂及Dnase抑制剂
5、也可使抑制剂也可使Dnase失活;失活;3 3、核酸酶的抑制和抑制剂、核酸酶的抑制和抑制剂二、实验原理nRNase抑制:抑制:操作要带手套;操作要带手套;所有器皿要严格消毒;所有器皿要严格消毒;试剂处理;试剂处理;低温操作;低温操作;在分离过程中要加入一定的在分离过程中要加入一定的Rnase抑制剂抑制剂3 3、核酸酶的抑制和抑制剂、核酸酶的抑制和抑制剂二、实验原理4 4、核酸制备中常用的、核酸制备中常用的去垢剂去垢剂核酸本身带负电荷,结合带正电荷的蛋白质,核酸本身带负电荷,结合带正电荷的蛋白质,用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂,用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂,去垢剂的作用:去
6、垢剂的作用:溶解膜蛋白及脂肪,使细胞膜破裂;溶解膜蛋白及脂肪,使细胞膜破裂;溶解核糖体上面的蛋白,使其解聚,将核酸溶解核糖体上面的蛋白,使其解聚,将核酸释放出来;释放出来;对对Rnase和和Dnase有一定的抑制作用;有一定的抑制作用;如如:SDS,脱氧胆酸钠,脱氧胆酸钠,4-氨基水杨酸钠,萘氨基水杨酸钠,萘-1,5-二磺酸钠二磺酸钠等等二、实验原理5 5、核酸制备中常用的蛋、核酸制备中常用的蛋白质变性剂白质变性剂蛋白质变性剂的作用:蛋白质变性剂的作用:使蛋白质变性、沉淀,从核酸提取液中分离使蛋白质变性、沉淀,从核酸提取液中分离除去,以防造成蛋白质污染;除去,以防造成蛋白质污染;使蛋白质变性,
展开阅读全文