高中生物-2.1-微生物的实验室培养精品课件-新人教版选修1.ppt
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1、课题课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养课程标准课程标准进进行微生物的分离和培养。行微生物的分离和培养。课标解读课标解读1.知知道培养基的基础知识,进行无菌技术的操作。道培养基的基础知识,进行无菌技术的操作。2.进行微生物培养。进行微生物培养。1培养基培养基(1)培培养基概念养基概念按照微生物对按照微生物对 的不同需求,配制出供其的不同需求,配制出供其 的营的营养基质。养基质。培养基的成分及无菌操作技术培养基的成分及无菌操作技术 营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖(2)培养基种类培养基种类包括包括 培养基和培养基和 培养基等。培养基等。(3)培养基的化学成分培养基的化学成分一般都含有一般都
2、含有 、和和 四类营养成分。还需四类营养成分。还需要满足微生物生长对要满足微生物生长对 、及及 等的要求。等的要求。固体固体液体液体水水碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐pH特殊营养物质特殊营养物质氧气氧气2无菌技术无菌技术(1)无无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开,主要包括以下四菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开,主要包括以下四个方面个方面对实验操作的对实验操作的 、操作者的、操作者的 ,进行清洁和,进行清洁和 ;将用于微生物培养的器皿、将用于微生物培养的器皿、和和 等进行等进行;为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在 附近进行;附近进行;实验操作时
3、应避免已经灭菌处理的材料用具与实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相相接触。接触。空间空间衣着和手衣着和手消毒消毒接种用具接种用具培养基培养基灭菌灭菌酒精灯火焰酒精灯火焰周围的物品周围的物品(2)消毒和灭菌消毒和灭菌消毒:消毒是指使用较为温和的消毒:消毒是指使用较为温和的方法仅杀死物体方法仅杀死物体表面或内部一部分表面或内部一部分 的微生物,的微生物,(包括;不包括;不包括包括)芽孢和孢子,常用的方法有芽孢和孢子,常用的方法有 消毒法、消毒法、消毒法、消毒法、消毒法。消毒法。灭菌:灭菌是指使用灭菌:灭菌是指使用 杀死物体内外杀死物体内外 ,(包括,不包括包括,不包括)芽孢和孢子,常用的方
4、法有芽孢和孢子,常用的方法有 灭菌、灭菌、灭菌和灭菌和 灭菌。灭菌。物理或化学物理或化学对人体有害对人体有害不包括不包括煮沸煮沸巴氏巴氏化学药剂化学药剂强烈的理化因素强烈的理化因素所有的所有的微生物微生物包括包括灼烧灼烧高压蒸汽高压蒸汽干热干热思维激活思维激活1 用用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌?酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌?70%与与95%的酒精,哪一种效果更好?为什么?的酒精,哪一种效果更好?为什么?提示提示酒精擦拭属化学消毒,酒精消毒时,酒精擦拭属化学消毒,酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果的酒精杀菌效果最好。原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,最好。原因是:浓度过
5、高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。1碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳2.培养基类型划分培养基类型划分3.无菌技术无菌技术(1)消消毒和灭菌的区别毒和灭菌的区别(2)无菌技术主要操作要求无菌技术主要操作要求实验前应对操作空间、操作人员消毒,对所用器具和培养基灭实验前应对操作空间、操作人员消毒,对所用器具和培养基灭菌。菌。实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作,另外要避免已灭实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作,另外要避免已灭菌处理材料再次污染。菌处理材料再次污染。
6、特别提示特别提示(1)微生物最常用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常微生物最常用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对异养微生物来说,含对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机物既是碳源,又是的有机物既是碳源,又是氮源、能源。氮源、能源。(3)大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物,其培养基大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物,其培养基中均需额外添加生长因子,而许多微生物能自行合成生长因子,中均需额外添加生长因子,而许多微生物能自行合成生长因子,其培养基中不需再添加。其培养基中不需再添加。【巩固巩固1】下下列培养基配方中能作为选
7、择培养基、鉴别培养基的列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是依次是()。A.B C D解析解析高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长,从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来,有高浓葡萄球菌的生长,从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来,有高浓度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝,可度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝,可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌,有伊红和美蓝以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌,有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。的培养基为鉴别培养基。答案答案D1制
8、备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)制制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤:备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤:称量称量 倒平板。倒平板。(2)倒平板的过程:倒平板的过程:在火焰旁右手拿锥形瓶,左手在火焰旁右手拿锥形瓶,左手 。右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过 。左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,左左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,左手立刻手立刻 。待平板冷却凝固后,将平板待平板冷却凝固后,将平板 放置,使皿盖在下、皿放置,使皿盖在下、皿底在上。底在上。培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术培养基的制备与大肠杆菌的纯
9、化技术 计算计算溶化溶化灭菌灭菌拔出棉塞拔出棉塞火焰火焰盖上皿盖盖上皿盖倒过来倒过来2纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(1)微微生物接种的最常用方法是生物接种的最常用方法是 和和 。(2)平板划线法:通过平板划线法:通过 在琼脂固体培养基表面在琼脂固体培养基表面 的操作,将聚集的菌种的操作,将聚集的菌种 。(3)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的 ,然后将不,然后将不同稀释度的菌液分别同稀释度的菌液分别 ,进行培,进行培养。当稀释倍数足够高时,即可获得养。当稀释倍数足够高时,即可获得 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种环接种环连续连续划线划线逐步稀
10、释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面梯度稀释梯度稀释涂布到琼脂固体培养基的表面涂布到琼脂固体培养基的表面单个细菌形成的菌落单个细菌形成的菌落3菌种的保存菌种的保存为为了保持菌种的纯净,需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌了保持菌种的纯净,需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种,我们可以采用种,我们可以采用 法;对于需要长期保存的菌种,可法;对于需要长期保存的菌种,可以采用以采用 法。法。临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏思维激活思维激活2 除除平板划线法与稀释涂布平板法外,还有哪些接种方平板划线法与稀释涂布平板法外,还有哪些接种方法?微生物接种技术中最核心的内容是什么?法?微生物接种技术中
11、最核心的内容是什么?提示提示微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法,所有微微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法,所有微生物接种方法中最核心的内容是生物接种方法中最核心的内容是“防止杂菌污染,保证培养物的防止杂菌污染,保证培养物的纯度纯度”。1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计计算:依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例,计算配制算:依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例,计算配制100 mL的培养基时,各种成分的用量的培养基时,各种成分的用量 称量:牛肉膏比较黏稠,可用称量纸称取,牛肉膏和蛋白胨都称量:牛肉膏比较黏稠,可用称量纸称取,牛肉膏和蛋白胨都易吸潮,称取时动作要迅速,称后
12、要及时盖上瓶盖易吸潮,称取时动作要迅速,称后要及时盖上瓶盖2微生物分离与纯化技术微生物分离与纯化技术(1)原理原理微微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上,样品中的每一个细胞或孢子都可以生长接种在固体培养基上,样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上,经培养繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上,经培养后,即可得到一个微生物的纯种。后,即可得到一个微生物的纯种。(2)方法步骤方法步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤微生物的分离包括样品稀释、划线
13、或涂布及培养三个步骤梯度稀释操作梯度稀释操作(如图如图1)图图1微生物分离操作流程图微生物分离操作流程图a将分别盛有将分别盛有9 mL水的水的6支试管灭菌,并按支试管灭菌,并按101106的顺序编号。的顺序编号。b用移液管吸取用移液管吸取1 mL已培养的菌悬液,注入第二支试管中。用已培养的菌悬液,注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸三次,使菌悬液与水充分混匀。手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸三次,使菌悬液与水充分混匀。c从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液,注入稀释液,注入102倍稀释的试管倍稀释的试管中,重复第中,重复第2步的操作。以此类推,直到完成最后一
14、支试管的稀释。步的操作。以此类推,直到完成最后一支试管的稀释。注意:移液管需要经过灭菌。操作时,试管口和移液管应在离火注意:移液管需要经过灭菌。操作时,试管口和移液管应在离火焰焰12 cm处。处。划线或涂布划线或涂布平板划线分离法:在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑平板划线分离法:在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取大肠杆菌培养液在平板上划线,常用的划线方法有平行划线和取大肠杆菌培养液在平板上划线,常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。平行划线时,每转一个角度烧一次接种环。划线连续划线两种。平行划线时,每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后,盖上培养皿盖,做好标记。完毕后,盖上培养
15、皿盖,做好标记。图图2划线示意图划线示意图涂布分离法:取涂布分离法:取3个平板,底面分别用记号笔写上个平板,底面分别用记号笔写上104、105和和106三种稀释度,然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各三种稀释度,然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL,放入已标记好的平板上,用无菌玻璃涂棒在培养基表面,放入已标记好的平板上,用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀,室温下静置轻轻地涂布均匀,室温下静置510 min,使菌悬液吸附进培养基,使菌悬液吸附进培养基(图图3)。培养培养将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 培养培养
16、1624 h,即可长出单菌落,即可长出单菌落(图图4)图图3涂布法示意图图涂布法示意图图4斜面接种法斜面接种法(3)结果分析结果分析确认培养基制备是否合格确认培养基制备是否合格为确认培养基制备是否合格,需设置对照实验,即接种后的培养为确认培养基制备是否合格,需设置对照实验,即接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱中,培养恒温箱中,培养12 h和和24 h,观察现象并记录观察现象并记录如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后后无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则实验失败需要重无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否
17、则实验失败需要重新制备。新制备。接种操作成功的标准接种操作成功的标准如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合该菌菌落的特点,则说明接种操作是符合要求的;如果培养基上该菌菌落的特点,则说明接种操作是符合要求的;如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中无菌操作还未达到要求,实出现了其他菌落,则说明接种过程中无菌操作还未达到要求,实验失败,需要分析原因,再次制备。验失败,需要分析原因,再次制备。特别提醒特别提醒(1)进行划线时最后一区和第一区不可接触。进行划线时最后一区和第一区不可接触。(2)平板划线各次灼烧接种环的目的。平
18、板划线各次灼烧接种环的目的。平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌,划线操平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环,每次灼烧目的不同。作结束仍需灼烧接种环,每次灼烧目的不同。(3)灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。菌种。【巩固巩固2】下下列有关平板划线操作的叙述不正确的是列有关平板划线操作的叙述不正确的是()。A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物物污染培养物B每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划
19、线结束后,每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后,灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的划线结束后,灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者菌种,避免细菌污染环境和感染操作者解析解析平板划线操作中,接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种平板划线操作中,接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物,以后每次划线前灼烧接种环环上可能存在的微生物污染培养物,以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残
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