网织红细胞意义最全课件.ppt

1、网织红细胞意义 主要内容n1.相关基础知识.n2.病例报道.n3.当今常用仪器和参数.n4.最新临床应用.n网织物的来源和性质:实验证明网织物不是核残存部分,也不是固有的,它与胞浆内的碱性物质相关,进一步实验又证实碱性物质越多,网织物就越粗,碱性n物质越少,网织物就越细.现已证实它们就 是核糖体.n电镜下的网织红细胞:经活体染色可见核糖体附于网丝上,线粒体由于中毒死亡而变大和退化.当网织细胞趋于成熟时,核糖体和细胞器逐渐消失,线粒体嵴消失,数目减少,Golgi复合器,中心粒,聚铁蛋白的残存物逐渐消失.网织红细胞的生成n当有核红细胞在红细胞岛或途径血窦时都会失去细胞核。此时生成的网织红细胞很可能

2、在血压的作用下从骨髓经血窦上皮进入血液。血循环中的网织红细胞的成熟大约24-48小时。20%的血红蛋白和细胞膜都是在这个时期完成。电镜下的网织红细胞是轻微运动的，折电镜下的网织红细胞是轻微运动的，折皱的不规则外形皱的不规则外形。在“年轻”网织红细胞中散在的RNA可形成多聚多聚RNA。当蛋白合成结束时，又变成单体单体RNA。n网织细胞的活体染色:染色时间:28min 比例:用2%的煌焦油兰染色以滴数计1:5时,网织细胞数开始减少,1:2为最佳.涂片部位:中部为佳.玻片干燥程度:立即干燥者最佳.普通光学显微镜法:计数1000个RBC中的Ret,以百分数表示.Miller窥盘法n由于目测计数误差较大

3、,Brecler等证明用Miller窥盘法可减低标准误,特别是RBC较少时.nEDTAK2抗凝血(4hr内)染液(纯化天青B或新美兰)1:1,15min 涂片.n盘:厚1mm,直径19mm,圆玻片上划出格子:大方格内Ret/(小方格内RBCx9)X100%病例分析n扩大.铁三项:SI92mg/dl,TBIC444mg/dl,TS21%,SF2mg/mln长期医嘱:n11.29.速力菲n11.29右旋糖酐铁.n得到两份化验报告:n11.2912.5RBC4.40 4.76 HGB56.00 75.00 HCT24.30 31.50 MCV55.20 66.10 CH12.90 15.60 CHC

4、M236.00 237.00 RDW19.90 15.60 HDW28.80 29.80 RET%1.60 7.90 CHR17.40 25.10 当蛋白合成结束时，又变成单体RNA。为了区别MDS和其他类型的大细胞贫血他计算出90%的可信区间,并把IRF16%,MRV129fl,MFI18定为0.研究一:IRF在估计有效造血在贫血病理过程中的作用和成熟RBC相比,网织红细胞吸收了更多的光量.为了区别MDS和其他类型的大细胞贫血他计算出90%的可信区间,并把IRF16%,MRV129fl,MFI18定为0.用Bayer-ADVIA120.说明:虽然大多数仪器都利用了流式细胞技术,但它们在应用的

5、染料,检测技术方面还是有各自的特点.此时生成的网织红细胞很可能在血压的作用下从骨髓经血窦上皮进入血液。CHr(平均网织红细胞血红蛋白量)45这一指标显示出骨髓对贫血的反应,RPI 2表示出骨髓对贫血反应低下或无反应.n说明:虽然大多数仪器都利用了流式细胞技术,但它们在应用的染料,检测技术方面还是有各自的特点.通常荧光的强度,光吸收量,和光散射量与网织细胞的RNA含量成正比.国际常用仪器仪器型号仪器型号处理处理染色染色检测技术检测技术Bayer ADVIA 120活体Oxazine 750光吸收Bayer H*3活体Oxazine 750光吸收Abbott CellDyn CD3200活体新亚甲

6、蓝光散射Abbott CellDyn CD3500活体新亚甲蓝光散射Abbott CellDyn CD3700活体新亚甲蓝光散射Abbott CellDyn CD4000荧光CD4K 530荧光法Becton Dickison ReticCount FACSCount 荧光噻唑橙荧光法Beckman Coulter STKS活体新亚甲蓝VCSBeckman Coulter GENS活体新亚甲蓝VCSSysmex XE2100荧光聚次甲基荧光染料光散射ABX Pentra 120 Retic荧光噻唑橙光散射 ADVIA120测定原理 ADVIA120网织红细胞测定原理n 当一定体积分散的细胞经网

7、织红细胞反应池后,产生低角度(2-3)和高角度(5-15)两组散射光,每个细胞产生的吸收量可被测量.低角度和高角度光散射信号分别代表了细胞体积(Y轴)和血红蛋白浓度(X轴),光吸收量和网织红细胞RNA含量成比例.和成熟RBC相比,网织红细胞吸收了更多的光量.网 织 细 胞 分 布 图ADVIA120的主要网 织 细 胞参数n#Retic,%ReticnCHr(平均网织红细胞血红蛋白量)nCHCMr(平均网织红细胞血红蛋白浓度)nMCVr(平均网织红细胞体积)nL Retic(%,#);M Retic(%,#);H Retic(%,#)n低,中,高吸光强度的网织红细胞.nIRF-H,IRF-M+

8、H不成熟的网织红细胞.其他主要仪器的参数nMFI（平均荧光指数）nRET-Y（Sysmex XE2100）nRPI（网织红细胞生成指数）=ret%/ret成熟天数患者HCT/0.45这一指标显示出骨髓对贫血的反应,RPI2表示出骨髓对贫血反应低下或无反应.nRMI(网织红细胞成熟指数)=(MFR+HFR)/LFRx100网 织 红 细 胞的 临 床 意 义n网织红细胞对贫血的适当反应:贫血的恢复依赖的是加速造血,而这是通过骨髓释放EPO完成的.(最大速度68倍).通过网织红细胞计数可以最原本反应出贫血是由于RBC生成减少或外周血的减少.网织红细胞正常绝对值是2575109/L.而任何大于100

9、109/L都可被看成是骨髓对贫血正常的反应.有无溶血性贫血的可能:胆红素增高程度,红细胞的直接破坏和Hb排泄的增加方面的实验参数是我们应当考虑的.n低值网织红细胞和贫血的关系,并且依据RBC进行分类.低值的网织红细胞主要和正常造血减弱有关,这归结于两类原因:一种是红系原始细胞减少(再生障碍),另一种是红系增生,但由于系无效造血,产生的大量无法生存的RBC不能进入到血循环.依据RBC的MCV,MCH,MCHC可进行分类.比如:小细胞贫血:缺铁性贫血,地中海贫血,HbE综合症.大细胞贫血:巨幼细胞性贫血 正常细胞贫血(最多):类风湿关节炎,慢性病,肾病,和获得性红系再障等.n骨髓移植(BMT):R

10、et(21d)HFR MFR+HFR(13.31d,WBC14.8d)nMDS:MFR暗示RBC规律性恢复的开始.放疗和化疗:可获得细胞毒,副作用或贫血治疗后的信息.HGBEPO 促使干细胞分化HFR释放早于Ret总数.是骨髓受抑制和恢复的敏感指标.n对于贫血的起因有多种分类法,但有两种分类方法是被广泛使用的,一种是以形态学为主,另一种是Kinetic的基于血液形成和破坏的分类法.在许多难以诊断的n病例中,二者兼用.在他的分类中网织红细胞担任重要角色.认为正常人平均RPI为1,当RPI3时表示红细胞生成增加,而RPI2时为生成降低.在RPI23这一区间Kinetic法则还无法确定.网织红细胞的

11、研究进展n无论是流式细胞技术还是新型的网织细胞仪,由于计数方法的改进,简单的标本采集,和大批量的标本分析,它已经向我们提供了一种快速快速,廉价廉价,简单和精确度简单和精确度,准确度准确度较高的实验方法.人们已经从单纯地依据Ret数目,发展到依据其分类及细胞内部含量(如CHr等)研究疾病的过程.研究一研究一:IRF在估计有效造血在贫血病理过在估计有效造血在贫血病理过程中的作用程中的作用132 ARC(82109)IRF(0.23)RPI(2)临床病例 临床意义 2 26 6 (9/27)镰形贫血危象 骨髓造血增强 19 (16/19)甲低,结节病,厌食症造成的营养不良,神经性梅毒 对贫血反应低下

12、或无反应 59 红细胞生成力降低,慢性肾功能不全,厌食症,对贫血反应低下或无反应 28 贫血:急性感染,缺铁性贫血,HIV感染,镰形贫血危象,怀孕,MDS 有待研究贫血起因 研究二研究二:CHr在诊断在诊断 缺铁性贫血中的意义缺铁性贫血中的意义n单纯的血清铁不能完全诊断缺铁,因为在急性反应期它往往是升高或正常.而CHr更直观地反应了细胞状况,它只有在胞膜和胞浆丢失时才发生改变.实验结果显示CHr对照组对于炎症性贫血和非炎症性贫血的患者都有显著差异(P 0.001).ROC曲线也显示出在诊断缺铁性贫血方面.CHr的敏感度和特异性都较好于MCV和血清铁指标.研究三研究三:网织细胞和贫血的诊断网织细

13、胞和贫血的诊断n网织细胞的成熟指数在鉴别诊断大细胞贫血中的应用n这项研究的目的是用网织细胞的参数来鉴别大细胞贫血.网织细胞参数主要是:IRF,MRV,MFI(平均荧光指数).我们知道大细胞贫血通常从病理过程上可以分成两类:由于脂类沉积在细胞膜上引起,n主要指肝病(NMMA).由于无效造血,包括MDS和叶酸和VitB12缺乏的MA.n主要实验结果如下:n为了区别MDS和其他类型的大细胞贫血他计算出90%的可信区间,并把IRF16%,MRV129fl,MFI18定为0.得得分分(IRF+M FI+M R V)M DS(患患 者者 例例数数 和和%)非非 巨巨 幼幼 细细 胞胞 性性 大大 细细 胞

14、胞 贫贫血血(患患 者者 例例 数数 和和%)0 6(17.1)24(80)1 2(5.7)5(16.6)2 13(37.1)1(3.3)3 14(40)0(0)n辅助骨髓穿刺检查辅助骨髓穿刺检查.利于不同实验室之间的标准化利于不同实验室之间的标准化.骨髓移植(BMT):Ret(21d)HFR MFR+HFR(13.单纯的血清铁不能完全诊断缺铁,因为在急性反应期它往往是升高或正常.红细胞生存期延长,另一方面是网织红细胞的凋亡造成了正常或低值的网织红细胞计数.低,中,高吸光强度的网织红细胞.比例:用2%的煌焦油兰染色以滴数计1:5时,网织细胞数开始减少,1:2为最佳.铁三项:SI92mg/dl,

15、TBIC444mg/dl,TS21%,SF2mg/mlRMI(网织红细胞成熟指数)=(MFR+HFR)/LFRx100比例:用2%的煌焦油兰染色以滴数计1:5时,网织细胞数开始减少,1:2为最佳.研究三:网织细胞和贫血的诊断盘:厚1mm,直径19mm,圆玻片上划出格子:大方格内Ret/(小方格内RBCx9)X100%而CHr更直观地反应了细胞状况,它只有在胞膜和胞浆丢失时才发生改变.研究一:IRF在估计有效造血在贫血病理过程中的作用研究一:IRF在估计有效造血在贫血病理过程中的作用普通光学显微镜法:计数1000个RBC中的Ret,以百分数表示.网织细胞的成熟指数在鉴别诊断大细胞贫血中的应用是骨

16、髓受抑制和恢复的敏感指标.利于不同实验室之间的标准化.我们知道大细胞贫血通常从病理过程上可以分成两类:由于脂类沉积在细胞膜上引起,n网织红细胞不成熟部分指数在MDS患者中的升高.n这篇文章的作者把220例正常人和70例MDS患者比较,发现HFR(P0.01),r=(HFR+MFR)/LFR(0.25%vs 0.15,P0.001).MDS通常被认为是一类骨髓中红系受到破坏的慢性非再生性大细胞贫血.一方面由于”幼稚”的网织n红细胞生存期延长,另一方面是网织红细胞的凋亡造成了正常或低值的网织红细胞计数.此时加强造血产生的分类左移的网织红细胞会导致HFRHFR的增加,从而导致网织红细胞绝对计数略增,被自动分析仪识别.这对 MDS诊断有重要意义.研究四研究四:网织细胞和地中海贫血网织细胞和地中海贫血n用CHr和sTfR来反映铁充足状态下杂合型地中海贫血患者红系骨髓活力和血红蛋白合成,及其与基因型和的相关性.n地中海贫血主要可以分为silent,0,+.以往由于技术的局限直接检测肽链合成用以确定基因类型,结果会不稳定.n.n用Bayer-ADVIA120.结果显示sTfR与HbA2和HbF有正相关,而CHr和HbA2有负相关(r=-0.790,P0.00001).也证实了基因的突变程度和血红蛋白合成间的关系从而表明了在确定不同类型地中海贫血的严重度方面的作用