细菌性食物中毒的实验室支持泉州教学课件.ppt

1、细菌性食物中毒的实验室支持泉州市疾控中心泉州市疾控中心 郑友限郑友限食物中毒的概念定义定义：国家标准国家标准(GBl4938)(GBl4938)中界定了食物中毒，中界定了食物中毒，指指摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食品摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食品或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现的非传或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现的非传染性染性(不属于传染病不属于传染病)的急性、亚急性疾病。的急性、亚急性疾病。即食物中毒指通过饮料或食物及其盛具、容器、包装材料进入人即食物中毒指通过饮料或食物及其盛具、容器、包装材料进入人体的某种致病性微生物及其毒素、有害有毒的化学物质体的某种致病

2、性微生物及其毒素、有害有毒的化学物质(包括有毒动包括有毒动植物植物)等引起的，多数是以急性胃肠炎症状为主要特征的一群疾病。等引起的，多数是以急性胃肠炎症状为主要特征的一群疾病。但不包括已知的传染病，寄生虫病、人畜共患性疾病、食物过敏和暴但不包括已知的传染病，寄生虫病、人畜共患性疾病、食物过敏和暴饮暴食所引起的急性胃肠炎等食源性疾病。饮暴食所引起的急性胃肠炎等食源性疾病。食物中毒的特点 食物中毒常呈集体性爆发，其种类很多，病因也很复杂，食物中毒常呈集体性爆发，其种类很多，病因也很复杂，一般具有下列共同特点：一般具有下列共同特点：.潜伏期短，在短时间内可能有很多人同时发病。潜伏期短，在短时间内可能

3、有很多人同时发病。.有相似的临床表现，病人都有大致相同的临床表现。有相似的临床表现，病人都有大致相同的临床表现。.与饮食有关，凡进食某种有毒食品的人大都发病，没与饮食有关，凡进食某种有毒食品的人大都发病，没有进食该种有毒食品的人不发病。发病和食物有明显关系，有进食该种有毒食品的人不发病。发病和食物有明显关系，一旦停止食用这种有毒食品，发病立即停止。一旦停止食用这种有毒食品，发病立即停止。.发病率高、爆发性，人与人不传染，一般没有传染病发病率高、爆发性，人与人不传染，一般没有传染病流行时的余波或拖尾现象。流行时的余波或拖尾现象。(5).(5).发病季节性强，一般多发于发病季节性强，一般多发于4-

4、104-10月份，月份，6-96-9月进入高月进入高峰期。峰期。食物中毒分类一般按病原物质，将食物中毒分为五类。一般按病原物质，将食物中毒分为五类。.细菌性食物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代细菌性食物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代谢产物污染的食物后，所引起的以急性肠胃炎为主要谢产物污染的食物后，所引起的以急性肠胃炎为主要中毒症状的疾病。中毒症状的疾病。.真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒。而引起的食物中毒。.动物性食物中毒：指摄入动物性有毒食品引起的食物动物性食物中毒：指摄入动物性有毒食品引起的食物中毒。中毒

5、。.植物性食物中毒：摄入植物性中毒食品引起的食物中植物性食物中毒：摄入植物性中毒食品引起的食物中毒。毒。.化学性食物中毒：摄入化学性有毒食品引起的食物中化学性食物中毒：摄入化学性有毒食品引起的食物中毒。毒。细菌性食物中毒 细菌性食物中毒细菌性食物中毒：是指人们吃了大量活菌或活菌：是指人们吃了大量活菌或活菌产的毒素养污染的食品所引起的种毒现象。产的毒素养污染的食品所引起的种毒现象。细菌性食物中毒按发病机理又分为感染型食物中细菌性食物中毒按发病机理又分为感染型食物中毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。感染型食物中毒 指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物指食物

6、被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物（包括病原菌和条件致病菌，如沙、志、金、变（包括病原菌和条件致病菌，如沙、志、金、变形、蜡样、副溶、耶尔森、产气荚膜梭菌、枯草形、蜡样、副溶、耶尔森、产气荚膜梭菌、枯草杆菌等）这种含有大量活菌（一般在杆菌等）这种含有大量活菌（一般在10107 7/g/g以上）以上）的食物被摄入机体后，引起一系列消化道症状的的食物被摄入机体后，引起一系列消化道症状的现象，称为感染型食物中毒，此类种毒是由细菌现象，称为感染型食物中毒，此类种毒是由细菌本身引起。本身引起。毒素型食物中毒 食物被能产生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒食物被能产生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭

7、菌等污染，并在适宜的条件下梭菌、产气荚膜梭菌等污染，并在适宜的条件下生长繁殖，产生了某种毒素，这种毒素同污染的生长繁殖，产生了某种毒素，这种毒素同污染的微生物一起或单独随食物被摄入体内，所引起的微生物一起或单独随食物被摄入体内，所引起的一系列的中毒现象，称为毒素型食物中毒。一系列的中毒现象，称为毒素型食物中毒。混合型食物中毒 有的细菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特有的细菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特征，又具有毒素型食物中毒的特征，称为混合型征，又具有毒素型食物中毒的特征，称为混合型食物中毒。如产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌等引食物中毒。如产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌等引起的食物中毒，这种食物中

8、毒在检验时，应得视起的食物中毒，这种食物中毒在检验时，应得视毒素养的检测。毒素养的检测。样 品 采 集标本是进行一切实验室检测的基础；标本是进行一切实验室检测的基础；所有实验室检测的结果都依赖于所得到标本的质所有实验室检测的结果都依赖于所得到标本的质量；量；直接关系到实验室检测的准确性与效率；直接关系到实验室检测的准确性与效率；食物中毒标本的采集原则食物中毒标本的采集原则1 1 典型性原则典型性原则 食物中毒标本的采集不同于卫生评价采样，应根据可疑食食物中毒标本的采集不同于卫生评价采样，应根据可疑食物的性质采集可能含毒最多的标本。物的性质采集可能含毒最多的标本。2 2 适时性原则适时性原则 为

9、了防止可疑食物丢失和被检物质组分发生变化，保证得为了防止可疑食物丢失和被检物质组分发生变化，保证得到正确结论必须尽快采样送检。流调人员到达现场后应及到正确结论必须尽快采样送检。流调人员到达现场后应及时采样送检。时采样送检。3 3 适量性原则适量性原则 由于引起食物中毒的毒物种类繁多，有时需实验室检索的由于引起食物中毒的毒物种类繁多，有时需实验室检索的项目很多，这要求有一定的样本量，在可能的情况下尽量项目很多，这要求有一定的样本量，在可能的情况下尽量多采。多采。采样前的准备(1)人员的准备：人员的准备：一般要指派一般要指派2 2名以上专业人员赶赴名以上专业人员赶赴现场，必要时还需要检验人员和其他

10、部门有关人现场，必要时还需要检验人员和其他部门有关人员协作前往。员协作前往。交通工具准备交通工具准备：在接到疑似食物中毒报告后，在接到疑似食物中毒报告后，在城区在城区1 1小时、郊区小时、郊区2 2小时内到达现场。小时内到达现场。采样前的准备(2)调查采样箱准备：调查采样箱准备：属常用的物品，应提前准备，属常用的物品，应提前准备，定期检查，及时补充。常备以下物品：定期检查，及时补充。常备以下物品：1 1、采样工具：、采样工具：注射器、注射器、肛拭子、消毒棉签肛拭子、消毒棉签、消毒、消毒纱布、调匙、勺子、夹子、镊子、剪刀、酒精灯、纱布、调匙、勺子、夹子、镊子、剪刀、酒精灯、标号用品、标号用品、7

11、5%75%酒精、其他消毒灭菌器具、吸管、酒精、其他消毒灭菌器具、吸管、火柴等。火柴等。2 2、样品容器：、样品容器：灭菌塑料袋灭菌塑料袋、广口瓶、广口瓶、灭菌试管灭菌试管、灭菌粪便盒、样品冷藏设施等。灭菌粪便盒、样品冷藏设施等。采样前的准备(3)现场快速检验、测量设备：现场快速检验、测量设备：食物中毒快速检样箱，食品食物中毒快速检样箱，食品温度测试计、消毒剂浓度检测试纸等。温度测试计、消毒剂浓度检测试纸等。调查用表：调查用表：食物中毒事故个案调查登记表、调查笔录、食物中毒事故个案调查登记表、调查笔录、样品采集记录表、样品送检单、调查结果汇总表、空白样品采集记录表、样品送检单、调查结果汇总表、空

12、白纸等纸等参考资料：参考资料：食物中毒诊断标准、有关卫生部规章、参考食物中毒诊断标准、有关卫生部规章、参考书籍等。书籍等。其它有关物品：其它有关物品：如便携式电脑、手机或对讲机等通讯设如便携式电脑、手机或对讲机等通讯设施以及用于保存运送培养基的冰箱、冰块等施以及用于保存运送培养基的冰箱、冰块等 取证工具：取证工具：照相机、摄像机等照相机、摄像机等采样用容器和试剂要求1.1.采样容器应采用洁净、无色、无毒的聚乙烯塑料或硬质采样容器应采用洁净、无色、无毒的聚乙烯塑料或硬质玻璃（又称硼硅玻璃）。样品瓶必须专瓶专用，切不可玻璃（又称硼硅玻璃）。样品瓶必须专瓶专用，切不可用实验室装过试剂的瓶作采样瓶。用

13、实验室装过试剂的瓶作采样瓶。2.2.用于微生物检验容器基本要求是选耐高温、无毒、耐用用于微生物检验容器基本要求是选耐高温、无毒、耐用材料制成，容器包装好后可防渗漏，能承受空中或地面材料制成，容器包装好后可防渗漏，能承受空中或地面运送过程中可能发生的温度和压力变化。所有采样用具、运送过程中可能发生的温度和压力变化。所有采样用具、容器需严格灭菌，并且不能存放过长时间，防止污染影容器需严格灭菌，并且不能存放过长时间，防止污染影响检验结果。响检验结果。、采样用的生理盐水、运送培养基及有关试剂等都应该采样用的生理盐水、运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜、无菌的要求，同时应符合采样所需要的试剂满足新鲜、

14、无菌的要求，同时应符合采样所需要的试剂量，如运送粪便的培养基为量，如运送粪便的培养基为5ml/5ml/管为宜。管为宜。细菌性食物中毒标本的采集（1）剩余食物剩余食物：采集残余食物时应尽量避免采集不相干的采集残余食物时应尽量避免采集不相干的标本。残余食物用灭菌工具采取，置于灭菌容器内。标本。残余食物用灭菌工具采取，置于灭菌容器内。如无剩余食物，可用灭菌棉拭在可疑食物容器内涂擦，如无剩余食物，可用灭菌棉拭在可疑食物容器内涂擦，置于装有少量生理盐水试管内。体积较大的肉及鱼等，置于装有少量生理盐水试管内。体积较大的肉及鱼等，应将表面烧灼灭菌后割取内部肌肉，置于灭菌容器内。应将表面烧灼灭菌后割取内部肌肉

15、，置于灭菌容器内。可凝的罐头可直接送检，如仅剩余空盒，可将空盒送可凝的罐头可直接送检，如仅剩余空盒，可将空盒送检。检。炊事用具炊事用具：如锅、刀、抹布、砧板等，可用棉试大用如锅、刀、抹布、砧板等，可用棉试大用具上涂擦，置于装有少量生理盐水的试管中。如砧板具上涂擦，置于装有少量生理盐水的试管中。如砧板已洗过，可用刀用力刮取表面层木屑，置于灭菌容器已洗过，可用刀用力刮取表面层木屑，置于灭菌容器中。中。细菌性食物中毒标本的采集（2）粪便、肛拭粪便、肛拭：粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、粘液部分同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、

16、粘液部分3-53-5克、水克、水样便取含絮状物的样便取含絮状物的2-5ml2-5ml，盛于无菌容器中及时送检。，盛于无菌容器中及时送检。若若无法获得粪便无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门入肛门4-5cm4-5cm深处（小儿深处（小儿2-3cm2-3cm），轻轻转动一圈，擦取直），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2 2支肛拭支肛拭 细菌性食物中毒标本的采集

17、（3）呕吐物呕吐物：直接放入无菌容器中及时送检：直接放入无菌容器中及时送检 咽拭样品咽拭样品：采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红：采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红肿处（特别是白膜处），然后将棉签插入肿处（特别是白膜处），然后将棉签插入4-5ml4-5ml生生理盐水中，尾部弃去理盐水中，尾部弃去 血液血液：采集患者急性发病期（：采集患者急性发病期（3 3天内）和恢复期天内）和恢复期（2 2周左右）各周左右）各3ml3ml全血分离血清送检全血分离血清送检检验项目 霍乱弧菌霍乱弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黄金黄色葡萄球菌色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌、沙门菌沙门

18、菌、变形杆菌变形杆菌、致泻性大肠埃希菌致泻性大肠埃希菌、空肠弯曲菌空肠弯曲菌、小肠结肠耶尔小肠结肠耶尔森菌森菌、志贺菌志贺菌、溶血性链球菌溶血性链球菌及及单核细胞增生李单核细胞增生李斯特菌斯特菌等等引起的细菌性食物中毒样品检验引起的细菌性食物中毒样品检验 中毒特征名称常见食物潜伏期病程主要症状重点采集标本沙门氏菌肉蛋类4-48h3-7d恶心 呕吐 腹痛 腹泻发热38-40便 食品 血副溶血弧菌水产品3-24h1-3d呕吐 发热 腹痛以上腹部为主 水样便腹泻便 食品变形杆菌肉蛋及水产品5-18h1-3d恶心 呕吐 腹痛 腹泻发热38左右食品 便致泻性大肠凉拌菜4-44h1-3d呕吐腹痛 腹泻水样

19、便或粘液便 发热39便 食品蜡样芽孢杆菌米饭、肉、乳呕吐型0.5-5h腹泻型8-16h1d恶心 呕吐为主腹痛 腹泻为主食品 呕吐物葡萄球菌肉、乳、蛋2-4h1-2d恶心 频繁剧烈呕吐 腹痛 腹泻食品 呕吐物粪链球菌肉、乳、蛋、冷冻食品5-10h1-2d恶心 呕吐 腹痛 腹泻食品 呕吐物粪便肉毒梭菌罐头、腌制品1-7d2-20d吞咽困难 复视 失音 呼吸困难食品 呕吐物血液1910/28/2022检验宗旨 竭尽全力尽快找到病原体竭尽全力尽快找到病原体 快速、准确快速、准确 可与传统方法可与传统方法不一定完全相同不一定完全相同 检验程序 样品采集样品采集 初步检验初步检验活菌数、直接镜检活菌数、直

20、接镜检(涂片涂片染色染色镜检镜检)各种致病菌荧光各种致病菌荧光PCRPCR筛查筛查 分离培养分离培养 (包括增菌培养和直接平板培养包括增菌培养和直接平板培养)初筛试验初筛试验 纯培养纯培养 全面鉴定（生化试验、血清分型、噬菌体试验等）全面鉴定（生化试验、血清分型、噬菌体试验等）报告报告直接涂片染色镜检 观察存在于检品中特种形态的细菌如观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌、霍乱弧菌、弯曲菌、球菌等弯曲菌、球菌等，为进一步的检验提供有用的信，为进一步的检验提供有用的信息息 检样的处理 病源检样因含较多病原菌而一般无须做预增菌处病源检样因含较多病原菌而一般无须做预增菌处理，但若病源检样为理，但若

21、病源检样为服过抗生素后服过抗生素后采集的检样应采集的检样应按检验项目要求而进行预增菌处理以保护和放大按检验项目要求而进行预增菌处理以保护和放大目的病原菌目的病原菌 直接插入直接插入2ml 2ml 预增管预增管3737预增菌预增菌4 46h6h 直接培养 将无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直将无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直接接种于各相应培养基接接种于各相应培养基 增菌及分离培养 将预增菌处理后的服过抗生素后采集的病源检样将预增菌处理后的服过抗生素后采集的病源检样按检验项目要求接种各相应增菌液进行增菌按检验项目要求接种各相应增菌液进行增菌 增菌培养后接种于各相应选择性培养基进行分离

22、增菌培养后接种于各相应选择性培养基进行分离培养培养初筛试验 克氏双糖克氏双糖/三糖铁三糖铁/肠道综合发酵管肠道综合发酵管1 1、管、管2 2 PCRPCR VIDASVIDAS可疑菌的鉴定 全面生化试验（全面生化试验（APIAPI、ATBATB、VETIKVETIK、IDSIDS、SWFSWF、手、手工鉴定工鉴定等）等）噬菌体试验噬菌体试验 血清分型血清分型 毒素或毒素基因测试毒素或毒素基因测试 毒素或毒素基因测试 霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、EIECEIEC侵袭毒侵袭毒素、素、ETECETEC肠毒素按国标方法进行动物试验或酶联肠毒素按国标方法进行动物试验或

23、酶联免疫试验（免疫试验（VIDASVIDAS等）等）毒素基因测试毒素基因测试：霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒：霍乱弧菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素、致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可用素、致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可用PCRPCR检测，特别是对致泻性大肠埃希菌的定论应以毒检测，特别是对致泻性大肠埃希菌的定论应以毒素或毒素基因为准素或毒素基因为准 患者血清的试验 疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做肥达氏反应，用作辅助诊断肥达氏反应，用作辅助诊断 将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比，4 4倍增长可确

24、诊倍增长可确诊检验结果的判定 应以找到病原体或其毒素为应以找到病原体或其毒素为最终结论最终结论，在，在此之前所有的快速检验方法如此之前所有的快速检验方法如PCRPCR、VIDASVIDAS等得到的结果等得到的结果仅供参考仅供参考 应注意非病源检样与病源检样检出的病原应注意非病源检样与病源检样检出的病原体的体的统一性统一性 检验结果的判定原则（1）多数患者样品中检出的多数患者样品中检出的致病意义明确致病意义明确的细菌在种的细菌在种类、生化和类、生化和/或血清型、毒素型或血清型、毒素型均一致均一致时，可报告时，可报告为细菌性食物中毒的为细菌性食物中毒的病原体病原体检验结果的判定原则（2）非病源检样

25、与病源检样检出占非病源检样与病源检样检出占绝对优势绝对优势但通常但通常致致病意义不甚明确病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时或血清型均一致，同时本次细菌性食物中毒事件中非患者对照标本中未本次细菌性食物中毒事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的的病原体病原体检验结果的判定原则（3）样品中检出的生化、血清符合致泻性大肠艾希菌、金黄色葡萄球菌，一定

26、要以毒素、毒素基因测试阳性为最终结论报告 蜡样芽胞杆菌在非病源检样中须达到105 cfu/g(ml)以上者才有报告价值 细菌检验重要筛检试验 接触酶试验接触酶试验 氧化酶试验氧化酶试验氧化酶试验用于分辨用于分辨G-G-杆菌中肠杆菌科及弧菌科两类细菌杆菌中肠杆菌科及弧菌科两类细菌 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 阳性反应弧菌科阳性反应弧菌科 阴性反应肠杆菌科阴性反应肠杆菌科接触酶试验用于分辨葡萄球菌及链球菌用于分辨葡萄球菌及链球菌 革兰阳性球菌革兰阳性球菌 阳性反应葡萄球菌阳性反应葡萄球菌 阴性反应链球菌阴性反应链球菌沙门氏菌检测沙门氏菌食物中毒主要特征 来源来源:生食和烹饪不完全的食物，生食和烹饪不

27、完全的食物，主要是肉类蛋品。主要是肉类蛋品。症状：症状：恶心呕吐恶心呕吐、胃痛、腹泻、胃痛、腹泻、出冷汗、发烧（出冷汗、发烧（38-4038-40）。）。较重较重者可出现烦躁不安、昏迷、谵语、者可出现烦躁不安、昏迷、谵语、抽搐等中枢神经系统症状，也可抽搐等中枢神经系统症状，也可以出现尿少、尿闭，呼吸困难等以出现尿少、尿闭，呼吸困难等症状。同时还出现面色苍白、口症状。同时还出现面色苍白、口唇青紫、四肢发凉、血压下降等唇青紫、四肢发凉、血压下降等周围循环衰竭症状，甚至休克，周围循环衰竭症状，甚至休克，如不及时救治，最后可因循环衰如不及时救治，最后可因循环衰竭而死亡。竭而死亡。潜伏期一般为潜伏期一般

28、为12123636h h，短者短者6 6h h，长者长者48487272h h。肠热症肠热症-是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。急性肠炎（食物中毒）急性肠炎（食物中毒）-是最常见的沙门杆菌是最常见的沙门杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。等引起。败血症败血症-常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。概况 18801880年发现，至今已有年发现，至今已有

29、26002600种种 有动力有动力（除（除鸡鸡-雏沙门菌雏沙门菌）大多产大多产H H2 2S S （除副甲伤寒（除副甲伤寒沙门菌沙门菌等）等）产酸大多产气产酸大多产气（除伤寒、（除伤寒、鸡鸡-雏沙门菌雏沙门菌）靛基质靛基质-、蔗糖、蔗糖-、乳糖、乳糖-甘露醇甘露醇+符合肠杆菌科特征（葡萄糖符合肠杆菌科特征（葡萄糖+、硝酸盐还原、硝酸盐还原+、氧、氧化酶化酶-）检检 样样25g(ml)25g(ml)样品样品+225mlBPW+225mlBPW1ml+TTB10ml1ml+SC10ml36361 1，8h-18h8h-18hBSXLD(或或HE、显色培养基、显色培养基)挑取可疑菌落挑取可疑菌落 4

30、2 42 1 1，18h24h18h24h 36 36 1 1，18h24h18h24h36 36 1 1，40h48h40h48h36 36 1 1，18h24h18h24h沙沙门门氏氏菌菌检检验验程程序序生化鉴定生化鉴定试剂盒试剂盒或全自动或全自动微生物微生物生化鉴定生化鉴定系统系统+A1A1A2A2A3A3反应反应结果结果与左侧与左侧描述描述不符不符 甘露醇甘露醇+、山梨醇、山梨醇+ONPG-ONPG-沙门氏菌，血清学试验沙门氏菌，血清学试验 非沙门氏菌非沙门氏菌 报报 告告TSI，赖氨酸，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（，靛基质，尿素（pH7.2），），KCN沙门氏菌菌落形态 BS琼脂：培

31、养4048h，菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，光滑、边缘整齐、圆形，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形态成灰绿色菌落，周围培养基不变。HE琼脂：蓝绿色或蓝色，透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂：菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色，带或不带黑色中心。沙门氏菌菌落形态BS亚硫酸铋琼脂（亚硫酸铋琼脂（BS）黑色有金黑色有金属光泽属光泽、棕褐色或灰色棕褐色或灰色，菌，菌落周围培养基可落周围培养基可呈呈黑色或棕色；有些黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色

32、菌株形成灰绿色的的菌落，周围培菌落，周围培养基养基不变。不变。沙门氏菌菌落形态沙门氏菌菌落形态PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 沙门氏菌菌落形态XLDXLD琼脂：粉红色，带或不带黑色中心，琼脂：粉红色，带或不带黑色中心，有有些菌株可呈现大的带光泽的黑些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现色中心，或呈现全部黑色的菌落；有全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中不带黑色中心。心。沙门氏菌菌落形态HEl 沙门氏菌在沙门氏菌在HE琼脂上琼脂上的菌落形态：蓝绿色或蓝的菌落形态：蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；

33、有些菌株为几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黄色，中心黑色或几乎全黑色。黑色。PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 沙门氏菌显色培养基沙门氏菌显色培养基-CHRO生化试验生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面，先在斜面划划线，再于底层穿刺；接种针不线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌要灭菌，直接接直接接种赖氨酸脱种赖氨酸脱羧酶羧酶试验培养基和营试验培养基和营养琼脂平板，养琼脂平板，于于36 1 培养培养18 h24 h，必要时可延长，必要时可延长至至48 h。

34、PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 血清学鉴定血清学鉴定 血清学鉴定中的血清学分型为选择性试验血清学鉴定中的血清学分型为选择性试验项目项目.目前根据对某一特定目前根据对某一特定O抗原共同具有的标准，抗原共同具有的标准，将沙门氏菌属分为将沙门氏菌属分为AZ和和O51 O67共共42个个O群，群，58种种O抗原，抗原，63种种H抗原抗原。到到1987年底为止，已有年底为止，已有2213个血清型。个血清型。我国已发现我国已发现26个菌群、个菌群、161个血清型。个血清型。沙门氏菌的血清分型沙门氏菌的血清分型 沙门氏菌主要有沙门氏菌主要有O和和H两种抗原。少数菌具有表面两种抗

35、原。少数菌具有表面抗原抗原Vi。在这些菌群中，对人致病的沙门氏菌，通常为属在这些菌群中，对人致病的沙门氏菌，通常为属于于AF各各O群的常见菌型。群的常见菌型。故用故用AF多价多价O血清对沙门氏菌进行的菌型鉴定，血清对沙门氏菌进行的菌型鉴定，只是对于只是对于O抗原的第一步鉴定。抗原的第一步鉴定。若待测菌型不属于若待测菌型不属于A到到F群，仍要继续使用其他沙群，仍要继续使用其他沙门氏菌因子血清中的多价门氏菌因子血清中的多价O血清继续鉴定。而在血清继续鉴定。而在确定了所属确定了所属O群之后，还要进行群之后，还要进行H抗原的鉴定。必抗原的鉴定。必要时，还需进行要时，还需进行Vi抗原的鉴定。抗原的鉴定。

36、沙门氏菌血清试验沙门氏菌血清试验致病性的沙门氏菌绝大多数血清归在致病性的沙门氏菌绝大多数血清归在A-F群内，所以检出疑似菌株应先凝集群内，所以检出疑似菌株应先凝集A-F群群O多价多价血清，若凝集可按常见血清，若凝集可按常见O因子检出频率，按照因子检出频率，按照O4O10O9O7O8O19O2O11顺顺序凝集，可节省时间。序凝集，可节省时间。H抗原抗原可先凝集可先凝集H多价多价1H多价多价4，再逐个凝集某个再逐个凝集某个H多价凝集多价凝集所含的所含的H单因子血清。伤寒单因子血清。伤寒和丙型副伤寒杆菌在和丙型副伤寒杆菌在A-F群群多价血清不凝集情况下，还多价血清不凝集情况下，还应做应做Vi血清凝集

37、。血清凝集。P第第1位数位数 第第2位数位数 第第3位数位数第第4位位数数第第5位位数数第第6位位数数第第7位位数数ON ADHGLDCODCCITH U2 RS ETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARA结结O 果果X 判判定定12412 4124124124124124反应反应结果结果 沙沙门门氏氏菌菌应得应得数值数值02412 4000004124104020组合组合编码编码6704752API 20EPDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化鉴定志贺氏菌检测概况 至今已有至今已有4 4群（群（A A、B

38、 B、C C、D D）、）、3232种（种（A-A-痢疾志贺菌痢疾志贺菌1010个个血清型；血清型；B B 福氏志贺菌福氏志贺菌6 6个血清型个血清型+X+X、Y Y变种；变种；C-C-鲍氏鲍氏志贺菌志贺菌1515个血清型、个血清型、D-D-宋内宋内 1 1个血清型，个血清型，S S，R R两相）两相）无动力无动力 乳糖乳糖-（除宋内迟缓发酵（除宋内迟缓发酵+）不产不产H2SH2S 产酸不产气产酸不产气（除（除F6F6产极少量气泡）产极少量气泡）靛基质大多靛基质大多+（宋内（宋内-）、蔗糖）、蔗糖-甘露醇甘露醇+（痢疾志贺菌为（痢疾志贺菌为-）符合肠杆菌科特征（葡萄糖符合肠杆菌科特征（葡萄糖+

39、、硝酸盐还原、硝酸盐还原+、氧化酶、氧化酶-）增菌：用增菌：用GN增菌液使增菌液使处于濒死状态的细菌处于濒死状态的细菌恢复活力恢复活力选择性平板分离培养：选择性平板分离培养：XLD+MAC/显色培显色培养基养基生化试验：可采用生化试验：可采用API 20E或或VITEK2血清学鉴定：特异性血清学鉴定：特异性诊断血清鉴定到种。诊断血清鉴定到种。志贺氏菌操作流程增增 菌菌 培培 养养用志贺氏菌增菌液增菌,41.5，16 h20 h厌氧培养。智能厌氧微需氧培养系统（二）分 离 培 养 取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或R&F志贺氏菌显色培养基平板上 于

40、36 1 培养20 h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。初步生化鉴定 从平板上挑取34个可疑菌落，接种TSI和葡萄糖半固体培养基各一管，36培养1824h。初步生化鉴定TSITSI生长结果（现象）：生长结果（现象）：斜面产碱仍为粉红色或红色；斜面产碱仍为粉红色或红色；底层产酸不产气，变黄色；底层产酸不产气，变黄色；不产硫化氢，不产黑色。不产硫化氢，不产黑色。半固体培养基：半固体培养基：沿线生长，无动力。沿线生长，无动力。初步生化鉴定可弃去地培养物：可弃去地培养物：在在TSITSI表面呈蔓延生长的。表面呈蔓延生长的。18

41、1824h24h内发酵乳糖、庶糖的。内发酵乳糖、庶糖的。不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的。不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的。产气的。产气的。有动力的。有动力的。产硫化氢的。产硫化氢的。血清学分型（选做项目）血清学分型（选做项目）先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则再用相应各群多价血清分别试验。先用B群福氏志贺氏菌多价血清进行实验，如呈现凝集，再用其群和型因子血清分别检查，福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原鉴别见表4。如果B群多价血清不凝集，则用D群宋内氏志贺氏菌血清进行实验，如呈现凝集，则用其相和相血清检查；如果B、D群多价血清都不凝集，则用A群痢疾志贺氏菌多价血

42、清及112各型因子血清检查，如果上述三种多价血清都不凝集，可用C群鲍氏志贺氏菌多价检查，并进一步用118各型因子血清检查。志贺氏菌的志贺氏菌的O抗原抗原 人们原来的认识认为血清学试验是特异性人们原来的认识认为血清学试验是特异性的，但是志贺氏菌的的，但是志贺氏菌的 O抗原和大肠埃希氏抗原和大肠埃希氏菌属关系密切，有半数的菌型与大肠埃希菌属关系密切，有半数的菌型与大肠埃希氏菌的某些氏菌的某些O抗原完全相同。相同抗原菌属抗原完全相同。相同抗原菌属间存在血清交叉凝集反应。因此，生化试间存在血清交叉凝集反应。因此，生化试验对于属的鉴定是非常重要的。验对于属的鉴定是非常重要的。若生化反应符合，而血清四种多

43、价若生化反应符合，而血清四种多价-，考虑：，考虑：A A、C C群志贺菌群志贺菌O O抗原外有抗原外有K K包膜抗原遮蔽，煮沸后包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝再凝 可能是可能是EIECEIEC，再做大生化以鉴别，再做大生化以鉴别 宋内宋内 的的R R相菌，用相菌，用R R相血清凝集相血清凝集 可能是可能是蜂窝哈夫尼亚菌蜂窝哈夫尼亚菌，做大生化以鉴别，做大生化以鉴别 可能是可能是类志贺邻单胞菌类志贺邻单胞菌，观察动力、氧化酶，观察动力、氧化酶报告方式 痢疾志贺菌痢疾志贺菌1 1型型 福氏志贺菌福氏志贺菌2a2a型型 福氏志贺菌福氏志贺菌X X变种变种 鲍氏志贺菌鲍氏志贺菌1313型型 宋内志贺菌宋内志

44、贺菌S S相相福建省福建省福氏志贺菌优势血清型别福氏志贺菌优势血清型别 2005 2005首次检出福氏志贺菌首次检出福氏志贺菌4c4c血清亚型（血清亚型（F4cF4c），），在随后的分离株中在随后的分离株中F4cF4c亚型成为福建省福氏志亚型成为福建省福氏志贺菌分离株的优势血清型贺菌分离株的优势血清型17/40(42.5%)17/40(42.5%)继往流行的福氏继往流行的福氏2a2a、1b 1b 血清亚型分离的菌株血清亚型分离的菌株数却减少数却减少 说明福建省说明福建省福氏志贺菌优势血清型别福氏志贺菌优势血清型别在发生在发生更替更替。金黄色葡萄球菌金葡菌食物中毒主要特征 来源：来源：主要存在于

45、人们的皮肤、主要存在于人们的皮肤、鼻、喉、耳等部位。进食了被鼻、喉、耳等部位。进食了被污染的肉类、乳品、定粉制品。污染的肉类、乳品、定粉制品。症状：症状：恶心、呕吐（频繁而剧恶心、呕吐（频繁而剧烈），腹痛、腹泻，由于剧烈烈），腹痛、腹泻，由于剧烈呕吐和腹泻，可引起大量失水呕吐和腹泻，可引起大量失水而发生外周循环衰竭和虚脱。而发生外周循环衰竭和虚脱。潜伏期：潜伏期：一般一般30min30min6h6h，最最短为短为1515minmin左右，很少有超过左右，很少有超过8 8h h的。的。金黄色葡萄球菌检验流程食物25g+生理盐水225mL，取5mL50mL7.5NaCl肉汤血平板、B-P平板362

46、4h染色镜检血浆凝固酶实验观察菌落形态报告呕吐物、粪便肛拭了、涂抹拭子3个连续稀释度接种B-P平板3648h10mL7.5NaCl肉汤BHI肉汤和营养琼脂斜面金黄色葡萄球菌菌落形态 B-PB-P琼脂：琼脂：菌落圆形、凸起、湿润，直径菌落圆形、凸起、湿润，直径2 23mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈，接种针接触菌落有似奶油至在其外层有一透明圈，接种针接触菌落有似奶油至树胶样硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，树胶样硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品但无混浊带

47、及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。外观可能粗糙并干燥。血平板：血平板：形成较菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、形成较菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。血圈。BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素丙酮酸钠是一种生长促进剂亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株

48、有抑制作用。金黄色葡萄球菌菌落形态完全溶血和不完全溶血血浆凝固酶实验血浆凝固酶实验 可疑菌落可疑菌落1 1个（计数时取个（计数时取5 5个菌落分别接种）个菌落分别接种）5mLBHI5mLBHI和营养琼脂斜面，和营养琼脂斜面，3636培养培养24h0.224h0.20.3mLBHI0.3mLBHI培养物培养物+0.5mL+0.5mL兔血浆兔血浆3636水浴箱或培养箱水浴箱或培养箱每半小时观察一每半小时观察一次次,观察观察6 6小时小时凝固为阳性凝固为阳性,反之为阴性反之为阴性（同时以血浆凝固酶阳性和阴性葡萄球菌（同时以血浆凝固酶阳性和阴性葡萄球菌株的肉汤培养物作对照）。株的肉汤培养物作对照）。4

49、、金黄色葡萄球菌肠毒素的检测、金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 一、动物学试验主要用幼猫和猴。一、动物学试验主要用幼猫和猴。二、血清学试验肠毒素作为抗原，可以二、血清学试验肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合性反应，产生可见和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀。沉淀。用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方法主要有：毒素，方法主要有：1.免疫琼脂扩散法免疫琼脂扩散法 2.反向间接血凝试验反向间接血凝试验 3.免疫荧光法免疫荧光法 4.酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法三、实时荧光定量三、实时荧光定量PCR 副溶血性弧菌 副溶血性弧菌食物中毒是副溶血性弧菌食物中毒是我

50、国沿海地区、我省最常见的我国沿海地区、我省最常见的一种食物中毒一种食物中毒概况 副溶血弧菌副溶血弧菌系系弧菌科弧菌科弧菌属弧菌属，革兰染色阴性，兼性厌氧菌，革兰染色阴性，兼性厌氧菌，为多为多 形态杆菌或稍弯曲弧菌。本菌嗜盐畏酸。最适宜的培养基：形态杆菌或稍弯曲弧菌。本菌嗜盐畏酸。最适宜的培养基：温度为温度为30303737，含盐，含盐2.5%2.5%3%(3%(若盐浓度低于若盐浓度低于0.5%0.5%则则不生长），不生长），pHpH值为值为8.08.08.58.5。本菌对酸较敏感，当。本菌对酸较敏感，当pH6pH6以以下即不能生长，在普通食醋中下即不能生长，在普通食醋中l l一一3min3mi