卫生化学-紫外可见分光光度法课件教案与.ppt

1、12紫外紫外-可见分光光度法（可见分光光度法（ultraviolet-visible ultraviolet-visible spectrophotometry,UV-Visspectrophotometry,UV-Vis）是光谱分析法中是光谱分析法中一种重要的、广泛应用的分析方法。一种重要的、广泛应用的分析方法。光谱分析法（光谱分析法（spectroscopic analysisspectroscopic analysis）：）：是指是指利用物质与辐射能作用时所吸收或发射辐射的利用物质与辐射能作用时所吸收或发射辐射的特征和强度而建立起来的定性、定量及结构分特征和强度而建立起来的定性、定量及结

2、构分析方法。析方法。3如原子吸收分光光度法如原子吸收分光光度法如原子发射光谱法如原子发射光谱法如紫外如紫外-可见、红外可见、红外如分子荧光分析法如分子荧光分析法4紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法是根据物质是根据物质分子分子对紫外或对紫外或可见光区电磁辐射的可见光区电磁辐射的吸收吸收特征和吸收程度建立特征和吸收程度建立起来的分析方法起来的分析方法紫外区波长紫外区波长200200400nm400nm 可见区波长可见区波长400400760nm760nm特点特点灵敏度、准确度高、操作简便快速、应用广泛灵敏度、准确度高、操作简便快速、应用广泛5待测物质6第一节概述一、电磁辐射和电磁波谱一、电磁辐射

3、和电磁波谱 光属于光属于电磁辐射电磁辐射，基本单位是光子，光，基本单位是光子，光子具有波粒二象性：子具有波粒二象性：波动性波动性7光的传播速度：光的传播速度：c c真空中光速真空中光速2.997924582.9979245810108 8 m/sm/sn n折射率，真空中为折射率，真空中为1 1波长，单位：波长，单位：m,cm,mm,m,cm,mm,m,nm,m,nm,（1=101=10-10-10 m m）频率，单位：赫兹频率，单位：赫兹(周周)Hz)Hz 次次/秒秒ncV8光量子，具有能量：光量子，具有能量：h h普朗克普朗克(Planck)(Planck)常数常数6.6266.62610

4、10-34-34 Js Js频率频率E E光量子具有的能量光量子具有的能量 单位：单位：J(J(焦耳焦耳)，eV(eV(电子伏特电子伏特)1 eV=1.602 1 eV=1.6021010-19-19 J J微粒性微粒性hE9结论结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低频率越低)，光量子的能量越低。，光量子的能量越低。单色光：单色光：具有相同能量具有相同能量(相同波长相同波长)的光。的光。混合光：混合光：具有不同能量具有不同能量(不同波长不同波长)的光复合在一的光复合在一起起.例如白光。例如白光。波粒二象性波粒二象性hchE射线射线 X X 射线

5、射线紫外光紫外光可见光可见光红外光红外光微波微波无线电波无线电波1112第二节第二节 基本原理基本原理1.1.紫外紫外-可见吸收光谱的形成可见吸收光谱的形成 当光通过气态、液态或固态的物质时，当光通过气态、液态或固态的物质时，物质分子选择性吸收辐射，产生紫外物质分子选择性吸收辐射，产生紫外-可见可见吸收光谱，又称为分子吸收光谱。吸收光谱，又称为分子吸收光谱。13物质分子内部三种运动状态对应三种能级：物质分子内部三种运动状态对应三种能级：电子绕核运动电子绕核运动（电子跃迁）（电子跃迁）电子能级电子能级E E电电原子在平衡位置上振动原子在平衡位置上振动振动能级振动能级E E振振分子绕轴转动分子绕轴

6、转动（分子转动）（分子转动）转动能级转动能级E E转转转振电EEE远红外吸收光谱红外吸收光谱可见吸收光谱紫外转振电mevEmevEmevE2525005.0005.025.125105.025.106.020114电子基态电子激发态J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 1J J3 3J J2 2J J1 115物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，物质也只能物质也只能选择性地吸收选择性地吸收那些能量相当于该那些能量

7、相当于该分子分子振动能变化振动能变化E Ev v、转动能变化、转动能变化E Er r以及以及电子运动能量变化电子运动能量变化E Ee e的总和的总和E E的辐射。的辐射。由于各种物质分子内部结构的不同，分子的由于各种物质分子内部结构的不同，分子的各种能级之间的间隔也互不相同，这样就决各种能级之间的间隔也互不相同，这样就决定了定了物质对不同波长光线的选择性吸收物质对不同波长光线的选择性吸收。172.2.分子吸收光谱及其特征分子吸收光谱及其特征将不同波长的单色光依次通过一定的溶液，分将不同波长的单色光依次通过一定的溶液，分别测出对各种波长的光的吸收程度（用别测出对各种波长的光的吸收程度（用A A表

8、表示）。示）。以波长为横坐标，吸光程度为纵坐标作图，所以波长为横坐标，吸光程度为纵坐标作图，所得的曲线称为得的曲线称为吸收曲线吸收曲线（absorption curveabsorption curve）或或吸收光谱吸收光谱(absorption spectrum)(absorption spectrum)。18A1920（一）有机化合物的电子跃迁类型（一）有机化合物的电子跃迁类型二、紫外可见吸收光谱与分子结构的关系21按能量大小：按能量大小：*n *n*221.1.*跃迁跃迁饱和烃类（单键，饱和烃类（单键，且都是且都是键）键）吸收光能后吸收光能后多发生此类跃迁，此跃迁所需能量大，（大多发生此类

9、跃迁，此跃迁所需能量大，（大约约350k j/mol350k j/mol键）键）一般吸收一般吸收150 nm 150 nm 的光，属于远紫外区的光，属于远紫外区 （真空紫外区）（真空紫外区）23nn*跃迁跃迁 含有含有杂原子（杂原子（O O、N N、S S、X X）的饱和烃衍）的饱和烃衍生物生物，这些杂原子上的，这些杂原子上的 n n 电子向着电子向着*跃跃迁。吸收波长在迁。吸收波长在200 nm200 nm左右左右 24*此跃迁所需能量小（约此跃迁所需能量小（约200kj/mol200kj/mol键）吸键）吸收波长为收波长为200nm 200nm 左右具有左右具有碳碳碳双键（三键）碳双键（三

10、键）的化合物会发生此类跃迁的化合物会发生此类跃迁孤立的孤立的*跃迁跃迁 吸收波长在吸收波长在160160190nm190nm左右左右.如如 CHCH2 2=CH=CH2 2 maxmax=165nm =10=165nm =104 4共轭双键的共轭双键的*跃迁跃迁 由于由于 与与 键之间相互作用形成离域键，键之间相互作用形成离域键，使使*跃迁所需能量减小，而且共轭键越长跃迁所需能量减小，而且共轭键越长所需能量越小所需能量越小 如丁二烯如丁二烯CHCH2 2=CH-CH=CH=CH-CH=CH2 2 maxmax=217nm,=21000=217nm,=2100025nn*易发生在易发生在含有杂原

11、子的不饱和基团含有杂原子的不饱和基团中，如中，如 C=O C=O、C=S C=S、N=NN=N等化合物。这些杂原等化合物。这些杂原子都有未成键的孤电子对此类跃迁一般在子都有未成键的孤电子对此类跃迁一般在近紫外区（近紫外区（200-400nm200-400nm），但），但小，在小，在1010100100之间之间261 1电荷迁移跃迁（亦称内电荷迁移跃迁（亦称内 oxred oxred 过程）过程）所谓迁移跃迁是指用电磁辐射照射化合物时，电所谓迁移跃迁是指用电磁辐射照射化合物时，电子从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁，过程见下：子从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁，过程见下：NCH3CH3NC H

12、3C H3+CROCRO+_CNSFeCNSFehv23（二）无机化合物的电子跃迁类型（二）无机化合物的电子跃迁类型272 2配位场跃迁配位场跃迁四、五周期中的过渡金属元素分别有四、五周期中的过渡金属元素分别有3d3d和和4d4d轨道，镧系锕系分别含有轨道，镧系锕系分别含有4f4f和和5f5f轨道，轨道，在在配体存在下过渡元素五个能量相等的配体存在下过渡元素五个能量相等的d d轨道和轨道和镧、锕元素七个能量相等的镧、锕元素七个能量相等的f f轨道分别分裂成轨道分别分裂成几组能量不等的几组能量不等的d d轨道及轨道及f f轨道轨道.当它们吸收光当它们吸收光能后，低能态的能后，低能态的d d电子或

13、电子或f f电子可以分别跃迁到电子可以分别跃迁到高能态的高能态的d d轨道及轨道及f f轨道上去。轨道上去。一定要有配体的配位场作用一定要有配体的配位场作用.281生色团（发色团）：能吸收紫外-可见光的基团 有机化合物：具有不饱和键和未成对电子的基团 具n 电子和电子的基团 产生n*跃迁和*跃迁 跃迁E较低例：CC；CO；CN；NN 2 2助色团：本身无紫外吸收，但可以使生助色团：本身无紫外吸收，但可以使生色团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基色团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基团团有机物：连有杂原子的饱和基团有机物：连有杂原子的饱和基团例：例：OHOH，OROR，NHNH，NR2NR2，XX5红移

14、和蓝移：由于化合物结构变化（共轭、引入助色团取代基）或采用不同溶剂后 吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移）32三、光的吸收定律（一）（一）Lambert-BeerLambert-Beer定律定律 一束单色光通过含吸光物质的溶液时一束单色光通过含吸光物质的溶液时I Ia a入射光入射光I I0 0透过光透过光I It t 反射光反射光I Ir rI0Ia+It+Ir Ia+It 由上式可知由上式可知,I,I0 0不变，若不变，若 I Ia a则则I It t,反之亦然反之亦然33我们把：我们把：I It t I I0 0 =T T 称作透光率（

15、度）称作透光率（度）T T 100=T%100=T%称作百分透光率（度）称作百分透光率（度）T T越大，表示溶液对光的吸收越少越大，表示溶液对光的吸收越少T T越小，表示溶液对光的吸收越多越小，表示溶液对光的吸收越多常用吸光度来表示物质对光的吸收程度：常用吸光度来表示物质对光的吸收程度：tIITA0lg1lg34朗伯定律朗伯定律 (1760(1760年年):):A=lg(IA=lg(I0 0/I/It t)=k)=k1 1b b当入射光的当入射光的,吸光物质的吸光物质的c c 一定时一定时,溶液的溶液的吸光度吸光度A A与液层厚度与液层厚度b b成正比。成正比。比尔定律比尔定律(1852(18

16、52年年):):A=lg(I A=lg(I0 0/I/It t)=k)=k2 2c c当入射光的当入射光的,液层厚度液层厚度b b一定时一定时,溶液的吸光溶液的吸光度度A A与吸光物质的与吸光物质的c c成正比。成正比。35朗伯朗伯-比尔定律比尔定律式中：式中：A A：吸光度；：吸光度；:透射率；透射率；b b：液层厚度：液层厚度(光程长度光程长度)，通常以，通常以cmcm为单位；为单位；c c：溶液的浓度，单位：溶液的浓度，单位molLmolL-1-1或或gLgL-1-1；K K：吸光系数：吸光系数意义意义:当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶当一束平行单色光通过均匀、非散射的溶液时，其吸光

17、度与溶液中吸光质点的浓度和吸液时，其吸光度与溶液中吸光质点的浓度和吸收层厚度的乘积成正比收层厚度的乘积成正比.KbcTIIAt1lglg036值得注意的是：值得注意的是：透过率透过率T T与与c c或或b b之间的关系是之间的关系是指数函数指数函数关系关系吸光度吸光度A A与与c c或或b b之间是简单的之间是简单的正比例正比例关系关系37应明确定律的三个应用条件：应明确定律的三个应用条件：1 1）稀溶液（）稀溶液（C C0.01mol/L)0.01mol/L)2 2）入射光为单色光）入射光为单色光3 3）均匀介质，可以为固体、液体和气体）均匀介质，可以为固体、液体和气体吸光度特性吸光度特性加

18、和性：加和性：A A总总=A=A1 1+A+A2 2+A+A3 3+A+A4 4.38吸光系数（AbsorptivityAbsorptivity）cbAabcA bcEA1%1cmMaE 10 101%1cm 39摩尔吸光系数 物理意义：物理意义：当一定波长的单色光通过浓度为当一定波长的单色光通过浓度为1mol/L1mol/L，吸收池厚度为吸收池厚度为1cm1cm的溶液时测得的吸的溶液时测得的吸光度。光度。入射波长不同，入射波长不同，不同不同溶剂不同，溶剂不同，不同不同物质性质不同，物质性质不同，不同不同氯仿465可作为定性依据可作为定性依据41（二）（二）的因素的因素正偏离正偏离负偏离负偏离

19、42 非单色光指的是包含一定波长范围的有限宽非单色光指的是包含一定波长范围的有限宽度的谱带，是以度的谱带，是以（中心吸收波长）为中（中心吸收波长）为中心的一狭窄波长范围的复合光，对于带宽为心的一狭窄波长范围的复合光，对于带宽为（即图中的（即图中的）的单色光，）的单色光，测得的吸光度一般小于测得的吸光度一般小于处的真实吸光度处的真实吸光度值，从而产生负偏离。值，从而产生负偏离。43 若样品不吸收若样品不吸收 I IS S 则（则（I I0 0+I+I s s）（）（I+II+Is s）I I0 0I I，使使A A若样品吸收若样品吸收 I IS S，则反之，则反之，。StSIIIIA0lg44）

20、溶液浓度的影响）溶液浓度的影响45）体系（介质）不均匀的影响）体系（介质）不均匀的影响根据定律的应用条件之三（即均匀介质），根据定律的应用条件之三（即均匀介质），一般真溶液质点小，对光的散射不特别厉害，一般真溶液质点小，对光的散射不特别厉害，但混浊液散射比较突出。但混浊液散射比较突出。解决的办法：用空白做对比。解决的办法：用空白做对比。第三节紫外-可见分光光度计一、分光光度计的主要部件一、分光光度计的主要部件47(可见光区，可见光区，3203202500 nm)2500 nm)(紫外区，紫外区，180180375 nm)375 nm)、氙灯氙灯（紫外、可见光区均可用作光源）（紫外、可见光区均可

21、用作光源）4849单色器作用：将光源辐射的复合光按波的长短顺序色散作用：将光源辐射的复合光按波的长短顺序色散为单色光为单色光包括包括狭缝、准直镜、色散元件狭缝、准直镜、色散元件1)1)狭缝狭缝入口狭缝：限制杂散光的进入入口狭缝：限制杂散光的进入出口狭缝：让色散后所需波长的光通过。出口狭缝：让色散后所需波长的光通过。2 2）准直镜（透镜或反射镜）准直镜（透镜或反射镜）把来自入口狭缝的发散光变成平行光把来自入口狭缝的发散光变成平行光把来自色散元件的平行光聚焦于出口狭缝。把来自色散元件的平行光聚焦于出口狭缝。503 3）色散元件）色散元件常用的色散元件有常用的色散元件有三角棱镜和光栅三角棱镜和光栅棱

22、镜棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同51光栅光栅在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕条痕(600(600，12001200，24002400条条/mm)/mm)，利用光通过光，利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。栅时发生衍射和干涉现象而分光。优点：波长范围宽优点：波长范围宽,色散均匀色散均匀,分辨性能好分辨性能好,使用使用方便方便523吸收池又名又名:比色皿，用于盛待测及参比溶液比色皿，用于盛待测及参比溶液玻璃玻璃能吸收能吸收UVUV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区石英石英不能吸收紫外光

23、，适用于紫外和可见光不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）534检测器作用：是检测通过溶液后的透过光强度作用：是检测通过溶液后的透过光强度（光信号，并把光信号转变成电信号）（光信号，并把光信号转变成电信号）光电管）光电管锑铯作阴极：紫敏锑铯作阴极：紫敏（200200625nm)625nm)银氧化银：红敏银氧化银：红敏（625 625 1000nm)1000nm)90V DC直流放大直流放大阴极阴极R-+光束光束e阳极丝（阳极丝（Ni）抽真空抽真空54）光电倍增管（）光电倍增管（photomultiplier tube,

24、PMTphotomultiplier tube,PMT）石英套石英套光束光束栅极，栅极，Grill阳极阳极屏蔽屏蔽光电倍增管的放大倍数，主要取决于电极间的电压。光电倍增管的放大倍数，主要取决于电极间的电压。55二、分光光度计的类型56单波长单光束分光光度计单波长单光束分光光度计57582 2单波长双光束分光光度计单波长双光束分光光度计596061双波长分光光度计双波长分光光度计6263三种分光光度计的区别第四节 分析条件的选择一、溶剂选择一、溶剂选择1.1.考虑溶剂的截止波长考虑溶剂的截止波长截止波长截止波长：用：用1cm 1cm 光径的吸收池装溶剂，用光径的吸收池装溶剂，用空气为参比，改变照

25、射波长，当吸光度空气为参比，改变照射波长，当吸光度A Al l时，此时的波长称为该溶剂的截止波长。时，此时的波长称为该溶剂的截止波长。在选择测量波长时注意：溶剂必须能让所选在选择测量波长时注意：溶剂必须能让所选择的光透过，即所选波长不能小于溶剂的最择的光透过，即所选波长不能小于溶剂的最低使用波长（低使用波长（截止波长）截止波长）。652.2.考虑溶剂的极性考虑溶剂的极性溶剂的极性对物质的吸收峰位置的影响不同溶剂的极性对物质的吸收峰位置的影响不同 当极性增加时，当极性增加时，*的吸收峰的吸收峰发生长移（红移）发生长移（红移）nn*的吸收峰的吸收峰发生短移（蓝移、紫移）发生短移（蓝移、紫移）66二

26、、显色反应条件的选择二、显色反应条件的选择（一）显色反应及要求（一）显色反应及要求1.1.显色反应显色反应显色剂显色剂：能与无色物质生成有色物质的试：能与无色物质生成有色物质的试剂剂显色反应显色反应：将被测组分转变成有色物质的：将被测组分转变成有色物质的反应反应常见的显色反应常见的显色反应：配位、偶合、氧化还原：配位、偶合、氧化还原反应反应67显色反应的要求显色反应的要求灵敏度高灵敏度高，一般，一般 10 104 4;选择性好选择性好，干扰少；，干扰少；对照性好对照性好：显色剂在测定波长处无明显吸收：显色剂在测定波长处无明显吸收,max 60 nm;max 60 nm;反应生成的有色化合物反应

27、生成的有色化合物组成恒定，稳定组成恒定，稳定;显色条件易于控制，显色条件易于控制，重现性好重现性好68（二）显色反应条件的选择（二）显色反应条件的选择显色剂的用量：显色剂的用量：M M +R MR R MR（待测物）（显色剂）（待测物）（显色剂）（有色物）（有色物）69.溶液的酸度溶液的酸度1 1）酸度对显色剂颜色的影响）酸度对显色剂颜色的影响许多有机显色剂本身就是酸碱指示剂，当溶许多有机显色剂本身就是酸碱指示剂，当溶液酸度改变时，显色剂本身就有颜色变化液酸度改变时，显色剂本身就有颜色变化2 2）酸度对显色反应的影响）酸度对显色反应的影响 70(3)(3)酸度对金属离子存在状态的影响酸度对金属

28、离子存在状态的影响羟基配合物、羟基配合物、多核羟基配合物、碱式盐或氢氧化物沉淀多核羟基配合物、碱式盐或氢氧化物沉淀，713 3显色温度显色温度当温度升高：当温度升高：72A4 4显色时间显色时间.干扰的消除（样品成份较复杂时）干扰的消除（样品成份较复杂时）消除办法有：消除办法有：）加入配合掩蔽剂）加入配合掩蔽剂）加入氧化剂或还）加入氧化剂或还原剂原剂）选择适宜的显色）选择适宜的显色条件，控制酸度条件，控制酸度）分离干扰离子）分离干扰离子7374二、测量条件的选择（一）测量波长的选择（一）测量波长的选择 1 1）maxmax吸光度大，灵敏度高吸光度大，灵敏度高 2 2）若）若maxmax处有干扰

29、，只能遵循处有干扰，只能遵循“吸收大，吸收大，干扰小干扰小”的原则，可选另一灵敏度稍低但的原则，可选另一灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。能避免干扰的入射光波长。75（二）吸光度读数范围的选择（二）吸光度读数范围的选择光度误差：指的是读数误差为单位百分透光光度误差：指的是读数误差为单位百分透光度（度（T%T%=1%1%）时所引起的浓度相对误）时所引起的浓度相对误差（差（CCC C）分光光度计的读数标尺：分光光度计的读数标尺：76由于由于T T 与浓度与浓度c c 不是线性关系，故不同浓度不是线性关系，故不同浓度时的仪器读数误差时的仪器读数误差T T引起的测量误差引起的测量误差c/cc/c不同

30、不同。其中：其中：TT为透光率读数误差为透光率读数误差 T T 为透光率为透光率大多数分光光度计的大多数分光光度计的TT在在0.002 0.002 0.01 0.01 之间。之间。TTTCClg434.077在用分光光度计进行比色测定时，最好控制在：在用分光光度计进行比色测定时，最好控制在：在在 15%15%65%65%A A在在 0.80.80.2 0.2 之内读数比较合适之内读数比较合适而当而当36.8%(T=0.368)36.8%(T=0.368)A=0.4343A=0.4343时，误差最小时，误差最小78（三）参比溶液（三）参比溶液(reference solution)(refere

31、nce solution)的选择的选择也称也称空白溶液空白溶液(blank solution)(blank solution)，作用是调节，作用是调节透光度为透光度为100%,100%,吸光度吸光度有下列几种，应合理选择：有下列几种，应合理选择：）溶剂参比：当溶液中只有待测组分在测定）溶剂参比：当溶液中只有待测组分在测定波长下有吸收，而其他组分均无吸收时，波长下有吸收，而其他组分均无吸收时，可用可用纯溶剂作参比溶液，称为纯溶剂作参比溶液，称为“溶剂空白溶剂空白”。79）试剂参比：）试剂参比：如果除待测组分外，显色剂和其它试剂如果除待测组分外，显色剂和其它试剂在测定条件下也有吸收时，则取与测定试

32、液在测定条件下也有吸收时，则取与测定试液时所用的时所用的显色剂和其它试剂作为参比溶液显色剂和其它试剂作为参比溶液（只是不加待测组分）（只是不加待测组分）试样参比：）试样参比：如果只是试样基体有色，而显色剂无色，如果只是试样基体有色，而显色剂无色，并且也不与试样基体显色，则用并且也不与试样基体显色，则用不加显色剂不加显色剂的试样溶液作为参比溶液的试样溶液作为参比溶液80）平行操作空白：）平行操作空白：在测量波长下，干扰组分与显色剂有反应在测量波长下，干扰组分与显色剂有反应,又又无法掩蔽消除时：无法掩蔽消除时：掩蔽被测组分，再加入显色剂掩蔽被测组分，再加入显色剂,作参比作参比.加入等量干扰组分到空

33、白溶液中加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比作参比.81第五节定性与定量分析一、定性分析一、定性分析1.1.定性鉴别的依据：定性鉴别的依据：光谱特征（光谱形状光谱特征（光谱形状,吸收峰吸收峰数目，吸收峰的波长位置，强度和吸收系数等）数目，吸收峰的波长位置，强度和吸收系数等）2.2.定性分析方法缺陷：定性分析方法缺陷：82定性鉴别的方法：对比法定性鉴别的方法：对比法1 1）对比吸收光谱的一致性）对比吸收光谱的一致性83min%11maxmax，shcmE84二、定量分析及应用示例二、定量分析及应用示例（一）定量分析方法（一）定量分析方法标准曲线法标准曲线法 前提：固定仪器和测定条件前提：固定仪器

34、和测定条件CACKA样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：CAACA85例：例：标液：分别移取标液：分别移取0.02000mg/ml0.02000mg/ml标样标样0 05ml25ml5ml25ml供试液：样品供试液：样品25mg25ml25mg25ml9996.0r162.10105.0CA或求出回归方程：86直接比较法（对照法，外标一点法）直接比较法（对照法，外标一点法）前提：固定仪器和测定条件前提：固定仪器和测定条件 截距为截距为0 0 标样与样品浓度相近标样与样品浓度相近过程：过程：一定一定分别测定分别测定A A样样和和A A标标计算：计算：标样标样标样标样AA

35、CCAACCC CC C练习例：维生素例：维生素B B1212 的水溶液在的水溶液在361nm361nm处的百分吸光系处的百分吸光系数为数为207207，用，用1cm1cm比色池测得某维生素比色池测得某维生素B B1212溶液的溶液的吸光度是吸光度是0.4140.414，求该溶液的浓度，求该溶液的浓度解：mLgmLglEAC/0.20100/00200.01207414.0练习例：精密称取例：精密称取B B1212样品样品25.0mg25.0mg，用水溶液配成用水溶液配成100ml100ml。精密吸取精密吸取10.00ml10.00ml，又置又置100ml100ml容量瓶中，加水至刻容量瓶中，

36、加水至刻度。取此溶液在度。取此溶液在1cm1cm的吸收池中，于的吸收池中，于361nm361nm处测定吸处测定吸光度为光度为0.5070.507，求，求B B1212的百分含量的百分含量解：mLgmLgCi/1045.2100/1045.21207507.053mLgC/1050.2100101001050.252样%0.98%1001050.21045.2%100%5512样CCBi练习例：例：解：%)0.764(591.01001025000.20367255iEAmLmLmLmgmlmLHCL求已知测移取稀至样品稀至吡啶 mLgmLglEACi/1092.7100/1092.776459

37、1.064%0.99%10025010100100.21092.7%100%26样CCii练习解解：%11cmE12000.100120001010%11MEcmmLgmLglETlEACi/10165.3100/10166.311200417.0lglg64mLgC/10000.410022500500.06样%15.79%10010000.410165.3%100%66样样品CCi91双波长分光光度法（等吸收波长法）双波长分光光度法（等吸收波长法）400500600700800050100150200 abA1=Aa1+Ab1A2=Aa2+Ab2A=A1-A2=Aa1+Ab1-Aa2-Ab

38、2Ab2=Ab1A=Aa1-Aa2=（2 1）b ca 双波长法的优点：双波长法的优点：）免了参比液，消除了比色皿所引起的误）免了参比液，消除了比色皿所引起的误差差）免解联立方程（只相对于单波长分次测）免解联立方程（只相对于单波长分次测而言）而言）适合于混浊试样，有效地消除了背景吸）适合于混浊试样，有效地消除了背景吸收（因为收（因为在在1 1 及及2 2处可以抵消）处可以抵消）4.4.导数光谱法（略）导数光谱法（略）5.5.催化动力学分光光度法（略）催化动力学分光光度法（略）优点：优点：）使显色剂溶解度增加）使显色剂溶解度增加）使）使）maxmax红移红移）能改变）能改变pH pH 对配合物的影响对配合物的影响（二）应用示例（自学）