DDIGE(荧光差异双向电泳)总结课件.ppt

1、 杨杨 华华 丽丽November 12th,2015 2-D2-D DIGE DIGEContents2-DE12-D DIGE2Experiment32-D DIGE video41.2-DE1.2-DE1.2-DE2.2-D DIGE荧光差异双向电泳技术（荧光差异双向电泳技术（two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE）2D-DIGE技术技术是一种新出现的荧光标记的定量蛋是一种新出现的荧光标记的定量蛋白质组学技术，它比经典的白质组学技术，它比经典的2-DE具有更高的动力具有更高的动力学范围和灵敏性，是学范围和灵敏性，是2-DE

2、技术技术的成熟与完善的成熟与完善。它它通过三色荧光染料分别对内标和生物样本进行标通过三色荧光染料分别对内标和生物样本进行标记，能够在一张记，能够在一张2D胶上对两个样本的多种蛋白质胶上对两个样本的多种蛋白质进行分离，并分别单独成像，进行分离，并分别单独成像，应用应用DeCyder 2D软件分析图像，得到蛋白表达量的丰度变化，根软件分析图像，得到蛋白表达量的丰度变化，根据数据分析结果准确地发现差异蛋白据数据分析结果准确地发现差异蛋白。常规可检常规可检测到小于测到小于10%的蛋白表达差异而同时统计学可信的蛋白表达差异而同时统计学可信度达到度达到95%。2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2

3、-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGEVirtual elimination of gel:gel variation is induced biological change with statistical accuracy capable of revealing differences in abundance of less than 10%between samples.2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE每个标记蛋白只携带一个染每个标记蛋白只携带一个染料标记，呈现一个蛋白质点料标记

4、，呈现一个蛋白质点2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE2.2-D DIGE12134562.2-D DIGE3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experime

5、nt3.experiment3.experiment4.video2-D DIGE video5.questionv 1.用三色荧光染料标记样品是否会改变蛋白质的分子质量和等电点。用三色荧光染料标记样品是否会改变蛋白质的分子质量和等电点。答：不会。这三种荧光染料是电荷和分子量匹配的，并且都是带一价正电荷，标记答：不会。这三种荧光染料是电荷和分子量匹配的，并且都是带一价正电荷，标记的是蛋白质赖氨酸的的是蛋白质赖氨酸的-氨基。由于氨基。由于-氨基上带有一价正电荷，当染料与蛋白质发生氨基上带有一价正电荷，当染料与蛋白质发生反应时就可以发生电荷取代，所以不会改变各蛋白质的等电点。虽然被标记蛋白质反应时

6、就可以发生电荷取代，所以不会改变各蛋白质的等电点。虽然被标记蛋白质的分子质量有所改变，但样品中所有蛋白质的相对分子质量都等量增加了，所以依的分子质量有所改变，但样品中所有蛋白质的相对分子质量都等量增加了，所以依旧不会影响蛋白质的电泳结果旧不会影响蛋白质的电泳结果 2、在第、在第14张张PPT中，很明显可以看出样品中，很明显可以看出样品4的量要远远大于样品的量要远远大于样品2，但为什，但为什么又说它们的量是一样的呢？么又说它们的量是一样的呢？答：因为在胶答：因为在胶A中样品中样品1与与2的量相对于内标几乎是没有变化的，我们可以粗略的认的量相对于内标几乎是没有变化的，我们可以粗略的认为它们三者均一样。在胶为它们三者均一样。在胶B中我们可以得出样品中我们可以得出样品4与内标一样，而样品与内标一样，而样品3相对于内标相对于内标有所减少。由于胶有所减少。由于胶A与胶与胶B的内标又相同的，所以样品的内标又相同的，所以样品4与样品与样品2的量也是一样的。的量也是一样的。