生化实验-血糖的测定(课堂)课件.pptx

1、血糖的测定血糖的测定12020/3/25u正常人空腹血糖浓度是多少正常人空腹血糖浓度是多少？u为何能保持恒定为何能保持恒定？u糖尿病糖尿病22020/3/25 正常人正常人空腹血糖浓度空腹血糖浓度(fasting plasma glucose,FPG)为为 3.89-6.11 mmol/L。32020/3/25 血糖如何维持稳定？关键酶调节血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节：激素调节。关键酶如何调节：激素调节。常见的升高血糖的激素：胰高血常见的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。糖素、糖皮质激素和肾上腺素。降低血糖的激素：胰岛素降低血糖的激素：胰岛素42020/3/25对

2、糖代谢的调节：对糖代谢的调节：胰岛素促进组织、胰岛素促进组织、细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时，导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时，血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖，引起糖尿病。中将出现糖，引起糖尿病。胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素主要激素52022-11-1562020/3/

3、25 如果调节失衡，结果是什么？高血糖如果调节失衡，结果是什么？高血糖或者低血糖。或者低血糖。低血糖：生理性和病理性。低于低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。高血糖：生理性和病理性。高于高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于。高于8.89 mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖：，出现糖尿。最常见病理性高血糖：糖尿病。糖尿病。糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。糖尿病诊断标准？糖尿病诊断标准？72022-11-15 糖尿病（糖尿病（dia

4、betes）是由遗传因素、免疫）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以征，临床上以高血糖高血糖为主要特点，典型病例可为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三三多一少多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好症状，糖尿病（血糖）一

5、旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。病变，且无法治愈。82022-11-15糖尿病的类型糖尿病的类型型糖尿病型糖尿病又又叫青年发病型糖叫青年发病型糖尿病或胰岛素依耐尿病或胰岛素依耐型糖尿病。型糖尿病。原因原因：胰腺产生胰胰腺产生胰岛素的细胞已经彻岛素的细胞已经彻底损坏底损坏,从而完全失从而完全失去了产生胰岛素的去了产生胰岛素的功能功能.治疗治疗：依赖胰岛素依赖胰岛素治疗。治疗。型糖尿病型糖尿病又又叫非胰岛素依耐叫非胰岛素依耐型糖尿病。型糖尿病。原因：自身能够产原因：自身能够产生胰岛素，但细胞生胰岛素，但细胞无法对其作出反应

6、，无法对其作出反应，使胰岛素无法发挥使胰岛素无法发挥作用。作用。治疗：需要胰岛素治疗：需要胰岛素单独或与口服药联单独或与口服药联合应用的治疗合应用的治疗92022-11-15102022-11-15 一般正常人进食后血糖都会一般正常人进食后血糖都会暂时性升高暂时性升高，进食后进食后30分种或分种或60分种可升到最高峰分种可升到最高峰，但，但血糖一般不超过血糖一般不超过8.9 mmol/L；进食进食2小时后小时后又会回到空腹水平又会回到空腹水平，这就是人体对糖的耐，这就是人体对糖的耐受现象。受现象。什么是口服葡萄糖耐量试验（什么是口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance

7、test，OGTT）？）？有何临床意义？有何临床意义？112020/3/25 口服葡萄糖耐量试验（口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose Oral glucose tolerance testtolerance test，OGTTOGTT）是一种口服葡是一种口服葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力。萄糖后的血糖调节能力。通过通过OGTTOGTT试验，可以试验，可以早期发现糖代谢异早期发现糖代谢异常，早期诊断常，早期诊断糖尿病糖尿病(Diabetes(Diabetes Mellitus,DM)Mellitus,DM)，是一种简单、快捷的

8、是一种简单、快捷的诊断方法。诊断方法。122020/3/25 实验前三天，受试者每日食物中糖含实验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于量不应低于150g，且维持正常活动，影响，且维持正常活动，影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹腹10-15h。空腹取血后，5分钟内饮入250ml含75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过75g。服糖后半小时，半小时，1小时，小时，2小时，小时，3小时小时各抽血一次，作血糖定量检测。各抽血一次，作血糖定量检测。于采血同时，每隔1小时留取尿液作尿糖试验，整个过程不可吸烟，喝咖啡

9、，喝茶或进食。OGTT方法：方法：WTO标准化标准化132020/3/25 测试前禁食测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然后成人口服后成人口服75 g无水葡萄糖，溶于无水葡萄糖，溶于250 ml水水中，中，510分钟内饮完。饮后分钟内饮完。饮后2小时抽静脉血小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。，测静脉血浆葡萄糖。142020/3/25IFG 与 IGT 空腹血糖损伤空腹血糖损伤(Impaired Fasting Glucose,IFG)：空腹血糖：空腹血糖6.1mmol/L,但但7.0mmol/L

10、糖耐量受损糖耐量受损(Impaired Glucose Tolerance,IGT)：餐后：餐后2h血糖血糖7.8mmol/L,但但11.1mmol/L IFG 和和IGT可以说是一种可以说是一种正常人向糖尿正常人向糖尿病的过渡状态病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是，这部分人虽然现在还不是糖尿病，糖尿病，但是将来发生但是将来发生2型糖尿病的危险型糖尿病的危险性非常高，可以说是性非常高，可以说是糖尿病的后备军糖尿病的后备军。据。据有关研究报道，每年有关研究报道，每年5-8%的的IGT者将发展者将发展成为成为2型糖尿病。型糖尿病。152020/3/25 无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常无糖尿病史

11、，空腹或者随机血糖异常 无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿 无糖尿病史，有明显糖尿病家族史无糖尿病史，有明显糖尿病家族史 有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖不够标准不够标准 分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史的个体的个体 不明原因肾病和视网膜病不明原因肾病和视网膜病 妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者妊娠期、甲亢、感染期出现糖尿者OGTT的适应症162022-11-15血糖测定方法血糖测定方法 无机化学法：如无机化学法：如Folin-Wu法法 有机化学法：如邻甲苯胺法有机化学法：如邻甲苯胺法 酶法：己糖激酶法

12、，酶法：己糖激酶法，酶酶法：葡萄糖氧化酶法法：葡萄糖氧化酶法172020/3/25原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 CuCu2+2+还原成还原成CuCu+，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量的含量 稳定、准确、稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。还原物质的影响。空腹正常血糖参考值空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L 4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL80-

13、120mg/dL无机化学无机化学法：法：Folin-WuFolin-Wu法法182022-11-15有机化学法：邻甲苯胺法有机化学法：邻甲苯胺法 原理：原理：葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟羟甲基甲基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。碱。Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法不受血液中其他

14、还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。192022-11-15酶法：己糖激酶法（酶法：己糖激酶法（Hexokinase,HK）n原理：原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。n评价评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵试剂较贵。202022-11-15酶法：葡萄糖氧化酶法（酶法：葡萄糖氧

15、化酶法（glucose oxidase,GOD）葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水利用氧和水将葡萄糖氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸化为葡萄糖酸，并释放，并释放过氧化氢过氧化氢。过氧化氢过氧化氢在过氧化物酶在过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水作用下，分解为水和氧的同时将无色的和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的红色的醌类化合物醌类化合物。红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。处

16、测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。212022-11-15葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理过氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 红色醌式物质红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶（POD）Trinder反应反应505nm光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度222022-11-15实实验试剂验试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液(pH7.0)酶试剂酶试剂 取过氧化物酶取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安

17、替比林氨基安替比林10mg，叠氮化钠，叠氮化钠100mg，溶于磷，溶于磷酸缓冲液酸缓冲液80ml中，定容至中，定容至100ml，置，置4保存保存酚溶液酚溶液 称取重蒸馏酚称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水溶于蒸馏水100ml中，中，用棕色瓶贮存。用棕色瓶贮存。酶酶酚混合试剂酚混合试剂 将酶试剂和酚试剂等量混合，将酶试剂和酚试剂等量混合，4 下下可存放可存放1个月。个月。葡萄糖标准工作液：葡萄糖标准工作液：5mmol/L 232020/3/25实验操作实验操作加入物 BST血清(ml)0.01葡萄糖标准液(ml)0.01蒸馏水(ml)0.01工作液(ml)1.01.01.0 混匀，置混匀，置 37

18、 37 水浴保温水浴保温 1515分钟，分钟，每管加蒸馏水每管加蒸馏水0.5 ml0.5 ml，在，在510nm510nm波长处比色，以空白管（波长处比色，以空白管（B B管）调零，读取各管吸光度。管）调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度根据各管吸光度计算其血糖浓度计算其血糖浓度。242020/3/25葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。酶反应，造成结

19、果假性偏低。对于血液样品需及时分离红细胞。因对于血液样品需及时分离红细胞。因为红细胞的酵解将会导致测定结果偏为红细胞的酵解将会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。抗凝剂以抑制糖酵解。注意事项注意事项252020/3/25严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。，然后在进行测定。酶酚混合液一般现用现配。酶酚混合液一般现用现配。葡萄糖氧化酶对葡萄糖氧化酶对 -D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约萄糖约 36%为为 型，型，64%为为 型。葡萄糖

20、的完全氧型。葡萄糖的完全氧化需要化需要 型到型到 型的变旋反应型的变旋反应。葡萄糖。葡萄糖变旋酶，可变旋酶，可加速这一加速这一反应反应，延长延长孵育时间可达到完成自发变旋孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型，故须放型，故须放置置 2h 以上以上(最好过夜最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。，待变旋平衡后方可应用。注意事项注意事项262022-11-15计算：计算：葡萄糖标准液：葡萄糖标准液：5 mmol/L5 mmol/L 血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/Lmmol/L）=A=AT T/A/AS S C CS S参考值：参考值：3.96

21、.1 mmol/L272020/3/25不同检测方法所提供的空腹正常血糖不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在参考值存在差异。差异。葡萄糖葡萄糖氧化酶氧化酶法法：3.93.96.1mmol/L6.1mmol/LFolin-WuFolin-Wu法法：4.44.46.7mmol/L6.7mmol/L邻邻-甲苯胺甲苯胺法法：3.93.96.1mmol/L6.1mmol/L282022-11-15本法测定葡萄糖非常特异，从原理反本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步的第

22、二步。一些还原性物质如尿酸、一些还原性物质如尿酸、维生素维生素 C、胆红素和谷胱甘肽等，可、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低生竞争性抑制，使测定结果偏低。但。但是对测定结果无显著影响。是对测定结果无显著影响。实验误差分析：实验误差分析：292022-11-15葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。糖的真实含量，且已推广出试剂盒

23、，广泛应用与临床。Folin-WuFolin-Wu法法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考值较其他方法略物质，故该法其参考值较其他方法略高高。邻邻-甲苯胺法甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且邻甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性，且邻甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性，临床和科研上已很少采用。临床和科研上已很少采用。血糖测定方法特点血糖测定方法特点302022-11-15312020/3/25322022-11-15